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靶向PD-1的shRNA慢病毒载体的构建
1
作者 贾旭 金威洋 +2 位作者 贾裕 王华 杨光华 《广东化工》 CAS 2023年第2期50-55,共6页
目的:设计以PD-1基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒载体,鉴定此RNA干扰系列对PD-1基因表达的影响,从设计序列中筛选高(>90%)干扰效率的靶点序列(PD694/791)。方法:设计合成3种PD-1的shRNA干扰序列,与LV3载体连接,进行... 目的:设计以PD-1基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒载体,鉴定此RNA干扰系列对PD-1基因表达的影响,从设计序列中筛选高(>90%)干扰效率的靶点序列(PD694/791)。方法:设计合成3种PD-1的shRNA干扰序列,与LV3载体连接,进行阳性鉴定,通过免疫印迹法(western)和阳性细胞数量检测筛选高干扰效率靶序列。结果:基于转染目的细胞的PD-1蛋白western检测结果,计算三种shRNA慢病毒载体的干扰效率分别为:PD791干扰效率为78%、PD 238干扰效率为8%、PD 694干扰效率88%。结论:成功构建靶向PD-1的shRNA慢病毒载体,其中干涉片段PD694和PD791对PD-1的干涉抑制效果显著,可以有效抑制原代T细胞PD-1表达,为研究开发PD-1抑制剂治疗肿瘤奠定基础。 展开更多
关键词 慢病毒载体 PD-1 肿瘤治疗
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寿仙谷牌铁皮石斛含片增强免疫力功能的药效学研究 被引量：4
2
作者 李振皓 金威洋 +5 位作者 蔡玉琛 王瑛 郑化先 王慧中 卢江杰 李明焱 《杭州师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2020年第2期153-158,共6页
通过小鼠淋巴细胞转化试验、SRBC诱导小鼠DTH实验、抗体生成细胞检测、小鼠血清溶血素的测定、小鼠碳廓清试验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬CRBC试验、NK细胞活性测定、脏器/体重比值,研究寿仙谷牌铁皮石斛含片对实验小鼠免疫力的影响.结果发... 通过小鼠淋巴细胞转化试验、SRBC诱导小鼠DTH实验、抗体生成细胞检测、小鼠血清溶血素的测定、小鼠碳廓清试验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬CRBC试验、NK细胞活性测定、脏器/体重比值,研究寿仙谷牌铁皮石斛含片对实验小鼠免疫力的影响.结果发现:与阴性对照组比较,中、高剂量组小鼠左后足部24h与0h厚度差值均增加、空斑数增多、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数均增加.有此得出结论:寿仙谷牌铁皮石斛含片具有增强实验小鼠免疫力功能. 展开更多
关键词 寿仙谷牌铁皮石斛含片 免疫力功能 药效学 小鼠
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基于NF-κB信号通路探讨酸浆内酯B对溃疡性结肠炎的抗炎作用
3
作者 朱百辉 金威洋 +1 位作者 闫艺 徐道绲 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2915-2919,共5页
目的:探究酸浆内酯B(PB)在溃疡性结肠炎(UC)中发挥的抗炎作用。方法:建立LPS诱导的斑马鱼炎症模型,分为对照组、模型组、吲哚美辛组、PB组,观察各组斑马鱼肠道中的中性粒细胞数量;DSS诱导的小鼠UC模型,分为对照组、模型组、美沙拉嗪组... 目的:探究酸浆内酯B(PB)在溃疡性结肠炎(UC)中发挥的抗炎作用。方法:建立LPS诱导的斑马鱼炎症模型,分为对照组、模型组、吲哚美辛组、PB组,观察各组斑马鱼肠道中的中性粒细胞数量;DSS诱导的小鼠UC模型,分为对照组、模型组、美沙拉嗪组、PB组,连续监测各组小鼠体质量、粪便性状及隐血情况,比较肠道黏膜的病理改变及相关炎症因子的表达;LPS诱导的细胞炎症模型,分为对照组、LPS组、PB组,观察各组相关炎症因子蛋白表达水平。结果:斑马鱼模型:PB组斑马鱼中性粒细胞数量较模型组显著减少(P<0.01)。小鼠模型:PB组小鼠体质量、疾病活动度评分、结肠长度较模型组显著改善(P<0.01);炎症因子TNF-α、IL-1β及IL-6在蛋白水平上显著降低(P<0.01)。细胞模型:PB组相关炎症因子TNF-α、IL-1β表达较LPS组显著降低(P<0.05,P<0.01),NF-κB相关信号通路的蛋白表达水平也得到了抑制。结论:对于UC,PB可以发挥抗炎作用,与下调NF-κB信号通路、降低炎症因子的表达和中性粒细胞的水平有关。 展开更多
关键词 酸浆内酯B 溃疡性结肠炎 斑马鱼 中性粒细胞 巨噬细胞
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蓝斑核促肾上腺皮质激素释放激素系统对肠易激综合征大鼠内脏敏感性的影响 被引量：2
4
作者 王曦 李蒙 +5 位作者 胡玥 戴春艳 傅宇斐 金威洋 陈喆 吕宾 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期40-44,共5页
目的研究中枢蓝斑区促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)系统在IBS中的作用,探索影响其改变的分子机制。方法采用母婴分离联合出生后复合应激构建大鼠IBS模型,后采用脑核团微取样的方法获得大鼠蓝斑区的组织样本。应用实时荧光定量PCR技术检... 目的研究中枢蓝斑区促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)系统在IBS中的作用,探索影响其改变的分子机制。方法采用母婴分离联合出生后复合应激构建大鼠IBS模型,后采用脑核团微取样的方法获得大鼠蓝斑区的组织样本。应用实时荧光定量PCR技术检测对照组和IBS组大鼠蓝斑核内细胞癌基因Fos(c-Fos),以及CRH和其相应受体促肾上腺皮质激素释放激素受体(CRHR)1、CRHR2的mRNA表达;同时检测DNA甲基转移酶(DNMT)1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA表达;采用蛋白质印迹法检测组蛋白甲基转移酶——ASH2样蛋白(ASH2L),以及SET核癌基因和MYND域2蛋白(SMYD2)的表达。统计学分析采用t检验。结果IBS组的直肠充气压低于对照组[(69.82±5.47)mmHg比(86.86±5.98)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)],c-Fos基因的mRNA水平较对照组升高(2.11±0.44比1.00±0.19),CRH的mRNA水平较对照组升高(1.99±0.35比1.00±0.13),SMYD2的蛋白表达水平较对照组上调(1.04±0.21比0.61±0.12),差异均有统计学意义(t=6.215、2.321、2.797、4.451,P均<0.05)。IBS组大鼠CRHR1、CRHR2、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的mRNA水平以及ASH2L的表达与对照组比较(分别为0.96±0.13比1.00±0.26、1.35±0.63比1.00±0.43、1.40±0.61比1.00±0.19、1.39±0.58比1.00±0.21、1.45±0.71比1.00±0.39和0.80±0.19比1.05±0.26),差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论母婴分离联合出生后复合应激通过影响蓝斑核内Crh基因的转录进而造成CRH系统和去甲肾上腺能系统应激调控网络的激活,导致大鼠内脏敏感性增加。Crh基因转录异常可能与SMYD2介导的组蛋白H3K36的甲基化有密切关系,而与DNA的甲基化修饰无关。 展开更多
关键词 肠易激综合征 蓝斑 母婴分离应激 促肾上腺皮质激素释放激素系统 表观遗传学
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人胃癌细胞Caveolin-1基因的表达与DNA甲基化修饰之间的关系研究 被引量：1
5
作者 毛立祺 戴春艳 +4 位作者 金威洋 傅宇斐 陈喆 吕宾 王曦 《浙江中医药大学学报》 CAS 2021年第9期939-944,共6页
[目的]观察胃癌细胞系中小窝蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)基因不同亚型的表达水平,探讨影响其基因转录调控的甲基化修饰途径。[方法]选择Cav-1基因表达水平不同的胃癌细胞系,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polyme... [目的]观察胃癌细胞系中小窝蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)基因不同亚型的表达水平,探讨影响其基因转录调控的甲基化修饰途径。[方法]选择Cav-1基因表达水平不同的胃癌细胞系,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测不同胃癌细胞系中Cav-1基因的两个亚型α和β的mRNA水平,之后利用磷酸胞苷酰(基)鸟苷(cytidylyl phosphate guanosine,Cp G)岛在线预测软件对其启动子区和第一外显子区CpG岛分布情况进行分析,最后应用甲基化qPCR对其甲基化水平进行检测。[结果]Real-time q PCR结果显示,人胃癌细胞MGC-803中Cav-1以及Cav-1α的表达分别是人正常胃黏膜上皮细胞GES1的(1.782±0.489)倍和(2.604±0.945)倍,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);人胃癌细胞AGS中的Cav-1以及Cav-1α的表达则仅是GES1细胞的(0.017±0.002)倍和(0.0005±0.00003)倍,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001)。相对于GES1细胞,MGC-803细胞和AGS细胞中Cav-1β的mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。利用CpG岛在线预测软件分析结果表明,人Cav-1α基因的启动子区存在一个174bp大小的CpG岛,该岛位于相对于转录起始位点(transcription start stecte,TSS)+1的-250~-77区域内,包含了17个CG位点。甲基化qPCR检测发现,Cav-1α基因启动子区-158~-77区域处于去甲基化状态,则Cav-1α的m RNA表达水平较高,相反,该区域处于高度甲基化状态,则其mRNA表达较低。[结论]人胃癌细胞中Cav-1的表达主要与其α亚型的表达相关,与β亚型无关;并且其启动子区CpG岛内-158~-77区域的甲基化修饰程度与其m RNA转录调控水平密切相关。 展开更多
关键词 小窝蛋白-1 亚型 胃癌 甲基化 启动子区 CPG岛 转录调控 基因表达
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水凝胶负载干细胞外泌体在组织再生领域的应用研究进展 被引量：4
6
作者 佟莹莹 金威洋 杨光华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1351-1362,共12页
近年来,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)衍生的外泌体在组织再生领域引发许多关注。MSCs衍生外泌体作为细胞间通讯的信号分子,具有天然靶向性强、免疫原性低等特点,其通过MSCs旁分泌途径被细胞吸收,参与调控发挥促进细胞或... 近年来,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)衍生的外泌体在组织再生领域引发许多关注。MSCs衍生外泌体作为细胞间通讯的信号分子,具有天然靶向性强、免疫原性低等特点,其通过MSCs旁分泌途径被细胞吸收,参与调控发挥促进细胞或组织再生功能。水凝胶作为再生医学领域的支架材料,具有良好的生物相容性、降解性等特点。将二者制成复合物联合使用后不仅可以提高外泌体在病变位置的滞留时间,且可通过原位注射等方法提高外泌体到达病变位置的剂量,在病变区域治疗效果显著且持续性改善。文中总结了现阶段外泌体与水凝胶复合物材料共同作用促进组织修复、再生的研究结果,以期为未来组织再生领域中的相关研究工作提供借鉴。 展开更多
关键词 水凝胶 外泌体 组织再生 干细胞
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慢病毒载体大规模生产技术的探究 被引量：1
7
作者 贾裕 金威洋 +6 位作者 刘阳 陈阳 贾旭 孙杰 佟莹莹 王华 杨光华 《广东化工》 CAS 2023年第15期43-46,共4页
为改进慢病毒载体生产过程中规模小、生产量不足以及滴度偏低等问题,采用悬浮培养293FT细胞方式,从培养基选择、细胞接种密度、质粒用量等方面对慢病毒包装条件进行优化,通过电击转染并结合生物反应器扩大生产,用离子交换色谱进行纯化... 为改进慢病毒载体生产过程中规模小、生产量不足以及滴度偏低等问题,采用悬浮培养293FT细胞方式,从培养基选择、细胞接种密度、质粒用量等方面对慢病毒包装条件进行优化,通过电击转染并结合生物反应器扩大生产,用离子交换色谱进行纯化以实现慢病毒大规模生产。结果显示以国产培养基M1进行前期细胞扩增培养,用3.75μg/mL质粒电击转染293FT细胞,转染后以2.0×10^(6)/m L的密度接种在优化的2 L生物反应器,用M2培养基培养,最终获得的慢病毒载体滴度达到1.8×10^(12)TU/mL。表明本团队研究的慢病毒载体大规模生产技术可以实现单批次、高滴度、无菌性慢病毒载体的生产,从而为满足临床试验与临床治疗提供基础和保障。 展开更多
关键词 慢病毒载体 大规模生产 质量检测 基因治疗
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