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cGAMP可显著增强针对诺如病毒（GⅡ.4）病毒样颗粒抗原的体液免疫应答 被引量：3
1
作者 陈敬 刘梅影 +6 位作者 汤重发 刘钰 钟佑秀 唐芳 马智静 侯俊伟 魏博 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期761-765,共5页
目的 评价环二核苷酸（cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate, cGAMP）在诺如病毒（GⅡ.4） 病毒样颗粒（virus like particles,VLPs）疫苗研发中作为佐剂的免疫增强效应.方法 将cGAMP和铝盐佐剂（氢氧化铝）分别与... 目的 评价环二核苷酸（cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate, cGAMP）在诺如病毒（GⅡ.4） 病毒样颗粒（virus like particles,VLPs）疫苗研发中作为佐剂的免疫增强效应.方法 将cGAMP和铝盐佐剂（氢氧化铝）分别与不同剂量诺如病毒（GⅡ.4）VLPs抗原配伍,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过测定免疫血清中抗VLPs特异性IgG抗体及其亚型,检测阳性血清中模拟中和抗体水平,比较两种佐剂对VLPs抗原免疫效果的促进作用.结果 以cGAMP为佐剂,VLPs可诱导较高的血清特异性IgG抗体应答;用相同剂量VLPs抗原免疫,配伍cGAMP佐剂诱导的IgG抗体应答水平明显高于铝佐剂,cGAMP配伍低剂量VLPs加强免疫后诱导的IgG抗体水平与铝佐剂配伍高剂量VLPs相当,模拟中和抗体水平与血清IgG水平相对应.结论 cGAMP可显著增强针对诺如病毒（GⅡ.4）VLPs的特异性体液免疫应答,其佐剂活性高于传统铝佐剂,是一种有望应用于疫苗研发的新型佐剂. 展开更多
关键词 cGAMP 诺如病毒 病毒样颗粒(VLPs) 铝佐剂
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BALB/c小鼠口服幽门螺杆菌裂解物配伍dmLT佐剂诱导黏膜局部及系统性免疫应答 被引量：2
2
作者 钟佑秀 陈敬 +3 位作者 刘钰 汤重发 魏博 刘梅影 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期298-304,共7页
目的观察口服免疫幽门螺杆菌(Hp)裂解物配伍黏膜佐剂双突变大肠埃希菌热不稳定毒素(double mutant heat-labile toxin,dmLT)在BALB/c小鼠中诱导抗Hp免疫保护效果,分析相关免疫应答特点。方法将SS1(Sydney strain 1)株Hp裂解物配伍佐剂d... 目的观察口服免疫幽门螺杆菌(Hp)裂解物配伍黏膜佐剂双突变大肠埃希菌热不稳定毒素(double mutant heat-labile toxin,dmLT)在BALB/c小鼠中诱导抗Hp免疫保护效果,分析相关免疫应答特点。方法将SS1(Sydney strain 1)株Hp裂解物配伍佐剂dmLT经口服免疫BALB/c小鼠后,进行幽门螺杆菌胃部活菌接种。对照组小鼠给予口服生理盐水,每只200μl。感染后6周检测幽门螺杆菌胃部定植量,采集血清、脾脏、肠系膜淋巴结、小肠、盲肠、粪便等样本进行相关免疫应答分析。结果抗原配伍佐剂免疫组小鼠与对照组相比较胃部幽门螺杆菌定植量降低;血清中检测到比对照组更强的特异性IgG抗体反应,IgG亚型主要以IgG1为主,且IgG1/IgG2a比值显著高于对照组;小肠、盲肠、粪便中均检测到较高的sIgA,小肠中最为显著,而对照组中均未有明显sIgA反应;脾和肠系膜淋巴结中IL-17+CD4+T比例与对照组相比较显著升高。结论口服免疫Hp裂解物配伍佐剂dmLT诱导黏膜局部及系统性免疫应答,增强BALB/c小鼠抗幽门螺杆菌感染,与显著增强的Th17免疫应答,以及Th细胞中Th2的极化相关,该结果为进一步评价dmLT作为黏膜佐剂用于幽门螺杆菌重组蛋白疫苗提供了实验资料。 展开更多
关键词 SS1裂解物 双突变大肠埃希菌热不稳定毒素(dmLT) BALB/c小鼠 免疫应答 幽门螺杆菌蛋白疫苗
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cGAMP可显著增强BALB/c小鼠对幽门螺杆菌蛋白抗原的免疫应答 被引量：2
3
作者 陈敬 钟佑秀 +6 位作者 汤重发 刘钰 王雪薇 张燕斌 王平 刘梅影 魏博 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期914-921,共8页
目的评价环鸟-腺二核苷酸(cGAMP)在非口服幽门螺杆菌蛋白类疫苗研发中作为佐剂的免疫增强效果。方法以cGAMP为佐剂,与幽门螺杆菌蛋白抗原,包括UreA、UreB和NapA混合,通过皮下途径注射免疫BLAB/c小鼠,同时设置单独抗原组和佐剂组对照,以... 目的评价环鸟-腺二核苷酸(cGAMP)在非口服幽门螺杆菌蛋白类疫苗研发中作为佐剂的免疫增强效果。方法以cGAMP为佐剂,与幽门螺杆菌蛋白抗原,包括UreA、UreB和NapA混合,通过皮下途径注射免疫BLAB/c小鼠,同时设置单独抗原组和佐剂组对照,以间接ELISA法测定免疫前后血清中抗原特异性IgG抗体和盲肠灌洗液中IgA抗体;流式细胞术分析脾及腹腔淋巴结(MLN)中T淋巴细胞IFN-γ分泌水平;酶联免疫斑点(ELISpot)分析脾淋巴细胞中抗原特异性IFN-γ的分泌水平。结果cGAMP可促进小鼠抗幽门螺杆菌蛋白抗原的特异性IgG抗体应答;流式细胞术及ELISpot技术检测结果显示cGAMP可促进淋巴细胞抗原特异性IFN-γ的分泌。结论cGAMP作为一种稳定的小分子化合物佐剂,通过皮下免疫途径,虽然不能诱导较强的黏膜sIgA抗体反应,但是可诱导较强的特异性T淋巴细胞反应和血清特异性IgG抗体应答,显著减少疫苗中抗原用量,为非口服幽门螺杆菌疫苗研发提供了一种新思路。 展开更多
关键词 cGAMP 佐剂 幽门螺杆菌 疫苗
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幽门螺杆菌在BALB/c小鼠中的定植及初步评价 被引量：2
4
作者 刘钰 钟佑秀 +6 位作者 陈敬 汤重发 王雪薇 王平 张燕斌 魏博 刘梅影 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第12期1343-1349,共7页
目的 建立长期、稳定定植于小鼠胃部的幽门螺杆菌动物模型,并进行免疫反应检测分析。方法 用灌胃针灌喂小鼠幽门螺杆菌3次后,定期处死并进行胃组织幽门螺杆菌培养试验、PCR鉴定、组织切片染色、快速尿素酶试验、胃组织病理学检查、血清... 目的 建立长期、稳定定植于小鼠胃部的幽门螺杆菌动物模型,并进行免疫反应检测分析。方法 用灌胃针灌喂小鼠幽门螺杆菌3次后,定期处死并进行胃组织幽门螺杆菌培养试验、PCR鉴定、组织切片染色、快速尿素酶试验、胃组织病理学检查、血清抗幽门螺杆菌抗体检测及细胞免疫分析。结果 6周龄小鼠观察至32周,3周龄小鼠观察至12周时,幽门螺杆菌定植量均稳定在约104个CFU/g胃组织;诱导产生的血清抗幽门螺杆菌IgG抗体水平均在10周时到达峰值,并一直维持较高水平;粪便中均未检测到特异性sIgA抗体;3周龄小鼠感染幽门螺杆菌2周时的流式细胞术检测结果显示,肠道上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes,IELs)IL-17和IFNγ反应较未感染对照组小鼠均有降低趋势;胃组织切片染色分析显示,定植小鼠从感染后第6周胃部开始出现病理变化。结论 获得了幽门螺杆菌在BALB/c小鼠中的长期稳定定植模型,观察到组织病理变化和显著的血清IgG抗体反应,粪便中未观察到特异性sIgA反应,3周龄小鼠观察到Th1及Th17反应有降低趋势,为治疗性疫苗候选抗原的评价奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 动物模型 BALB/C小鼠 稳定性 免疫评价
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几种药物灵活运用带来的启示
5
作者 钟佑秀 潘晶晶 吕正兵 《生物学通报》 2012年第8期15-16,共2页
生物医药研究虽然需要严格的科学性和严谨性,但新思维、新思想常常也会给科研人员带来意外的成果,令他们乐在其中,且使患者受益。在生物医药研究历程中就有这样一些经典案例,而且十分贴近生活。将通过解读宝塔糖、单克隆抗体、万艾可等... 生物医药研究虽然需要严格的科学性和严谨性,但新思维、新思想常常也会给科研人员带来意外的成果,令他们乐在其中,且使患者受益。在生物医药研究历程中就有这样一些经典案例,而且十分贴近生活。将通过解读宝塔糖、单克隆抗体、万艾可等几种药物的研发案例,去感悟它们为科学研究带来的启示。 展开更多
关键词 新思维 宝塔糖 单克隆抗体 万艾可硫酸镁
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LTB-2xSTN12S融合蛋白联合cGAMP和dmLT双佐剂对小鼠的免疫保护效果 被引量：1
6
作者 陈敬 张燕斌 +4 位作者 刘钰 王雪薇 钟佑秀 王平 刘梅影 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第12期1345-1351,共7页
目的在原核系统中表达肠产毒性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)不耐热肠毒素B亚基(heat labile enterotoxin B subunit,LTB)和耐热肠毒素(heat stable enterotoxin)突变体(STN12S)的融合蛋白,联合环鸟-腺二核苷酸(cy... 目的在原核系统中表达肠产毒性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)不耐热肠毒素B亚基(heat labile enterotoxin B subunit,LTB)和耐热肠毒素(heat stable enterotoxin)突变体(STN12S)的融合蛋白,联合环鸟-腺二核苷酸(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate,cGAMP)和dmLT(double mutant heat-labile enterotoxin)佐剂初步评价其保护效果并进行免疫反应分析。方法构建表达质粒pET28α-LTB-2xSTN12S,转化至E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍柱纯化,将纯化的重组LTB-2xSTN12S蛋白联合dmLT和cGAMP佐剂(为抗原+dmLT+cGAMP组;同时设空白对照组、感染对照组、抗原组),均经皮下途径免疫BALB/c小鼠,免疫2针,间隔2周,末次免疫2周后滴鼻攻击ETEC-HN临床分离株(LT+/ST+),2周后称重,取眼眶静脉血及脾淋巴细胞进行体液和细胞免疫分析。结果重组质粒pET28-LTB-2xSTN12S基因测序正确,纯化的重组LTB-2xSTN12S蛋白相对分子质量约20000,纯度为93%,与霍乱毒素(cholera toxin,CT)和ST多抗均能发生特异反应。抗原+dmLT+cGAMP组小鼠诱导的免疫保护均高于感染对照组和抗原组(P均<0.05),诱导的针对LTB-2xSTN12S血清IgG抗体水平及针对LTB和ST抗原特异性IgG抗体水平均高于其他组(P均<0.05);脾淋巴细胞培养上清中抗LTB-2xSTN12SIgG抗体水平及针对LTB-2xSTN12SLTB抗原特异性IgG抗体水平均显著高于其他组(P均<0.01),诱导的脾淋巴细胞抗原特异性IL-4、IL-6、IL-17和IFNγ细胞因子分泌细胞数量均高于其他组(P均<0.05)。结论经原核表达系统成功表达并纯化了LTB-2xSTN12S融合蛋白,LTB和ST抗原性良好,联合cGAMP和dmLT佐剂对同时表达LT和ST临床分离株的攻击具有保护效果,并检测到显著的特异性体液和细胞免疫反应。 展开更多
关键词 LTB-2xSTN12S融合蛋白 cGAMP dmLT 双佐剂 肠产毒性大肠埃希菌 不耐热肠毒素 耐热肠毒素 免疫保护效果
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重组血型抗原结合黏附素的免疫原性初步探讨
7
作者 王平 陈敬 +3 位作者 钟佑秀 刘钰 张燕斌 刘梅影 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第6期41-46,共6页
目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)血型抗原结合黏附素(blood group antigen-binding adhesin,babA)基因,表达纯化重组BabA蛋白;初步探索口服免疫BabA配伍双突变大肠埃希菌(E.coli)热不稳定毒素(double mutant heat-labile to... 目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)血型抗原结合黏附素(blood group antigen-binding adhesin,babA)基因,表达纯化重组BabA蛋白;初步探索口服免疫BabA配伍双突变大肠埃希菌(E.coli)热不稳定毒素(double mutant heat-labile toxin,dmLT)佐剂在BALB/c小鼠中的免疫保护作用。方法从Hp SS1株基因组DNA中扩增babA编码基因,构建原核表达质粒pET28a-babA,转化入E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,His标签纯化。将纯化的BabA蛋白配伍dmLT免疫佐剂口服免疫BALB/c小鼠,生理盐水对照;末次免疫后2周小鼠眼眶静脉采血分离血清,分析特异性体液免疫应答;然后进行Hp胃部活菌感染,感染27周采集脾淋巴细胞进行细胞免疫分析并对小鼠胃部细菌定植量进行检测。结果重组质粒pET28a-babA基因序列正确;重组蛋白BabA以包涵体形式表达,相对分子质量56000,纯度为95.9%;重组BabA蛋白配伍dmLT佐剂口服免疫小鼠可诱导产生针对BabA的血清IgG抗体,抗体水平明显高于对照组(P=0.0018,P<0.05)。活菌感染后27周检测到分泌IL-4和IL-17细胞因子的脾淋巴细胞数量明显高于对照组(P=0.0022和0.0043,P均<0.05),小鼠胃部Hp定植量有降低趋势。结论重组BabA蛋白经原核表达镍柱纯化,配伍dmLT佐剂口服免疫BALB/c小鼠,其体液免疫和细胞免疫应答效果明显,对小鼠胃部Hp定植量有降低作用,可作为Hp蛋白疫苗的潜在候选抗原。 展开更多
关键词 血型抗原结合黏附素 双突变大肠埃希菌热不稳定毒素 佐剂 口服免疫 体液免疫 细胞免疫 蛋白疫苗
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cGAMP与幽门螺杆菌蛋白抗原肌肉注射诱导BALB/c小鼠免疫应答初步分析
8
作者 陈敬 钟佑秀 +4 位作者 刘钰 汤重发 张燕斌 魏博 刘梅影 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第10期1074-1079,共6页
目的初步分析肌肉注射免疫环鸟-腺二核苷酸(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate,cGAMP)与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)蛋白抗原在BLAB/c小鼠中诱导的免疫应答。方法将BALB/c小鼠随机分成4组,cGAMP组... 目的初步分析肌肉注射免疫环鸟-腺二核苷酸(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate,cGAMP)与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)蛋白抗原在BLAB/c小鼠中诱导的免疫应答。方法将BALB/c小鼠随机分成4组,cGAMP组、抗原组(H.pylori蛋白抗原)、cGAMP+抗原组及对照组(未免疫),肌肉注射免疫小鼠。间接ELISA法测定免疫后小鼠血清中抗原特异性IgG抗体、胃组织及粪便上清液中IgA抗体;CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞体外增殖水平;酶联免疫斑点法(ELISpot)分析脾淋巴细胞分泌抗原特异性细胞因子水平。结果经肌肉注射免疫,cGAMP+抗原组可诱导小鼠产生显著高于对照组的血清IgG抗体应答(P<0.01);可诱导胃肠道黏膜产生显著高于单独抗原组的特异性IgA抗体应答(P<0.05);体外孵育H.pylori蛋白抗原和脾淋巴细胞,促进了淋巴细胞的增殖,cGAMP+抗原组显著高于单独抗原组(P<0.01);与单独抗原组及对照组比较,cGAMP+抗原组免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞中抗原特异性IFNγ分泌细胞数量最多(P<0.01)。结论cGAMP通过肌肉注射途径可诱导BLAB/c小鼠对H.pylori蛋白抗原的体液免疫应答及脾脏中抗原特异性淋巴细胞免疫反应,其具有作为肌肉途径免疫H.pylori蛋白疫苗佐剂的潜质。 展开更多
关键词 环鸟-腺二核苷酸 幽门螺杆菌 佐剂 疫苗
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