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奶牛乳房炎大肠杆菌的分离鉴定及其主要毒力基因原核表达载体的构建 被引量：9
1
作者 门倩云 张勇 +6 位作者 李宗帅 申玉龙 李海江 杨洋 陈婷婷 王琪 赵兴绪 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1-8,共8页
【目的】旨在调查张掖地区奶牛临床乳腺炎中大肠杆菌的感染情况、大肠杆菌的耐药性以及携带的毒力基因,为研制安全有效的奶牛乳腺炎大肠杆菌基因工程疫苗奠定基础.【方法】在张掖地区8个牛场采集22头罹患乳房炎的乳样47份,经细菌学、形... 【目的】旨在调查张掖地区奶牛临床乳腺炎中大肠杆菌的感染情况、大肠杆菌的耐药性以及携带的毒力基因,为研制安全有效的奶牛乳腺炎大肠杆菌基因工程疫苗奠定基础.【方法】在张掖地区8个牛场采集22头罹患乳房炎的乳样47份,经细菌学、形态学、药敏试验和生化法等分离鉴定其中的大肠杆菌.通过PCR扩增分离株的毒力因子,选择检出率较高的毒力因子连接T载体,胶回收纯化后,连接PET-32a(+)以构建原核表达载体,最后通过双酶切和测序进行鉴定.【结果】47份乳样中共鉴定出24株大肠杆菌,它们对头孢西丁,多粘菌素B,阿米卡星和妥布霉素高度敏感.毒力基因检测结果发现,在这24株大肠杆菌中iucD,OmpC,trat,ECs3703和OmpF的检出率100%,fimH的检出率为96.15%,colv的检出率为7.69%,cnf1的检出率为4.34%,flyvA,STb,irp2,sfadE,cnf2和LT1等均未检出.成功构建了fimH、OmpF、trat和OmpC毒力因子原核表达载体,分别为PET-32a-fimH、PET-32a-OmpF、PET-32a-trat和PET-32a-OmpC.【结论】对张掖地区部分奶牛场奶牛乳腺炎的临床用药具有一定的参考意义,也为进一步研制奶牛乳腺炎大肠杆菌基因工程疫苗提供了生物材料. 展开更多
关键词 奶牛 乳房炎 大肠杆菌 分离鉴定 毒力基因 原核表达
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甘肃部分地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的细菌多位点序列分型与毒力检测 被引量：8
2
作者 陈婷婷 达举云 +6 位作者 申玉龙 门倩云 李宗帅 王媛媛 杨孝朴 张勇 赵兴绪 《动物医学进展》 北大核心 2021年第6期24-30,共7页
为研究甘肃地区牛源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的耐药情况、基因型总体结构特征及毒力因子的分布情况,从甘肃省东、中和西部3个地区的3个县市采集41头罹患临床型乳房炎奶牛的93份乳样,采用鉴别培养基分离纯化细菌。采用K-B... 为研究甘肃地区牛源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的耐药情况、基因型总体结构特征及毒力因子的分布情况,从甘肃省东、中和西部3个地区的3个县市采集41头罹患临床型乳房炎奶牛的93份乳样,采用鉴别培养基分离纯化细菌。采用K-B法对分离株进行耐药性分析,常规PCR方法检测mecA抗性基因和14种常见毒力基因以及多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)。结果显示,93份乳样中分离出28株金黄色葡萄球菌;分离株有不同程度的耐药且多为多重耐药(16株),多重耐药菌株占57.14%,未发现耐万古霉素菌株(VRSA),万古霉素敏感率为100%;28株分离菌中共检出mecA阳性11株,检出率为39.3%;共获得9个已知ST型;有12种毒力基因不同程度被检出,其中nuc、spa和coa检出率为100%,hlb、set1、clfA、FnBPA和seb阳性检出率均大于50%,sak、seg、PVL和sea的检出率依次为28.6%、7.9%、14.3%和21.4%,而FnBPB、hla基因未检出。研究结果可为甘肃省牛源金黄色葡萄球菌的耐药性评价、溯源分析和治疗提供参考依据。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 金黄色葡萄球菌 耐药性 多位点序列分型 毒力基因
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甘肃省乳房炎奶牛乳源肠球菌的分离、药敏试验及毒力基因原核表达载体的构建 被引量：3
3
作者 申玉龙 门倩云 +5 位作者 陈婷婷 李宗帅 李海江 杨洋 张勇 赵兴绪 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第10期3389-3400,共12页
为分离临床型奶牛乳房炎中的肠球菌,检测其耐药性和携带毒力基因的情况,本试验采集了甘肃省东、中和西部3个地区41头临床型乳房炎奶牛的奶样93份,并构建了肠球菌毒力基因的原核表达载体。试验使用选择性培养基分离纯化肠球菌,16S rRNA... 为分离临床型奶牛乳房炎中的肠球菌,检测其耐药性和携带毒力基因的情况,本试验采集了甘肃省东、中和西部3个地区41头临床型乳房炎奶牛的奶样93份,并构建了肠球菌毒力基因的原核表达载体。试验使用选择性培养基分离纯化肠球菌,16S rRNA和生化试验结合的方法鉴定所分离菌株的种;选取16种抗菌药进行药敏试验;常规PCR方法检测11种毒力基因的携带情况,最后对具有免疫原性的毒力基因进行原核表达载体的构建。鉴定结果显示,93份乳样中18株为肠球菌,并分为9种。药敏结果显示,分离株多数为多重耐药菌(multiple resistant bacteria,MDR),占88.89%,未发现耐万古霉素菌株(vancomycin-resistant enterococcus,VRE),万古霉素敏感率94.12%,所有分离株至少对一种抗菌药耐药。PCR检测结果表明,11种毒力基因均有检出,cob基因检出率最高(44.44%),efaA、hyl、ccf和esp基因检出率分别为33.33%、27.78%、27.78%和22.22%,Asa1、cylA、EF3314和gelE基因检出率均为16.67%,Ace和cylM基因检出最低(11.11%);毒力基因组合因菌种不同而存在差异,选择具有免疫原性的Ace和gelE基因成功构建出原核表达载体pET32a-Ace和pET32a-gelE。本试验为后续绘制3个地区奶牛乳房炎流行病学区域谱以及制备相应抗体和亚单位疫苗提供了基础数据及生物材料。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 肠球菌 耐药性 毒力因子 原核表达
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