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原花青素对体外培养绵羊卵泡颗粒细胞增殖的影响 被引量：2
1
作者 杨小峰 秦小伟 +1 位作者 郭泽媛 吕丽华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期258-263,共6页
旨在研究原花青素对体外培养绵羊卵泡颗粒细胞增殖的影响。不同浓度梯度(20、30、40、50、60、70和80 μg/mL)原花青素的完全培养基中培养绵羊卵泡颗粒细胞,培养时间分别为24、48和72 h,通过MTT法测定颗粒细胞的增殖率;通过RT-qPCR法检... 旨在研究原花青素对体外培养绵羊卵泡颗粒细胞增殖的影响。不同浓度梯度(20、30、40、50、60、70和80 μg/mL)原花青素的完全培养基中培养绵羊卵泡颗粒细胞,培养时间分别为24、48和72 h,通过MTT法测定颗粒细胞的增殖率;通过RT-qPCR法检测细胞周期相关基因p21、p27和细胞凋亡相关基因caspase-8的表达。结果表明,培养48 h,在原花青素浓度为50 μg/mL时,颗粒细胞的增殖率最高,细胞周期相关基因p21、p27和细胞凋亡相关基因caspase-8这3个基因的表达量均显著降低(P<0.01)。综上所述,原花青素对体外培养绵羊卵泡颗粒细胞有一定的促进增殖效应,并且在相关基因mRNA水平上得到验证。 展开更多
关键词 原花青素 颗粒细胞 绵羊 体外培养 增殖
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Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡颗粒细胞增殖的影响
2
作者 郭泽媛 杜张胜 +5 位作者 张雅琦 陈春路 马晓燕 成颖 王锴 吕丽华 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第13期2597-2608,共12页
【目的】卵泡发育是一个复杂的调控过程,其中绵羊卵泡颗粒细胞(granulosa cells,GCs)的增殖,分化会直接影响卵泡的发育状况。TGF-β信号通路在绵羊卵巢发育和卵泡生长过程中起着重要作用,Smad7作为TGF-β信号通路关键性的抑制基因也发... 【目的】卵泡发育是一个复杂的调控过程,其中绵羊卵泡颗粒细胞(granulosa cells,GCs)的增殖,分化会直接影响卵泡的发育状况。TGF-β信号通路在绵羊卵巢发育和卵泡生长过程中起着重要作用,Smad7作为TGF-β信号通路关键性的抑制基因也发挥重要作用,通过探究Smad7介导TGF-β信号通路对绵羊卵泡GCs增殖凋亡的影响,为进一步研究Smad7在卵泡GCs增殖凋亡过程中的调控作用提供依据。【方法】选取4—6月龄未怀孕的晋中健康杜湖杂交母羊20只,屠宰后采集双侧卵巢组织,分离培养卵泡颗粒细胞,FSHR细胞免疫荧光鉴定,Smad7细胞免疫荧光的表达定位,CCK8法测定细胞增殖情况,绘制生长曲线;细胞传代后外源添加不同浓度Smad7激动剂积雪草苷(asiaticoside,AS)(0、100、200、400、600 ng·mL^(-1))培养绵羊卵泡GCs,选择AS最佳作用浓度处理二代颗粒细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平;合成3个siSmad7,转染至卵泡GCs中,选择干扰效果最佳的,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测TGF-β信号通路中关键基因及细胞凋亡和周期相关基因表达水平。【结果】Smad7在绵羊卵泡GCs中有表达;200 ng·mL^(-1) AS能极显著上调Smad7在GCs的表达(P<0.01),siSmad7-1对绵羊卵泡GCs的转染效果最佳(P<0.01);Smad7上调能显著增加TGF-β信号通路Smad4,TFDP-1和EP300的表达量(P<0.05),极显著增加TGF-β信号通路SP1的表达(P<0.01),显著增加凋亡相关基因Caspase8的表达量(P<0.05),极显著增加凋亡相关基因Caspase3和Bim的表达量(P<0.01),显著升高细胞周期相关基因P21和P27的表达量(P<0.05),极显著升高细胞周期相关基因CCND2的表达量(P<0.01),而CCND1的表达量显著降低(P<0.05);Smad7 siRNA显著降低TGF-β信号通路Smad4,TFDP-1和EP300的表达量(P<0.05),极显著降低TGF-β信号通路SP1的表达量(P<0.01),显著降低凋亡相� 展开更多
关键词 积雪草苷 SIRNA SMAD7 TGF-Β信号通路 绵羊 颗粒细胞
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