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抗新型鸭细小病毒卵黄抗体的制备、纯化及效价测定
被引量：
3
1
作者
刘铭
闫
祖杰
+2 位作者
蒲桂婷
袁万哲
刘聚祥
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第10期121-124,共4页
为了制备抗新型鸭细小病毒卵黄抗体并改良其制备工艺,试验采用新型鸭细小病毒SD株尿囊液制备的油乳剂灭活苗免疫产蛋鸡,收取高免蛋分别用氯仿法、辛酸法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对其中的卵黄抗体进行提纯,比较提纯效果,然后采用SDS-P...
为了制备抗新型鸭细小病毒卵黄抗体并改良其制备工艺,试验采用新型鸭细小病毒SD株尿囊液制备的油乳剂灭活苗免疫产蛋鸡,收取高免蛋分别用氯仿法、辛酸法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对其中的卵黄抗体进行提纯,比较提纯效果,然后采用SDS-PAGE和Western-blot法对制备效果进行评价,采用鸭细小病毒抗体酶联免疫检测试剂盒进行效价测定,分析卵黄抗体的消长规律。结果表明:氯仿法提取的卵黄抗体浓度为4.512 mg/mL,透明,呈浅黄色;辛酸法提取的卵黄抗体液浓度为3.422 mg/mL,半透明,呈浅白色;水稀释-硫酸铵二次沉淀法提取的卵黄抗体浓度为3.837 mg/mL,透明,澄清。SDS-PAGE结果显示卵黄抗体有两条特异性条带,一条重链(约为65 ku)和一条轻链(约为33 ku)。制备的卵黄抗体具有特异性。试剂盒测定卵黄抗体效价,氯仿法为1∶6 000;辛酸法为1∶8 000;水稀释-硫酸铵二次沉淀法最高,为1∶10 000,其中水稀释-硫酸铵二次沉淀法效果较优。说明本试验成功制备了新型鸭细小病毒的卵黄抗体。
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关键词
鸭短喙-侏儒综合征
新型鸭细小病毒
卵黄抗体
纯化
效价测定
原文传递
鸭圆环病毒无核定位信号衣壳蛋白的原核表达及其在间接ELISA中的应用
被引量：
1
2
作者
黄冠翔
闫
祖杰
+2 位作者
李志要
段进坤
鲍恩东
《畜牧与兽医》
CAS
北大核心
2023年第5期75-80,共6页
鸭圆环病毒(DuCV)是一种具有长期免疫抑制特性的病原体,其Cap蛋白是DuCV的主要结构蛋白和主要免疫保护抗原,构成病毒的核衣壳,对DuCV的血清学诊断具有重要意义。为了开发出适合DuCV的检测方法,本研究在重组Rosetta大肠杆菌细胞内对无核...
鸭圆环病毒(DuCV)是一种具有长期免疫抑制特性的病原体,其Cap蛋白是DuCV的主要结构蛋白和主要免疫保护抗原,构成病毒的核衣壳,对DuCV的血清学诊断具有重要意义。为了开发出适合DuCV的检测方法,本研究在重组Rosetta大肠杆菌细胞内对无核定位信号的DuCV Cap蛋白进行了表达,建立了基于无核定位信号Cap蛋白检测DuCV血清抗体的间接ELISA方法(Cap-ELISA)。结果:Cap-ELISA包被抗原的最佳浓度为280 ng/孔,血清稀释比为1∶1600;检测样本的阴阳临界值为0.339,灵敏度达到1∶12800,并对DuCV抗体检测具有特异性;与常规PCR方法的符合率为92.7%,用Cap-ELISA对山东部分地区的樱桃谷鸭血清进行了间接ELISA检测,总阳性率为88.9%,说明该方法适合在DuCV血清学诊断中应用。
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关键词
鸭圆环病毒
衣壳蛋白
原核表达
间接ELISA
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职称材料
猪链球菌2型、7型及9型小鼠感染模型的初步建立
3
作者
闫
祖杰
潘如意
+7 位作者
张俊杰
马晓春
魏建超
李蓓蓓
刘珂
邱亚峰
马志永
刘聚祥
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2023年第4期150-157,共8页
本实验为了研究猪链球菌2型(SS2)、猪链球菌7型(SS7)及猪链球菌9型(SS9)菌株对BALB/c小鼠的致病性,探究BALB/c小鼠作为猪链球菌动物感染模型的可行性以及作为后续实验的依据的可靠性。本研究通过腹腔注射猪链球菌感染BALB/c小鼠,对死亡...
本实验为了研究猪链球菌2型(SS2)、猪链球菌7型(SS7)及猪链球菌9型(SS9)菌株对BALB/c小鼠的致病性,探究BALB/c小鼠作为猪链球菌动物感染模型的可行性以及作为后续实验的依据的可靠性。本研究通过腹腔注射猪链球菌感染BALB/c小鼠,对死亡小鼠进行无菌解剖分离菌株并培养,对培养的菌株进行革兰氏染色法和PCR鉴定;同时利用荧光定量的方法检测各个脏器细菌的载量和组织切片HE染色观察脏器的病理变化。实验结果显示:攻毒的小鼠出现典型的临床症状并死亡,经过实验验证后确定小鼠是由于感染猪链球菌而致病、致死;测定SS2、SS7及SS9的LD_(50)分别为3.7×10^(7)、4.1×10^(7)、7.9×10^(7) CFU/mL。因此BALB/c小鼠对猪链球菌易感,可以作为实验室研究猪链球菌良好的实验动物。
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关键词
猪链球菌
BALB/C小鼠
动物模型
荧光定量
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职称材料
题名
抗新型鸭细小病毒卵黄抗体的制备、纯化及效价测定
被引量：
3
1
作者
刘铭
闫
祖杰
蒲桂婷
袁万哲
刘聚祥
机构
河北农业大学动物医学院
出处
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第10期121-124,共4页
基金
河北省农业关键共性技术攻关专项(18227517D)
河北省现代农业产业技术体系蛋肉鸡产业创新团队项目(HBCT2018150210)。
文摘
为了制备抗新型鸭细小病毒卵黄抗体并改良其制备工艺,试验采用新型鸭细小病毒SD株尿囊液制备的油乳剂灭活苗免疫产蛋鸡,收取高免蛋分别用氯仿法、辛酸法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对其中的卵黄抗体进行提纯,比较提纯效果,然后采用SDS-PAGE和Western-blot法对制备效果进行评价,采用鸭细小病毒抗体酶联免疫检测试剂盒进行效价测定,分析卵黄抗体的消长规律。结果表明:氯仿法提取的卵黄抗体浓度为4.512 mg/mL,透明,呈浅黄色;辛酸法提取的卵黄抗体液浓度为3.422 mg/mL,半透明,呈浅白色;水稀释-硫酸铵二次沉淀法提取的卵黄抗体浓度为3.837 mg/mL,透明,澄清。SDS-PAGE结果显示卵黄抗体有两条特异性条带,一条重链(约为65 ku)和一条轻链(约为33 ku)。制备的卵黄抗体具有特异性。试剂盒测定卵黄抗体效价,氯仿法为1∶6 000;辛酸法为1∶8 000;水稀释-硫酸铵二次沉淀法最高,为1∶10 000,其中水稀释-硫酸铵二次沉淀法效果较优。说明本试验成功制备了新型鸭细小病毒的卵黄抗体。
关键词
鸭短喙-侏儒综合征
新型鸭细小病毒
卵黄抗体
纯化
效价测定
分类号
S852.43 [农业科学—基础兽医学]
S852.65 [农业科学—兽医学]
原文传递
题名
鸭圆环病毒无核定位信号衣壳蛋白的原核表达及其在间接ELISA中的应用
被引量：
1
2
作者
黄冠翔
闫
祖杰
李志要
段进坤
鲍恩东
机构
南京农业大学动物医学院
天津瑞普生物技术股份有限公司生物制品研究院
出处
《畜牧与兽医》
CAS
北大核心
2023年第5期75-80,共6页
基金
江苏省农业科技自主创新资金[CX(22)2016]。
文摘
鸭圆环病毒(DuCV)是一种具有长期免疫抑制特性的病原体,其Cap蛋白是DuCV的主要结构蛋白和主要免疫保护抗原,构成病毒的核衣壳,对DuCV的血清学诊断具有重要意义。为了开发出适合DuCV的检测方法,本研究在重组Rosetta大肠杆菌细胞内对无核定位信号的DuCV Cap蛋白进行了表达,建立了基于无核定位信号Cap蛋白检测DuCV血清抗体的间接ELISA方法(Cap-ELISA)。结果:Cap-ELISA包被抗原的最佳浓度为280 ng/孔,血清稀释比为1∶1600;检测样本的阴阳临界值为0.339,灵敏度达到1∶12800,并对DuCV抗体检测具有特异性;与常规PCR方法的符合率为92.7%,用Cap-ELISA对山东部分地区的樱桃谷鸭血清进行了间接ELISA检测,总阳性率为88.9%,说明该方法适合在DuCV血清学诊断中应用。
关键词
鸭圆环病毒
衣壳蛋白
原核表达
间接ELISA
Keywords
duck circovirus
cap protein
prokaryotic expression
indirect ELISA
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
猪链球菌2型、7型及9型小鼠感染模型的初步建立
3
作者
闫
祖杰
潘如意
张俊杰
马晓春
魏建超
李蓓蓓
刘珂
邱亚峰
马志永
刘聚祥
机构
河北农业大学动物医学院
中国农业科学院上海兽医研究所
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2023年第4期150-157,共8页
基金
中国科学技术交流中心(0301001999302)。
文摘
本实验为了研究猪链球菌2型(SS2)、猪链球菌7型(SS7)及猪链球菌9型(SS9)菌株对BALB/c小鼠的致病性,探究BALB/c小鼠作为猪链球菌动物感染模型的可行性以及作为后续实验的依据的可靠性。本研究通过腹腔注射猪链球菌感染BALB/c小鼠,对死亡小鼠进行无菌解剖分离菌株并培养,对培养的菌株进行革兰氏染色法和PCR鉴定;同时利用荧光定量的方法检测各个脏器细菌的载量和组织切片HE染色观察脏器的病理变化。实验结果显示:攻毒的小鼠出现典型的临床症状并死亡,经过实验验证后确定小鼠是由于感染猪链球菌而致病、致死;测定SS2、SS7及SS9的LD_(50)分别为3.7×10^(7)、4.1×10^(7)、7.9×10^(7) CFU/mL。因此BALB/c小鼠对猪链球菌易感,可以作为实验室研究猪链球菌良好的实验动物。
关键词
猪链球菌
BALB/C小鼠
动物模型
荧光定量
Keywords
Streptococcussuis
BALB/c mice
animal models
real-time quantitative PCR
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗新型鸭细小病毒卵黄抗体的制备、纯化及效价测定
刘铭
闫
祖杰
蒲桂婷
袁万哲
刘聚祥
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020
3
原文传递
2
鸭圆环病毒无核定位信号衣壳蛋白的原核表达及其在间接ELISA中的应用
黄冠翔
闫
祖杰
李志要
段进坤
鲍恩东
《畜牧与兽医》
CAS
北大核心
2023
1
下载PDF
职称材料
3
猪链球菌2型、7型及9型小鼠感染模型的初步建立
闫
祖杰
潘如意
张俊杰
马晓春
魏建超
李蓓蓓
刘珂
邱亚峰
马志永
刘聚祥
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2023
0
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职称材料
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