中国人甲状腺乳头状癌中RET基因重排及类型的分析研究 被引量：11

1

作者 宋光 铁轶 +3 位作者 黄晓明 蓝光会 孙志贤 李荣 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期422-424,共3页

目的　建立检测RET基因重排的方法 ,研究中国人甲状腺乳头状癌 (PTC)中是否存在RET基因重排及其重排类型。方法　应用RT PCR方法对 110例PTC石蜡切片标本进行RET基因重排检测 ,并对扩增结果进行测序鉴定。结果　 76例PTC标本提取RNA成... 目的　建立检测RET基因重排的方法 ,研究中国人甲状腺乳头状癌 (PTC)中是否存在RET基因重排及其重排类型。方法　应用RT PCR方法对 110例PTC石蜡切片标本进行RET基因重排检测 ,并对扩增结果进行测序鉴定。结果　 76例PTC标本提取RNA成功 ,其中 60 .5 % (4 6/76)发生RET重排 ,13 .2 % (10 /4 6)表达PTC1,5 .3 % (4 /76)表达PTC3 ,2 .6% (2 /76)表达PTC4,其中PTC1发生的频率最高 ,实验中仅检测到 1例PTC2与PTC3 /PTC4混合型重排 ,可能中国人中PTC与RET和H4及ELE1重排激活有关。此外 ,还发现单一标本中有多种重排形式并存 ,比例高达 3 9.5 % (3 0 /76)。结论　中国人PTC组织中存在第 1、2、3、4种重排 ,且以第 1种较为常见。病例资料分析表明 :此多种重排混合的情形与肿瘤的大小、转移等无关。 展开更多

关键词 中国人 甲状腺乳头状癌 RET基因重排 类型

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循环microRNA与肿瘤诊断 被引量：13

2

作者 铁轶 付汉江 郑晓飞 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2009年第1期64-68,共5页

miRNA是一类小分子调控RNA,在肿瘤的发生与控制方面发挥着重要的作用.已经发现在肿瘤患者的循环核酸中存在源自肿瘤的miRNA分子,这一现象提示循环miRNA分子可能成为无创诊断癌症的一个有效的方法.本文综述了循环miRNA作为循环生物标志... miRNA是一类小分子调控RNA,在肿瘤的发生与控制方面发挥着重要的作用.已经发现在肿瘤患者的循环核酸中存在源自肿瘤的miRNA分子,这一现象提示循环miRNA分子可能成为无创诊断癌症的一个有效的方法.本文综述了循环miRNA作为循环生物标志物在肿瘤诊断中的应用,以及该领域的最新研究进展. 展开更多

关键词 循环miRNA 肿瘤 诊断

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生物信息学辅助定位及延伸辐射诱导未知表达序列标签 被引量：3

3

作者 罗瑛 隋建丽 +2 位作者 铁轶 周平坤 孙志贤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第2期188-191,共4页

研究辐射诱导的基因表达调控对于认识细胞对辐射损伤的应激反应有重要意义 .在低剂量辐射诱导新基因RIG1表达序列标签 (expressionsequencetag ,EST)片段的基础上 ,通过非克隆cDNA文库和RACE (rapidamplificationofcDNAend)技术获得了... 研究辐射诱导的基因表达调控对于认识细胞对辐射损伤的应激反应有重要意义 .在低剂量辐射诱导新基因RIG1表达序列标签 (expressionsequencetag ,EST)片段的基础上 ,通过非克隆cDNA文库和RACE (rapidamplificationofcDNAend)技术获得了其 3′末端 .依据实验得到的这两段EST序列所提供的信息 ,通过生物信息学分析将RIG1基因初步定位在 2 0号染色体 .对 2 0号染色体RIG1区基因组序列进行外显子扫描 ,发现预测的外显子正好与实验得到的EST相吻合 .利用预测的外显子设计特异引物 ,成功地克隆了RIG1基因全长序列 .同时 ,对 2 0号染色体RIG1区的生物信息学分析表明 ,在RIG1基因的上游存在启动子区 ,从而确定了RIG1基因的基因组序列 .因此 ,通过生物信息学辅助设计实验 ,快捷地定位及延伸了未知EST片段RIG1,基本完成了RIG1的全基因、基因组序列及染色体定位研究 . 展开更多

关键词 辐射诱导基因 RIGI 外显子预测 表达序列标签

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运用抑制消减杂交构建辐射诱导EST库 被引量：3

4

作者 铁轶 罗瑛 +1 位作者 隋建丽 周平坤 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期9-11,共3页

目的　克隆并鉴定低剂量辐射诱导基因 ,为探讨低剂量辐射生物学效应分子机理提供有益信息。方法　 0 5Gyγ射线照射人胚肺细胞后 ,用抑制消减杂交技术 (SuppressionSubtractiveHybridization ,SSH)构建低剂量辐射诱导EST库。用反向Nort... 目的　克隆并鉴定低剂量辐射诱导基因 ,为探讨低剂量辐射生物学效应分子机理提供有益信息。方法　 0 5Gyγ射线照射人胚肺细胞后 ,用抑制消减杂交技术 (SuppressionSubtractiveHybridization ,SSH)构建低剂量辐射诱导EST库。用反向Northern杂交法对库中的EST片段进行筛选 ,挑取阳性克隆测序 ,并在GenBank序列数据库中进行同源性比较。结果　得到受照后表达升高 90个EST序列 ,代表 2 1个基因的转录产物 ,部分基因的功能已明确。从功能上分析 ,这些基因产物的生物学作用涵盖了细胞周期、信号转导、细胞骨架、代谢、蛋白合成等几个重要的细胞生物学代谢反应过程 ,显示出细胞对低剂量辐射反应过程的多样性。另外 ,实验还获得 4个新cDNA序列。结论　利用抑制消减杂交技术 ,从辐射前后HEL细胞中 ,得到低剂量辐射诱导EST片段 ,它们与细胞周期、增殖、代谢、信号转导、应激反应等相关 ,这些基因可能在细胞的低剂量辐射效应中起到重要作用。 展开更多

关键词 辐射诱导基因 抑制消减杂交 低剂量 差异显示EST库

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人源microRNA分子表达库的构建 被引量：4

5

作者 崔军 付汉江 +5 位作者 冯军军 朱捷 铁轶 邢瑞云 汪成富 郑晓飞 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第4期389-394,共6页

microRNA(miRNA)是一类长度为22nt左右的单链非编码小RNA分子,通过与靶mRNA分子结合而沉默其表达.目前,虽然在多种生物中发现了大量的miRNA,但对它们的功能还知之甚少.为了深入研究miRNA的功能,构建了一个包括170多种人源miRNA表达载体... microRNA(miRNA)是一类长度为22nt左右的单链非编码小RNA分子,通过与靶mRNA分子结合而沉默其表达.目前,虽然在多种生物中发现了大量的miRNA,但对它们的功能还知之甚少.为了深入研究miRNA的功能,构建了一个包括170多种人源miRNA表达载体的miRNA分子表达库,并对部分表达载体采用RNA印迹及双荧光素酶分析技术进行验证.实验证明:这些miRNA表达载体在HEK-293细胞内可以高水平表达miRNA前体和成熟的miRNA,并且能抑制含有相应靶位点的报告基因的表达.这些结果表明:该miRNA表达库可以表达功能miRNA,并可用于miRNA功能的筛选和研究. 展开更多

关键词 MIRNA 表达库 功能筛选

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mRNA氧化损伤检测方法的优化及p53 mRNA氧化损伤分析 被引量：4

6

作者 马春花 铁轶 +5 位作者 付汉江 刘斌 邢瑞云 朱捷 丁勇 郑晓飞 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期180-183,200,共5页

目的建立并优化检测真核细胞mRNA氧化损伤的方法——反转录阻断-双引物扩增法,检测p53 mRNA氧化损伤。方法建立非细胞体系和细胞体系mRNA氧化损伤模型,提取RNA并反转录成cDNA,根据所检测mRNA的5'端和3'端各设计一对引物,以cDNA... 目的建立并优化检测真核细胞mRNA氧化损伤的方法——反转录阻断-双引物扩增法,检测p53 mRNA氧化损伤。方法建立非细胞体系和细胞体系mRNA氧化损伤模型,提取RNA并反转录成cDNA,根据所检测mRNA的5'端和3'端各设计一对引物,以cDNA为模板进行实时定量PCR。结果非细胞体系和细胞体系氧化处理组GAPDH和p53 mRNA的氧化损伤程度均明显高于对照组,且随着过氧化氢浓度增加RNA氧化损伤增强;同时一定限度内降低反转录酶用量能提高检测灵敏度。结论本研究建立并优化的RNA氧化损伤检测方法能检测特定mRNA对氧化的敏感性及损伤程度,为分析相关疾病造成的RNA氧化损伤以及探索其发病机制和治疗方法提供了技术支持。 展开更多

关键词 RNA 氧化损伤 P53 MRNA

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类胰岛素生长因子与肝癌 被引量：3

7

作者 孙芳 付汉江 +1 位作者 铁轶 郑晓飞 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2011年第23期2473-2479,共7页

肝癌是常见的恶性肿瘤之一,其病程快且预后很差.其发生是一个多因素多步骤协同的复杂过程.近来的研究报道,肝癌发生分子机制与类胰岛素生长因子体系信号通路异常相关.类胰岛素生长因子是一种多功能细胞增殖调控因子,他在胚胎发育、中枢... 肝癌是常见的恶性肿瘤之一,其病程快且预后很差.其发生是一个多因素多步骤协同的复杂过程.近来的研究报道,肝癌发生分子机制与类胰岛素生长因子体系信号通路异常相关.类胰岛素生长因子是一种多功能细胞增殖调控因子,他在胚胎发育、中枢神经系统发育及肿瘤细胞增殖等方面具有重要的生物学功能.类胰岛素生长因子的生物学活性受到包括类胰岛素生长因子不同类型的受体、类胰岛素结合蛋白及类胰岛素结合相关蛋白等多因素参与的复杂的调控网络调控.本文主要介绍了类胰岛素生长因子体系在肝癌中的异常改变、类胰岛素生长因子相关信号通路及其作用机制以及在肝癌靶向治疗中的应用. 展开更多

关键词 类胰岛素生长因子 类胰岛素生长因子受体-I 肝癌

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DNA损伤监测及修复相关酶与细胞衰老

8

作者 罗瑛 隋建丽 铁轶 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期37-39,共3页

衰老是细胞的重要生命现象之一 ,衰老假说之一认为细胞中残留DNA损伤的积累可加速细胞的衰老 .因此 ,细胞内DNA损伤监测及修复系统的正常运行与细胞衰老调控密切相关 ,DNA损伤监测及修复相关酶如PARP、DNA PK、ATM、p5 3等在细胞衰老中... 衰老是细胞的重要生命现象之一 ,衰老假说之一认为细胞中残留DNA损伤的积累可加速细胞的衰老 .因此 ,细胞内DNA损伤监测及修复系统的正常运行与细胞衰老调控密切相关 ,DNA损伤监测及修复相关酶如PARP、DNA PK、ATM、p5 3等在细胞衰老中的调控作用日益受到广泛关注 .研究这些蛋白质分子间的相互作用及其在细胞衰老过程中的调控功能 ,有利于揭示DNA损伤应激、损伤修复调控与细胞衰老之间的内在联系 ,为抗衰老研究及从衰老角度治疗肿瘤提供新的思路 . 展开更多

关键词 细胞衰老 DNA损伤监测 DNA损伤修复 TANKYRASE

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中国人甲状腺乳头状癌中ret基因重排及类型的分析研究 被引量：2

9

作者 铁轶 董燕 +3 位作者 毛建平 孙志贤 宋光 李荣 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期73-76,共4页

目的　建立ret基因重排的分析方法 ,提示中国人甲状腺乳头状癌中是否存在原癌基因ret重排及重排类型。方法　应用RT PCR方法对 65例甲状腺乳头状癌石蜡切片标本进行ret基因重排检测 ,并对扩增结果进行测序鉴定。结果　在提取RNA成功的 3... 目的　建立ret基因重排的分析方法 ,提示中国人甲状腺乳头状癌中是否存在原癌基因ret重排及重排类型。方法　应用RT PCR方法对 65例甲状腺乳头状癌石蜡切片标本进行ret基因重排检测 ,并对扩增结果进行测序鉴定。结果　在提取RNA成功的 38例甲状腺乳头状癌 (PTC)标本中 ,有 71 %发生ret重排 ,其中 1 0 5 %表达PTC1 ;5 3 %表达PTC3 ;5 3 %表达PTC4 ,以PTC1发生的频率较高。仅 1例表达PTC2与PTC3 PTC4混合型重排 ,中国人PTC可能与ret和H4及ELE1重排激活相关。结论　中国人PTC组织中存在 4种重排 ,且以PTC1较为常见。单一标本中有多种重排形式并存 ,PTC1 +3重排形式 1 0例、3例PTC1 +4、1例PTC2 +3 +4、1例PTC3 +4、4例PTC1 +3 +4,单一标本中多种重排形式并存的比例高达 50 % ,但与癌症的恶性程度。 展开更多

关键词 甲状腺乳头状癌 RET基因 基因重排 RT-PCR法

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肝硬化患者血浆中AFP、PKM2和ALB mRNA的检测与分析 被引量：2

10

作者 曲秋月 于源滋 +4 位作者 李杰 付汉江 铁轶 郭明洲 郑晓飞 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期500-504,共5页

目的探讨乙肝肝硬化患者外周血血浆中甲胎蛋白(AFP)、丙酮酸激酶M2(PKM2)和白蛋白(ALB)mRNA的表达水平及其临床意义。方法采用实时定量PCR方法检测了38例健康人血浆及38例乙肝肝硬化患者血浆中AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA的表达水平... 目的探讨乙肝肝硬化患者外周血血浆中甲胎蛋白(AFP)、丙酮酸激酶M2(PKM2)和白蛋白(ALB)mRNA的表达水平及其临床意义。方法采用实时定量PCR方法检测了38例健康人血浆及38例乙肝肝硬化患者血浆中AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA的表达水平,并分析其表达与临床检测指标间的相关性。结果 AFPmRNA、PKM2 mRNA及ALB mRNA的表达在肝硬化患者血浆和健康人血浆中存在明显差异,结果具有统计学意义(P<0.01)。AFP mRNA和PKM2 mRNA的表达与临床检测指标没有显著相关性,ALB mRNA与γ-谷氨酰基转移酶及血清白蛋白具有相关性。与甲胎蛋白相比,检测的3种血浆mRNA在乙肝肝硬化患者中的高表达更明显。结论检测外周血血浆中AFP mRNA、PKM2 mRNA和ALB mRNA的表达对肝病的临床诊断及治疗具有指导意义。 展开更多

关键词 MRNA 乙肝肝硬化 血浆 实时定量PCR 甲胎蛋白类 白蛋白类

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poly(U)加尾microRNA检测方法建立及其检测 被引量：2

11

作者 李珊珊 付汉江 +3 位作者 铁轶 朱捷 邢瑞云 郑晓飞 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期547-549,554,共4页

目的建立一种poly(U)加尾RT-PCR检测微RNA(microRNA,miRNA)分子的新方法。方法提取细胞总RNA,用poly(U)聚合酶在miRNA 3'端添加U尾,逆转录为cDNA,实时定量PCR检测miRNA分子。结果经poly(U)聚合酶加尾RT-PCR方法可以成功地检测miRNA... 目的建立一种poly(U)加尾RT-PCR检测微RNA(microRNA,miRNA)分子的新方法。方法提取细胞总RNA,用poly(U)聚合酶在miRNA 3'端添加U尾,逆转录为cDNA,实时定量PCR检测miRNA分子。结果经poly(U)聚合酶加尾RT-PCR方法可以成功地检测miRNA分子。结论本研究建立的poly(U)加尾RT-PCR方法可有效地检测并分析miRNA分子,具有特异性强,灵敏度高的特点,为miRNA的检测分析及功能机制研究提供了一种新方法。 展开更多

关键词 微RNA poly(U)聚合酶 PCR

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非克隆cDNA文库与RACE技术克隆小剂量辐射诱导新基因RIG1 被引量：1

12

作者 罗瑛 隋建丽 +3 位作者 铁轶 张元平 周平坤 孙志贤 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期407-409,共3页

目的　在获得了低剂量辐射诱导新基因RIG1EST片段的基础上 ,简便、有效地获得其全长cDNA ,进行下一步的基因功能研究。方法　结合应用非克隆cDNA文库技术及增强RACE技术 ,设计了巢式RACEPCR、生物素磁性分离、生物素标记探针杂交、再次... 目的　在获得了低剂量辐射诱导新基因RIG1EST片段的基础上 ,简便、有效地获得其全长cDNA ,进行下一步的基因功能研究。方法　结合应用非克隆cDNA文库技术及增强RACE技术 ,设计了巢式RACEPCR、生物素磁性分离、生物素标记探针杂交、再次磁性分离的纯化流程。结果　成功地克隆到RIG1EST片段 3′端约 1kb的序列 ,该序列 3′端具有明显的polyA加尾信号 ,有编码区的终止密码子。进一步的分析明确了RIG1EST的正、负链及其蛋白编码方向 ,为RIG15′端的克隆提供了大量可靠的信息 ,目前RIG15′端的克隆已得到很好的进展。结论　所得结果与我们的设计完全一致 ,说明这一技术路线是简便可行的 ,为下一步研究RIG1基因在细胞辐射应激反应中的功能及被辐射诱导表达的调控模式奠定了基础。 展开更多

关键词 非克隆cDNA文库 增强RACE 探针杂交 RIG1基因

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两种高效RNA干涉载体系统的构建及应用 被引量：2

13

作者 杨明 付汉江 +3 位作者 铁轶 朱捷 江红 郑晓飞 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期377-383,共7页

在真核细胞基因功能研究中,RNA干涉(RNAi) 已成为一种强有力的选择性沉默基因表达的实验工具. 建立一套可在哺乳动物培养细胞中高效、经济地表达siRNA的载体系统是RNA干涉研究的必要前提之一. 从HepG2细胞基因组DNA中克隆得到H1全长启动... 在真核细胞基因功能研究中,RNA干涉(RNAi) 已成为一种强有力的选择性沉默基因表达的实验工具. 建立一套可在哺乳动物培养细胞中高效、经济地表达siRNA的载体系统是RNA干涉研究的必要前提之一. 从HepG2细胞基因组DNA中克隆得到H1全长启动子(374 bp),以之为基础构建了两套RNA干涉载体系统,pSL和带有绿色荧光蛋白(EGFP) 标签的pESL,并对p53基因进行了相应的RNA干涉研究. 干涉质粒瞬时转染HepG2细胞后,分别利用半定量RT-PCR和蛋白质印迹检测p53表达水平. 与商品化载体pSilencerTM 3.1-H1 hygro相比,pSL和pESL对p53基因表达具有更高的干涉效率. 结果显示:干涉载体pSL和pESL能高效特异地下调目的基因表达,可作为哺乳动物中基因功能分析的有效工具. 展开更多

关键词 RNA干涉 H1启动子 P53基因

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电离辐射诱导microRNA研究进展 被引量：2

14

作者 胡铮 铁轶 +1 位作者 孙志贤 郑晓飞 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期236-239,共4页

微小RNA（microRNA,miRNA）是一类长度为21~23 nt的单链非编码小RNA。在真核生物中miRNA主要通过与编码蛋白质基因的信使RNA（mRNA）配对结合,在转录后水平抑制基因表达。越来越多的证据表明,miRNA与氧化应激特别是辐射生物效应相关,mi... 微小RNA（microRNA,miRNA）是一类长度为21~23 nt的单链非编码小RNA。在真核生物中miRNA主要通过与编码蛋白质基因的信使RNA（mRNA）配对结合,在转录后水平抑制基因表达。越来越多的证据表明,miRNA与氧化应激特别是辐射生物效应相关,miRNA有可能成为放射病治疗的潜在新靶点。本文概述电离辐射诱导miRNA的研究进展。 展开更多

关键词 微小RNAs 电离辐射诱导 氧化性应激 放射病治疗 放射生物学 基因表达

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血浆miRNA快速制备方法建立和优化 被引量：1

15

作者 李函蔚 钟一然 +4 位作者 付汉江 铁轶 朱捷 李桂英 郑晓飞 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期733-736,740,共5页

目的建立并优化用于血浆microRNA(miRNA)检测分析的miRNA快速提取方法。方法使用含表面活性剂的提取液和加热方法提取血浆miRNA,采用RNA酶抑制剂抑制RNA降解,利用检测miRNA的poly(A)加尾、逆转录反应和实时定量PCR法检测血浆miRNA表达水... 目的建立并优化用于血浆microRNA(miRNA)检测分析的miRNA快速提取方法。方法使用含表面活性剂的提取液和加热方法提取血浆miRNA,采用RNA酶抑制剂抑制RNA降解,利用检测miRNA的poly(A)加尾、逆转录反应和实时定量PCR法检测血浆miRNA表达水平,评估方法的可行性。结果成功建立了提取液和加热提取miRNA一步法,实时定量PCR结果表明该方法具有良好的扩增特异性、可重复性,方法稳定可靠。结论提取液和加热一步法简便、快速、低成本,血浆用量少,为临床血浆miRNA检测分析提供了一种新的技术方法。 展开更多

关键词 血浆 微RNA 提取 RNA酶抑制剂

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辐射诱导基因的寻找及功能研究

16

作者 铁轶 罗瑛 +1 位作者 隋建丽 周平坤 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期446-448,共3页

关键词 辐射诱导基因 寻找 识别 功能鉴定 基因定位

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DNA双链断裂感应分子ATM能与PTC1相互作用 被引量：1

17

作者 铁轶 毛建平 +5 位作者 孟祥兵 刘斌 宋宜 梅柱中 董燕 孙志贤 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第1期1-4,共4页

目的 :研究DNA双链断裂感应分子ATM与原癌基因ret重排活化蛋白PTC1的相互作用。方法 :用Flag抗体Western印迹检测 ,ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的PTC1;RET抗体检测ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的c_ret;用HA myc抗体Western印迹检测... 目的 :研究DNA双链断裂感应分子ATM与原癌基因ret重排活化蛋白PTC1的相互作用。方法 :用Flag抗体Western印迹检测 ,ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的PTC1;RET抗体检测ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的c_ret;用HA myc抗体Western印迹检测 ,HA_retTK +myc_LZPR免疫共沉淀蛋白复合物 ;荧光蛋白标记的亚细胞定位。结果 :PTC1可以与ATM激酶相互作用 ,此作用不依赖于电离辐射 ,且不被PI3K家族特异性抑制剂沃氏蓝霉素 (wortmannin)所抑制 ,而野生型RET蛋白则不能同ATM结合 ;缺失体实验进一步证明两者的结合区段为ATM的LZPR结构域与PTC1的酪氨酸激酶结构域。构建PTC1绿色荧光蛋白表达质粒的亚细胞定位实验显示 ,PTC1以弥散形式分布于细胞质内。结论 :胞浆蛋白PTC1可能借助某种途径使ATM在DNA损伤反应发生后重新定位 。 展开更多

关键词 RET PTC1 ATM 电离辐射 蛋白相互作用 原癌基因

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乳头状甲状腺癌基因PTC1对ATM细胞定位和功能的影响

18

作者 铁轶 毛建平 +3 位作者 刘斌 宋宜 董燕 孙志贤 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期487-492,共6页

背景与目的:ret基因重排活化与乳头状甲状腺癌密切相关,但它致癌的分子机制还不清楚,本文将通过研究DNA双链断裂(double-strandbreaks,DSBs)感应分子毛细血管扩张共济失调症突变蛋白ATM(mutatedinataxiatelangiectasia)与原癌基因Ret重... 背景与目的:ret基因重排活化与乳头状甲状腺癌密切相关,但它致癌的分子机制还不清楚,本文将通过研究DNA双链断裂(double-strandbreaks,DSBs)感应分子毛细血管扩张共济失调症突变蛋白ATM(mutatedinataxiatelangiectasia)与原癌基因Ret重排活化蛋白PTC1的相互作用,探讨ret重排致癌的分子机制。方法:以抗ATM抗体免疫沉淀的ATM为激酶,抗HA抗体免疫沉淀的PTC1的TK结构域为底物,进行体外磷酸化,检测ATM对ret-TK结构域的磷酸化作用;分别分离COS7细胞胞浆和胞核蛋白,研究PTC1过表达对ATM-LZPR定位的影响;用磷酸化p53抗体检测PTC1过表达对p53磷酸化水平的影响;流式细胞术分析PTC1过表达对细胞周期的影响。结果:体外磷酸化实验证明TK可以被ATM体外磷酸化;Western印迹检测发现单独表达LZPR时其在胞浆、胞核均有表达,而PTC1与LZPR共表达后,LZPR结构域仅在胞浆表达;用磷酸化p53抗体检测发现过表达PTC1抑制了ATM对p53的磷酸化作用,引起细胞G1/S期周期阻滞。结论:PTC1可能通过使ATM滞留于胞浆,干扰ATM对p53的磷酸化及其对细胞下游靶基因的转录活化功能,从而使细胞周期检查点机制失控。 展开更多

关键词 乳头状甲状腺癌 癌基因 PTC1 ATM 细胞定位 结构功能 影响因素

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miR-193b在HepG2细胞中下调K-Ras蛋白表达 被引量：1

19

作者 杨永强 付汉江 +4 位作者 铁轶 刘珊珊 朱捷 邢瑞云 郑晓飞 《军事医学科学院院刊》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期216-219,共4页

目的探讨microRNA-193b(miR-193b)在HepG2细胞中对K-Ras蛋白表达的调控作用。方法 Tar-getScan软件预测获得miR-193b调控候选靶基因K-ras;构建包含预测miR-193b作用靶位点的K-rasmRNA3′UTR野生型和突变型荧光素酶报告基因载体pGL-KRAS... 目的探讨microRNA-193b(miR-193b)在HepG2细胞中对K-Ras蛋白表达的调控作用。方法 Tar-getScan软件预测获得miR-193b调控候选靶基因K-ras;构建包含预测miR-193b作用靶位点的K-rasmRNA3′UTR野生型和突变型荧光素酶报告基因载体pGL-KRAS和pGL-Mu-KRAS,检测转染HepG2细胞的荧光素酶活性;合成miR-193b的dsRNA,转染HepG2细胞,实时定量PCR和Western印迹检测对K-rasmRNA和蛋白表达的影响。结果与结论 miR-193b可以与K-rasmRNA3′UTR结合。在HepG2中,miR-193b在mRNA和蛋白水平下调K-ras基因表达。 展开更多

关键词 微RNAS miR-193b HEPG2 K-RAS 突变 转染 聚合酶链反应 基因表达

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不同缺氧模型对HepG2细胞中miR-210表达的影响 被引量：1

20

作者 李杰 曲秋月 +3 位作者 付汉江 铁轶 汪渊 郑晓飞 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期428-431,共4页

目的探讨不同缺氧条件对HepG2细胞中miR-210表达水平的影响。方法采用CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3 3种不同的缺氧条件诱导HepG2细胞,利用实时定量PCR技术检测不同缺氧模式诱导前后HepG2细胞miR-210等表达变化。结果 3种缺氧模式均可以诱... 目的探讨不同缺氧条件对HepG2细胞中miR-210表达水平的影响。方法采用CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3 3种不同的缺氧条件诱导HepG2细胞,利用实时定量PCR技术检测不同缺氧模式诱导前后HepG2细胞miR-210等表达变化。结果 3种缺氧模式均可以诱导HepG2细胞miR-210表达上调,其表达与CoCl2及Na2SO3的浓度有剂量依赖关系。结论 CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3 3种不同的缺氧条件均可以有效诱导HepG2细胞中miR-210的表达上调,3种模型均可用于缺氧诱导miRNA研究,同时进一步证明miR-210表达上调是由于细胞缺氧所致。 展开更多

关键词 缺氧 微小RNA HEPG2细胞 基因表达 转录因子 聚合酶链反应

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