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scBsAb1/17双特异性抗体对小鼠类风湿性关节炎模型的治疗效果 被引量：5
1
作者 齐剑英 郭茉 +7 位作者 叶贤龙 阚方明 张宇 郝智超 徐黎明 任桂萍 王文飞 李德山 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期366-371,共6页
目的比较不同剂量scBsAb1/17对Ⅱ型胶原(CII)诱导类风湿性关节炎(CIA)模型小鼠的治疗效果,及scBsAb1/17双特异性抗体与单价抗体(anti-IL-1βscFv和anti-IL-17scFv)在CIA模型小鼠中的治疗效果。方法利用CII建立小鼠类风湿性关节炎模型,... 目的比较不同剂量scBsAb1/17对Ⅱ型胶原(CII)诱导类风湿性关节炎(CIA)模型小鼠的治疗效果,及scBsAb1/17双特异性抗体与单价抗体(anti-IL-1βscFv和anti-IL-17scFv)在CIA模型小鼠中的治疗效果。方法利用CII建立小鼠类风湿性关节炎模型,小鼠成模后开始治疗,每2 d给药1次,治疗29 d。治疗结束后对小鼠关节炎指数进行临床评分,检测各组小鼠血清中CII抗体、CII特异性刺激的脾细胞增殖指数和脾脏中IL-2、IL-1β、IFN-γ、IL-6和TNF-α等细胞因子的表达水平。结果与CIA模型对照组相比,所有治疗组都能明显减轻CIA小鼠的临床症状,并明显降低血清中CII抗体水平、脾细胞增殖指数及脾脏中TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达量。相同剂量下scBsAb1/17治疗组的脾细胞增殖指数明显低于anti-IL-1βscFv治疗组(P<0.05);并且scBsAb1/17治疗组小鼠脾脏中IL-6、IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达量明显低于anti-IL-1βscFv和anti-IL-17AscFv单独治疗组(P<0.01或P<0.05)。结论 scBsAb1/17及单价抗体对CIA模型小鼠都有治疗效果;不同剂量scBsAb1/17对CIA模型鼠的治疗效果呈剂量依赖性;相同剂量条件下,scBsAb1/17的治疗效果要优于单价抗体。 展开更多
关键词 双特异抗体 单价抗体 类风湿性关节炎(RA) Ⅱ型胶原(CII) IL-1Β IL-17A
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FGF21-L-Fc融合蛋白表达及其降糖作用初步评价 被引量：4
2
作者 姚文兵 任桂萍 +5 位作者 韩阳 曹宏伟 高红梅 阚方明 王琪 李德山 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期787-792,共6页
成纤维细胞生长因子-21(FGF21)是FGF家族成员之一,最近发现具有独立调节血糖的作用。为了提高FGF21稳定性来达到更好的药效,通过柔性接头连接,制备重组融合蛋白FGF21-L-Fc,并对其生物学活性和体内药效学进行初步研究。纯化后的FGF21-L-F... 成纤维细胞生长因子-21(FGF21)是FGF家族成员之一,最近发现具有独立调节血糖的作用。为了提高FGF21稳定性来达到更好的药效,通过柔性接头连接,制备重组融合蛋白FGF21-L-Fc,并对其生物学活性和体内药效学进行初步研究。纯化后的FGF21-L-Fc融合蛋白经鉴定,其分子量和特异性均与理论值相符。经微量化的GOD-POD法检测表明,FGF21-L-Fc融合蛋白能刺激体外培养的已分化成熟的3T3-L1脂肪细胞葡萄糖吸收,其葡萄糖消耗率与野生型相比有很大提高;在STZ造模糖尿病小鼠体内,其药效比野生型持续时间长。结果表明,改造的蛋白比野生型药效更持久,为以后FGF21的临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 FGF21-L-Fc 葡萄糖吸收 稳定性
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抗IL-1βscfv抗体与TNF—α可溶性受体融合蛋白的构建及其生物学活性分析 被引量：2
3
作者 阚方明 任桂萍 +5 位作者 郭茉 韩阳 齐剑英 张宇 张雅坤 李德山 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期855-860,共6页
目的设计原核表达抗人白细胞介素．1B单链抗体（IL-1βscfv）与TNF．仪可溶性受体的融合蛋白，并分析其生物学活性，为类风湿关节炎的治疗提供新的候选药物。方法利用RT-PCR方法从HeLa细胞总RNA中扩增了人肿瘤坏死因子I型受体胞外区基... 目的设计原核表达抗人白细胞介素．1B单链抗体（IL-1βscfv）与TNF．仪可溶性受体的融合蛋白，并分析其生物学活性，为类风湿关节炎的治疗提供新的候选药物。方法利用RT-PCR方法从HeLa细胞总RNA中扩增了人肿瘤坏死因子I型受体胞外区基因片段，与抗人IL-1βscfv通过抗体铰链区融合，克隆至pET27b（＋）表达载体中，构建成pET-IL-1scfv：TNFR1质粒；转化大肠杆菌Rosetta进行表达。从包涵体中纯化得到IL-1scfv：TNFR1蛋白，进行IL-1scfv：TNFR1的鉴定及活性检测。结果ELISA结果证明，IL-1scfv：TNFRl可以分别结合hIL-1β和hTNF-α，并呈现剂量依赖性，表明IL-1scfv：TNFR1的单链抗体部分和可溶性受体部分可以各自形成正确的空间构象；免疫斑点分析证明，IL-1scfv：TNFRl与hTNF—α结合后仍可以结合hIL-1β，具有同时结合hlL-1β和hTNF-α的两种靶分子的能力，表明IL-1scfv：TNFR1的两个部分不会相互影响与靶分子的结合。活性测定结果表明，IL-1scfv：TNFRl可以有效封闭肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒效应，具有显著抑制hlL-1β促进L929细胞增殖的活性，IL-1scfv：TNFR1对两种靶分子的拮抗作用均呈现明显的剂量依赖性。结论成功构建了能够同时结合hIL-1β和hTNF-α两种靶因子的双特异性IL-1scfv：TNFR1融合蛋白，并能有效抑制hTNF-α和IL-1β的生物活性，为类风湿关节炎的治疗提供新的候选药物。 展开更多
关键词 白细胞介素1Β 肿瘤坏死因子Α 可溶性肿瘤坏死因子受体1 类风湿关节炎
原文传递
具有中和活性的抗人IL-1β单链抗体的构建 被引量：1
4
作者 李宁 徐黎明 +8 位作者 李天鹤 任桂萍 陈睿 张宇 阚方明 叶贤龙 谷学佳 丁良君 李德山 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期594-598,共5页
目的构建抗人IL-1β单链抗体(anti-hIL-1βscFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行生物学活性检测。方法使用PCR的方法从含有抗人IL-1β抗体基因的质粒中获得抗人IL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b中,构建重组表达载... 目的构建抗人IL-1β单链抗体(anti-hIL-1βscFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行生物学活性检测。方法使用PCR的方法从含有抗人IL-1β抗体基因的质粒中获得抗人IL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b中,构建重组表达载体pET-27b-hIL-1βscFv。将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后诱导表达,经凝胶过滤色谱柱上复性得到可溶的抗人IL-1β的scFv蛋白。使用ELISA方法鉴定scFv抗体的特异性结合活性,使用Real time-PCR的方法检测scFv抗体的中和活性。结果成功地对抗人IL-1β单链抗体进行诱导、表达和复性,蛋白相对分子质量约为28 000。ELISA结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力。Real time-PCR实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断人IL-1β刺激人T细胞表达细胞因子IL-18及IL-1β的作用。结论通过原核表达系统得到的抗人IL-1β单链抗体经复性后,与人IL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和活性,为进一步研究人IL-1β相关疾病及其治疗性抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 IL-1Β 单链抗体 包涵体复性 中和活性 Realtime-PCR
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