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乳酸菌益生功能及作用机制研究进展 被引量：72
1
作者 任大勇 李昌 +1 位作者 秦艳青 金宁一 《中国兽药杂志》 2011年第2期47-50,共4页
综述了近几年公开发表的一些研究结果,就乳酸菌对促进营养物质的吸收、预防和治疗疾病以及增强机体免疫力等益生功能的研究现状作了介绍,探讨了乳酸菌益生功能的作用机制,并对今后研究的发展方向作了简单分析。
关键词 益生菌 乳酸菌 益生功能 益生机制
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犬瘟热病毒反转录-聚合酶链反应诊断方法的建立和初步应用 被引量：40
2
作者 李金中 何洪彬 +4 位作者 夏咸柱 殷震 涂长春 金宁一 李佑民 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期180-184,共5页
根据Ｂａｒｅｔ报道的犬瘟热病毒Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株的融合蛋白基因序列，设计合成了一对能扩增３２４ｂｐ基因片段的引物。将异硫氰酸胍－酚－仿一步法提取得到的细胞总ＲＮＡ进行反转录，以此产物为模板进行ＰＣＲ扩增... 根据Ｂａｒｅｔ报道的犬瘟热病毒Ｏｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株的融合蛋白基因序列，设计合成了一对能扩增３２４ｂｐ基因片段的引物。将异硫氰酸胍－酚－仿一步法提取得到的细胞总ＲＮＡ进行反转录，以此产物为模板进行ＰＣＲ扩增，并对ＰＣＲ扩增条件进行了优化。经鉴定，以此对引物进行的ＰＣＲ扩增，得到了与设计片段大小和酶切位点相同的产物，且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒和狂犬病病毒犬的三种病原的核酸，这表明此方法为特异性的。对２７条（只）临床病例和３２份细胞培养物进行检查，并与电子显微镜负染检查结果进行了比较。初步应用研究的结果表明，此方法可用于犬瘟热病毒的临床诊断和实验研究。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 反转录 聚合酶链式反应 诊断
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沙门氏菌的检测技术进展 被引量：47
3
作者 刘喆 张书萧 +5 位作者 王少辉 陈晓平 马志永 郭欢欢 田明尧 金宁一 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第2期81-86,共6页
沙门氏菌是影响食品公共安全的重要因素之一。目前沙门氏菌的检测方法主要包括传统方法、以分子生物学为基础的方法、以免疫学为基础的方法、电阻抗法、生物传感器法、噬菌体法以及联合检测方法。本文主要对目前各种检测方法的原理、优... 沙门氏菌是影响食品公共安全的重要因素之一。目前沙门氏菌的检测方法主要包括传统方法、以分子生物学为基础的方法、以免疫学为基础的方法、电阻抗法、生物传感器法、噬菌体法以及联合检测方法。本文主要对目前各种检测方法的原理、优缺点、应用情况以及发展前景进行了概述。 展开更多
关键词 沙门氏菌 检测 食源致病菌
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6种中草药抗病毒试验 被引量：20
4
作者 侯世宽 张茂林 +4 位作者 刘杰 苟兴宽 田慧英 冯书章 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期596-598,共3页
选用人参叶、山楂、艾叶、紫苏叶、青蒿和刺五加等６种中草药的１３份提取液，在ＲＫ和ＤＫ细胞上分别进行了抗伪狂犬病病毒和抗狐狸脑炎病毒试验。结果，仅人参叶的水提取液和醇提取液对狐狸脑炎病毒和伪狂犬病病毒均有抗病毒作用；水... 选用人参叶、山楂、艾叶、紫苏叶、青蒿和刺五加等６种中草药的１３份提取液，在ＲＫ和ＤＫ细胞上分别进行了抗伪狂犬病病毒和抗狐狸脑炎病毒试验。结果，仅人参叶的水提取液和醇提取液对狐狸脑炎病毒和伪狂犬病病毒均有抗病毒作用；水提取液和醇提取液对狐狸脑炎病毒在ＤＫ细胞上的５０％抑制浓度（ＩＣ５０）分别为１∶５６５．５和１∶１０３７．４。 展开更多
关键词 中药 抗病毒作用 试验
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共表达口蹄疫病毒衣壳蛋白前体P1-2A基因和蛋白酶3C基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫原性 被引量：21
5
作者 金宁一 张洪勇 +4 位作者 尹革芬 郑敏 刘彤 江文正 李子健 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第6期576-579,共4页
将FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C基因单一/共同插入到鸡痘病毒载体pUTA-2和pUTA- 16LacZ中, 构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2P1和pUTAL3CP1, 分别与鸡痘病毒282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞, 经RT-PCR, IFA及Western杂交等方法筛选后... 将FMDV衣壳蛋白P1-2A和蛋白酶3C基因单一/共同插入到鸡痘病毒载体pUTA-2和pUTA- 16LacZ中, 构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTA2P1和pUTAL3CP1, 分别与鸡痘病毒282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞, 经RT-PCR, IFA及Western杂交等方法筛选后成功获得携带有FMDV免疫原基因的两株重组鸡痘病毒株vUTA2P1和vUTAL3CP1. 应用2株重组鸡痘病毒株免疫小鼠, 经对免疫小鼠脾细胞中T细胞亚类计数、脾细胞CTL杀伤活性以及FMDV抗体的检测, 证明这2株重组鸡痘病毒可以诱导小鼠产生明显的细胞免疫和体液免疫反应. 以鸡痘病毒为载体进行FMD基因工程活载体疫苗的研究为FMD的最终防治探索一种新的候选疫苗. 展开更多
关键词 FMDV 重组鸡痘病毒 免疫原性 共表达口蹄疫病毒 衣壳蛋白前体 蛋白酶 基因重组 鸡痘病毒 疫苗
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猪白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：22
6
作者 郑敏 金宁一 +2 位作者 张洪勇 李昌 尹革芬 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期430-432,共3页
通过 RT- PCR方法从用 PHA和 L PS刺激的猪脾脏细胞中扩增出猪白细胞介素 18(p IL - 18)成熟蛋白基因的c DNA,克隆到 T载体 p UCm- T后 ,序列测定表明 ,p IL- 18成熟蛋白基因核苷酸长度为 4 74 bp,编码 15 7个氨基酸。将该基因片段克隆... 通过 RT- PCR方法从用 PHA和 L PS刺激的猪脾脏细胞中扩增出猪白细胞介素 18(p IL - 18)成熟蛋白基因的c DNA,克隆到 T载体 p UCm- T后 ,序列测定表明 ,p IL- 18成熟蛋白基因核苷酸长度为 4 74 bp,编码 15 7个氨基酸。将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体 p ET- 2 8a构建重组质粒 p ETIL 18m,转化大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,并用 IPTG诱导。重组菌菌体裂解物 SDS- PAGE可检测到相对分子质量为 190 0 0的重组蛋白 ,免疫印迹法证实该重组蛋白可以与人 IL- 展开更多
关键词 猪白细胞介素18 成熟蛋白 基因克隆 原核表达 RT-PCR 大肠杆菌 免疫佐剂 免疫调节剂
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应用实时荧光定量TaqManRT-PCR检测口蹄疫病毒 被引量：18
7
作者 花群义 金宁一 +3 位作者 周晓黎 董俊 杨云庆 徐自忠 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期116-119,共4页
按照口蹄疫病毒 (FMDV )聚合酶 3D基因序列 ,设计合成了引物和探针 ,经各反应条件的优化 ,建立了实时荧光定量 RT- PCR技术 ,对细胞培养物、水泡液、水泡皮及分泌物、血液中的 FMDV进行了特异性检测和敏感性试验。结果 ,用 30 0 nmol/ L... 按照口蹄疫病毒 (FMDV )聚合酶 3D基因序列 ,设计合成了引物和探针 ,经各反应条件的优化 ,建立了实时荧光定量 RT- PCR技术 ,对细胞培养物、水泡液、水泡皮及分泌物、血液中的 FMDV进行了特异性检测和敏感性试验。结果 ,用 30 0 nmol/ L 的引物浓度和 2 0 0 nmol/ L 探针浓度 ,获得的 CT值较小 ,而 ΔRn最大 ;可检测到相当于 0 .1 TCID50 的病毒 RNA;与 VSV和其他水泡性病毒不发生交叉反应 ;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系 ,且线性范围宽 ,相关系数为 0 .984 ;组内和组间试验重复性的变异系数 (CV)分别为 5 .4 %和 6 .7% ;与常规 RT- PCR相比较 ,该方法具有快速、特异、敏感、可定量 。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 荧光定量RT-PCR 实时检测 口蹄疫
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猪2型圆环病毒核酸疫苗的接种Balb/c小鼠实验免疫研究 被引量：14
8
作者 金宁一 秦晓冰 +4 位作者 郑敏 鲁会军 张洪勇 尹革芬 葛淑敏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期76-79,共4页
为了筛选得到较理想的核酸疫苗,用pVAX1真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和与复制相关蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒,分别是pVAX1-ORF2、pVAX1-UL18ORF2、pVAX1-ORF2ORF1和pVAX1-IL18ORF2ORF1。... 为了筛选得到较理想的核酸疫苗,用pVAX1真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和与复制相关蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒,分别是pVAX1-ORF2、pVAX1-UL18ORF2、pVAX1-ORF2ORF1和pVAX1-IL18ORF2ORF1。用它们免疫6-8周龄Balb/c小鼠,进小鼠后一周首免,每隔19d免1次,共免3次;每10d采血1次,三免后10d杀鼠取脾。用ELISA方法检测小鼠血清抗体效价,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类CD4+、CD8+数量。统计学分析发现:4个核酸疫苗实验免疫组均是从最后一次采集的小鼠血清中,获得最高的抗体效价,与对照组PBS和空载体pVAX1相比都能产生一定的体液免疫反应,且以pVAx1-IL18ORF2ORF1核酸疫苗免疫小鼠产生的血清抗体效价最高;脾T淋巴细胞亚类数量测定发现,免疫实验组的CD4+与CD8+的T细胞亚类总数显著高于对照组(P<0.05),并以pVAX-1-IL18ORF2ORF1数值较高。结论是核酸疫苗pVAX1-IL18ORF2ORF1既能较好地刺激细胞免疫又能产生一定的体液免疫反应,相对较好,将作为候选核酸疫苗进行下一步本体动物免疫实验研究。 展开更多
关键词 BALB/C小鼠 猪2型圆环病毒 核酸疫苗 免疫研究 血清抗体效价 淋巴细胞亚类 体液免疫反应 ELISA方法 接种 真核表达载体 流式细胞仪 统计学分析 目的基因 蛋白基因 衣壳蛋白 重组质粒 免疫小鼠 数量测定 免疫实验 细胞免疫
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共表达新城疫病毒F基因、传染性法氏囊病病毒VP_0基因的重组鸡痘病毒的抗原性和免疫原性 被引量：15
9
作者 夏志平 金宁一 +6 位作者 金扩世 郭志儒 许凌峰 王宏 郑敏 张洪勇 赵怀龙 《兽医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期214-217,共4页
以鸡痘病毒 (FPV) 2 82 E4 株 TK基因为侧翼 ,将 2个相同的复合启动子 ATI· p7.5× 2 0以反向方式连接 ,分别调控新城疫病毒 (NDV) F基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP0 基因 ,得到重组转移质粒 p VP0 - 2 ATI· p7.5... 以鸡痘病毒 (FPV) 2 82 E4 株 TK基因为侧翼 ,将 2个相同的复合启动子 ATI· p7.5× 2 0以反向方式连接 ,分别调控新城疫病毒 (NDV) F基因和传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP0 基因 ,得到重组转移质粒 p VP0 - 2 ATI· p7.5× 2 0 -F。然后将该重组转移质粒用脂质体转染预先感染 FPV 2 82 E4 株的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,在经 Brd U (5 -溴 -脱氧尿嘧啶 )加压处理后的 CEF上传代 ,用间接免疫荧光试验、Western blot检测 ,有 2株鸡痘病毒能同时表达 NDV F蛋白和IBDV VP0 蛋白。用这 2株重组鸡痘病毒刺种商品 L eghorn雏鸡 ,于刺种前及刺种后 1、2、3周对抗 NDV特异性抗体水平和淋巴细胞转化能力检测 ,结果发现 ,重组鸡痘病毒能激发机体产生良好的免疫反应。结果表明 。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 共表达 免疫原性 NDVF基因 IBDVVP0基因 新城疫病毒 法氏囊病病毒
原文传递
新城疫病毒HN蛋白及其基因的分子生物学 被引量：10
10
作者 丁壮 金宁一 殷震 《中国兽医科技》 CSCD 1999年第8期17-21,共5页
新城疫（ＮｅｗｃａｓｔｌｅＤｉｓｅａｓｅ，ＮＤ）是一种在鸡群中具有高度传染性的病毒性传染病，能感染雉、鸽和野生鹦鹉等多种鸟类。目前全世界已分离出致病性不同的ＮＤＶ毒株达数十种之多，不同的毒株致病性差异很大，可分为速发... 新城疫（ＮｅｗｃａｓｔｌｅＤｉｓｅａｓｅ，ＮＤ）是一种在鸡群中具有高度传染性的病毒性传染病，能感染雉、鸽和野生鹦鹉等多种鸟类。目前全世界已分离出致病性不同的ＮＤＶ毒株达数十种之多，不同的毒株致病性差异很大，可分为速发型（Ｖｅｌｏｇｅｎｉｃｓｔｒａｉｎ... 展开更多
关键词 鸡 传染性 病毒性 新城疫 HN蛋白 分子生物学
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鸡新城疫病毒HN基因亚单位疫苗诱导免疫保护的实验研究 被引量：12
11
作者 丁壮 金宁一 +3 位作者 王兴龙 米志强 夏志平 王承宇 《动物医学进展》 CSCD 2002年第1期49-51,共3页
实验分别将应用Ｂａｃ　ｔｏ　Ｂａｃ系统表达的新城疫病毒四平株和长春株血凝素－神经氨酸酶基因（ＨＮ基因）蛋白的重组杆状病毒感染Ｓｆ－９昆虫细胞后，２８　℃培养７２　ｈ后，洗涤、收集昆虫细胞，离心浓缩，－２０　℃冻融３次... 实验分别将应用Ｂａｃ　ｔｏ　Ｂａｃ系统表达的新城疫病毒四平株和长春株血凝素－神经氨酸酶基因（ＨＮ基因）蛋白的重组杆状病毒感染Ｓｆ－９昆虫细胞后，２８　℃培养７２　ｈ后，洗涤、收集昆虫细胞，离心浓缩，－２０　℃冻融３次。用ＨＡ－ＨＩ实验和ＨＮ单抗中和试验测定表达产物的活性。将表达的重组蛋白作为亚单位疫苗免疫鸡。用间接ＥＬＩＳＡ和ＨＩ试验测定鸡体内抗体效价。免疫后第１５　ｄ用国家标准强毒ＮＤＶ　Ｆ４８Ｅ８攻毒，统计免疫保护率。结果表明，表达的ＮＤＶ　ＨＮ重组蛋白能够诱导鸡体产生抗ＮＤＶ　特异性ＩｇＧ抗体和ＨＩ抗体。实验Ⅰ组（四平株）雏鸡保护率为６５％，实验Ⅱ组（长春株）雏鸡保护率为１００％。 展开更多
关键词 新城疫病毒 鸡 HN重组蛋白 亚单位疫苗 免疫保护率
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应用多联PCR对引发猪繁殖障碍有关病毒的检测Ⅱ.JEV、PPV、PRRSV、PRV单项PCR检测方法的建立 被引量：15
12
作者 孙明 李红卫 +5 位作者 高显明 涂长春 何旭玉 白晓鸿 金宁一 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期10-13,共4页
在利用计算机设计出检测流行性乙型脑炎病毒 ( JEV)、猪细小病毒 ( PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV)、猪伪狂犬病病毒 ( PRV)的多联 PCR引物的基础上 ,分别进行各单项 PCR检测相应病毒试验 ,确定了各单项 PCR反应条件范围 ,并对各... 在利用计算机设计出检测流行性乙型脑炎病毒 ( JEV)、猪细小病毒 ( PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV)、猪伪狂犬病病毒 ( PRV)的多联 PCR引物的基础上 ,分别进行各单项 PCR检测相应病毒试验 ,确定了各单项 PCR反应条件范围 ,并对各 PCR扩增产物进行了点杂交和部分测序鉴定。用单项 PCR对感染猪相关病毒的检测证实 ,本试验已经建立了有效、特异、敏感的检测 JEV、PPV、PRRSV、PRV的单项 PCR技术 ,为进一步建立多联 展开更多
关键词 JEV PPV PRRSV PRV PCR 猪 繁殖障碍 病毒 检测方法
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基因枪法转化马铃薯及转基因植株的获得 被引量：13
13
作者 李昌 金宁一 +6 位作者 王罡 王萍 余云舟 季静 吴颖 张艳贞 张艳华 《作物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期12-14,共3页
应用基因枪法将携带有FMDVP1全长基因的质粒pBI1 3 1SP1导入马铃薯茎段 ,通过在抗性培养基上严格筛选 ,获得了马铃薯再生植株。PCR检测及PCR -Southern杂交分析表明 ,已成功地将目的基因导入马铃薯基因组中。
关键词 基因枪法 马铃薯 FMDV-P1全长基因 转基因植株 遗传转化 基因工程疫苗 生物反应器
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鸡痘病毒282E4株表达载体的构建及新城疫病毒F蛋白的表达 被引量：12
14
作者 郭志儒 金宁一 +6 位作者 王兴龙 金扩世 丁壮 罗坤 方厚华 李萍 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期423-428,共6页
将鸡痘病毒 2 82 E4株 TK基因和 1 .5kb B片段 2个非必需区克隆后 ,分别在 TK基因 Nco 位点和 B片段 Eco R 位点插入复合启动子 (由牛痘病毒 A型包涵体启动子和 2 0个串联的痘苗病毒 ( VV)突变型 p7.5早期启动子串联组成 ) ,然后在复合... 将鸡痘病毒 2 82 E4株 TK基因和 1 .5kb B片段 2个非必需区克隆后 ,分别在 TK基因 Nco 位点和 B片段 Eco R 位点插入复合启动子 (由牛痘病毒 A型包涵体启动子和 2 0个串联的痘苗病毒 ( VV)突变型 p7.5早期启动子串联组成 ) ,然后在复合启动子上游插入单一启动子 (人工合成的由 1 6个串联的 VV突变型p7.5早期启动子组成 )调控的 Lac Z基因或 GFP基因作为报告基因 ,构建成分别以 TK基因或 B片段为侧翼、以复合启动子调控目的基因的 2个以 Lac Z为报告基因的表达载体 p UTA-2 -1 6Lac Z和 p UBA-7-1 6Lac Z,2个以 GFP为报告基因的表达载体 p UTA-2 -F71 6和 p UBA-7-F71 6。在 TK基因 Nco 位点和 B片段 Eco R 位点插入单一启动子和单一启动子调控的 Lac Z基因 ,得到 2个分别以 TK基因或 B片段为侧翼、以单一启动子调控目的基因、以 Lac Z为报告基因的表达载体 p UT1 61 6Lac Z和 p UB1 61 6Lac Z。将构建的 6个表达载体分别转染 FPV HIPRA株感染的鸡胚成纤维 ( CEF)细胞 ,仅在转染以 TK基因为侧翼、以 Lac Z为报告基因的 2个表达载体 p UTA-2 -1 6Lac Z和 p UT1 61 6Lac Z收获的病毒中 ,在 X-gal存在下 ,筛选出了表达 Lac Z的蓝色重组病毒蚀斑 ,而转染以 B片段为侧翼的表达载体在同样条件下未筛选到蓝色病? 展开更多
关键词 鸡痘病毒疫苗 载体构建 新城疫病毒 F蛋白 表达
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新城疫病毒F基因在新型杆状病毒表达系统中的表达及重组病毒的免疫原性 被引量：11
15
作者 王兴龙 金宁一 +5 位作者 丁壮 金扩世 米志强 王宏伟 郭志儒 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期533-535,共3页
将新城疫病毒 (四平株 ) F基因插入到 p Fast Bac 质粒中 ,构建了重组质粒 p FF。 p FF转化大肠杆菌 DH10 Bac后 ,F基因在助手质粒 (helper plasmid)提供转座酶的情况下 ,通过转座进入 Bacmid,构建了重组 Bacmid(re- Bacmid)。在含有 X-... 将新城疫病毒 (四平株 ) F基因插入到 p Fast Bac 质粒中 ,构建了重组质粒 p FF。 p FF转化大肠杆菌 DH10 Bac后 ,F基因在助手质粒 (helper plasmid)提供转座酶的情况下 ,通过转座进入 Bacmid,构建了重组 Bacmid(re- Bacmid)。在含有 X- gal/ IPTG、庆大霉素、卡那霉素和四环素的琼脂平板上 ,筛选白色菌落后 ,提取 re- Bacm id转染 Sf- 9昆虫细胞。在昆虫细胞内 ,re- Bacm id经复制、表达、装配 ,形成重组杆状病毒 ,并表达 F蛋白。经 SDS- PAGE和 Western- blot分析 ,表达的 F蛋白的分子大小为 6 30 0 0 ,并证明在昆虫细胞内表达的蛋白能部分糖基化。表达的 F蛋白约占细胞总蛋白的 10 %。动物试验证明 。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 杆状病毒 重组病毒 免疫原性
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O型口蹄疫泛亚毒株单克隆抗体的制备及抗原表位差异分析 被引量：12
16
作者 鲁会军 金宁一 +5 位作者 韩松 郑敏 王凯 贾雷立 尹革芬 金扩世 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期494-496,共3页
用纯化的O型口蹄疫泛亚毒株免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次克隆和间接ELISA筛选,获得了ⅢA11、ⅢC3和ⅢF10 3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.通过间接ELISA测定,单抗效价为:细胞培养上清1:160～1... 用纯化的O型口蹄疫泛亚毒株免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次克隆和间接ELISA筛选,获得了ⅢA11、ⅢC3和ⅢF10 3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.通过间接ELISA测定,单抗效价为:细胞培养上清1:160～1:640,腹水为1:5×104～1:4×105;经ELISA法测定,3株单克隆抗体均与泛亚株VP1蛋白反应,而不与A型口蹄疫病毒VP1蛋白反应;单抗的亚类鉴定结果表明,ⅢA11和ⅢF10分泌的抗体为IgG1亚类,ⅢC3分泌的抗体为IgG2b亚类.单克隆抗体抗原识别位点分析结果表明,ⅢA11与另外2种单克隆抗体的识别位点不同,而ⅢC3和ⅢF10的识别位点相近. 展开更多
关键词 口蹄疫 O型 泛亚毒株 单克隆抗体 识别位点
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农杆菌介导优良玉米自交系Ⅱ型胚性愈伤组织遗传转化体系的建立 被引量：8
17
作者 余云舟 王罡 +2 位作者 金宁一 杜娟 季静 《玉米科学》 CAS CSCD 2003年第3期28-30,33,共4页
以玉米自交系8902、340、4112未成熟幼胚为材料,诱导、继代筛选出良好的Ⅱ型胚性愈伤组织,用农杆菌(EHA105和LBA4404)介导法转化其愈伤组织。利用本室构建的植物双元表达载体中携带的GUS报告基因对农杆菌转化系统的条件进行了研究,如农... 以玉米自交系8902、340、4112未成熟幼胚为材料,诱导、继代筛选出良好的Ⅱ型胚性愈伤组织,用农杆菌(EHA105和LBA4404)介导法转化其愈伤组织。利用本室构建的植物双元表达载体中携带的GUS报告基因对农杆菌转化系统的条件进行了研究,如农杆菌的侵染浓度、菌种类型、侵染时间、As(乙酰丁香酮)浓度及基因型等,建立了农杆菌介导优良玉米自交系Ⅱ型胚性愈伤组织高效遗传转化体系。 展开更多
关键词 农杆菌介导 玉米 自交系Ⅱ型 胚性愈伤组织 遗传转化体系 双元表达载体
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猪流感复合多表位核酸疫苗的构建及其表达研究 被引量：15
18
作者 贾雷立 金宁一 +8 位作者 金扩世 郑敏 金洪涛 连海 王瑞琳 李昌 鲁会军 马鸣潇 金明兰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期333-335,共3页
目的构建猪流感病毒复合多表位核酸疫苗,并研究其表达产物的抗原性。方法以H3、H9亚型流感的HA抗原表位及流感病毒的其它主要抗原(NP、NA、M)表位基因为基础,再附以Kozak序列和适当的酶切位点,设计并合成一段长765bp的复合多表位基因(Ep... 目的构建猪流感病毒复合多表位核酸疫苗,并研究其表达产物的抗原性。方法以H3、H9亚型流感的HA抗原表位及流感病毒的其它主要抗原(NP、NA、M)表位基因为基础,再附以Kozak序列和适当的酶切位点,设计并合成一段长765bp的复合多表位基因(Epi),其中各表位基本独立,将其克隆入真核表达载体pIRES1neo,构建重组质粒pIRE-Epi。将多表位抗原基因Epi插入到融合表达基因H57中,构建重组质粒pIRE-H57-Epi。将构建的重组质粒在Hela细胞中表达,并用免疫荧光方法初步检测所表达蛋白的抗原性。结果所构建的融合表达载体pIRE-Epi和pIRE-H57-Epi,在Hela细胞中表达出流感病毒多表位抗原蛋白,并具有抗原性。结论已成功构建猪流感病毒多表位基因,有可能成为较理想的猪流感候选疫苗。 展开更多
关键词 流感 表位 核酸疫苗
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新城疫病毒pIRHN核酸疫苗构建和表达及对肿瘤细胞的影响 被引量：10
19
作者 龚伟 葛涛 +5 位作者 王宏伟 罗琴芳 孙大辉 李萍 金宁一 薛立娟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期338-340,共3页
目的：研究NDV HN基因抗肿瘤作用及其可能机制。方法：以 pIRES1neo为表达载体构建了 NDV HN基因的pIRHN核酸疫苗，在体外转染HeLa细胞，用间接免疫荧光和Western blot检测pIRHN在真核细胞中表达状况，用荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳及TU... 目的：研究NDV HN基因抗肿瘤作用及其可能机制。方法：以 pIRES1neo为表达载体构建了 NDV HN基因的pIRHN核酸疫苗，在体外转染HeLa细胞，用间接免疫荧光和Western blot检测pIRHN在真核细胞中表达状况，用荧光显微镜、DNA琼脂糖电泳及TUNEL染色等方法，检测HN基因导致细胞死亡的类型；用3，5-二羟基甲苯法测定HeLa细胞唾液酸含量的变化。结果：pIRHN 转染HeLa细胞后，能够在真核细胞中表达，能促进肿瘤细胞死亡，其死亡方式主要以诱导细胞凋亡为主，pIRHN使 HeLa细胞唾液酸含量减少。结论：用 NDV HN基因所构建的核酸疫苗能够在真核细胞中高效表达，表达的 HN蛋白主要位于胞膜，胞浆中亦有 HN蛋白表达；pIRHN具有抗肿瘤作用，可能通过其表达产物与肿瘤细胞唾液酸受体的相互作用，发挥其抗肿瘤作用。本实验为迸一步阐明NDV抗肿瘤作用机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 唾液酸 NDV HN基因 基因疫苗 抗肿瘤作用 HeLa细胞 pIRHN 肿瘤免疫学
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H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞表位预测及抗原性分析 被引量：16
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作者 南文龙 金宁一 +5 位作者 鲁会军 赵翠青 田明尧 谭磊 张金双 白靓 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期630-633,637,共5页
目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特... 目的:预测H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞相关抗原表位,并初步分析其抗原性。方法:依据近年H5N1亚型禽流感病毒流行趋势,下载得到相关HA蛋白氨基酸序列。进行生物信息学综合分析预测,获得Th和B细胞相关抗原表位,并比较其保守性和特异性。通过BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清,初步鉴定候选表位抗原性。结果:综合多项预测及空间构象模拟结果,我们获得了三条候选Th和B细胞表位,分别为HA141～155、HA206～223、HA302～316。候选表位处于H5N1亚型禽流感HA1蛋白序列上相对保守的区域内,且与目前流行的H5N1亚型禽流感病毒HA相应区域具有较好的一致性。而不同候选表位在BALB/c小鼠和SPF鸡H5N1亚型禽流感病毒阳性血清反应中显示了不同抗体结合能力,预示了其成为功能表位的可能。结论:所筛选的表位具有成为H5N1亚型禽流感病毒HATh和B细胞相关抗原表位的可能。本研究为深入揭示流感病毒感染与免疫机制,H5N1亚型禽流感功能表位认知及表位疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素 H5N1 抗原表位
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