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用RNA干扰技术创造高直链淀粉马铃薯材料 被引量：41
1
作者 郭志鸿 张金文 +1 位作者 王蒂 陈正华 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期494-501,共8页
【目的】创造块茎高直链淀粉含量的转基因马铃薯材料。【方法】采用RT-PCR技术分别克隆了马铃薯Sbe1基因CDS内300bp的片段SⅠ和Sbe2基因CDS内410bp的片段SⅡ,并将SⅠ和SⅡ顺序连接得到融合片段SⅢ;以载体pHANNIBAL和pART27为基础,构建具... 【目的】创造块茎高直链淀粉含量的转基因马铃薯材料。【方法】采用RT-PCR技术分别克隆了马铃薯Sbe1基因CDS内300bp的片段SⅠ和Sbe2基因CDS内410bp的片段SⅡ,并将SⅠ和SⅡ顺序连接得到融合片段SⅢ;以载体pHANNIBAL和pART27为基础,构建具有SⅢ反向重复结构的植物表达载体pRNAiⅢ;采用农杆菌介导法转化马铃薯优良品种陇薯3号、甘农薯2号和大西洋。【结果】获得了融合片段SⅢ,构建了以Sbe1基因和Sbe2基因为靶标的RNA干扰载体pRNAiⅢ,通过农杆菌介导法获得了24个转基因株系,其中21个转基因株系试管薯的淀粉粒形态发生明显变化,表观直链淀粉含量介于59.31%～87.14%,比受体材料平均高出3.2倍。RT-PCR分析表明,在8个直链淀粉含量超过80%的转基因株系中检测不到Sbe1和Sbe2基因mRNA的积累。【结论】采用RNAi技术通过沉默内源Sbe1和Sbe2,可获得高直链淀粉含量的马铃薯材料。 展开更多
关键词 马铃薯 高直链淀粉 RNA干扰技术 淀粉分支酶基因
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数字媒体艺术在现代广告设计中的应用 被引量：25
2
作者 郭志鸿 《包装工程》 CAS 北大核心 2017年第18期259-261,共3页
目的探究数字媒体艺术在现代广告设计中的应用原则及方式。方法以数字媒体艺术为切入点,结合真实、创意、情感、系统等原则,对数字媒体艺术与现代广告设计的结合应用进行探索,并分别介绍数字媒体艺术在影视广告设计、户外广告设计及其... 目的探究数字媒体艺术在现代广告设计中的应用原则及方式。方法以数字媒体艺术为切入点,结合真实、创意、情感、系统等原则,对数字媒体艺术与现代广告设计的结合应用进行探索,并分别介绍数字媒体艺术在影视广告设计、户外广告设计及其他动态广告设计中的具体应用。结论数字媒体艺术与现代广告设计的结合,能够进一步丰富现代广告设计的内涵,提升设计质量,同时能够在一定程度上促进数字媒体艺术的发展和完善,实现共同提高。 展开更多
关键词 数字媒体艺术 现代广告设计 结合
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砂田退化对土壤温度和蒸发影响的模拟研究 被引量：21
3
作者 王金牛 谢忠奎 +1 位作者 郭志鸿 王亚军 《中国沙漠》 CSCD 北大核心 2010年第2期388-393,共6页
根据砂田不同耕作年份实地取样,并进行粒径分析,结果表明,砂层中混入的土含量随着砂田耕作年限增加而逐步增加;参照实地取样后粒径分析,以砂层混入土的不同重量百分比梯度设置处理T1-5%、T2-10%、T3-20%、T4-25%、T5-30%、T6-40%,并设对... 根据砂田不同耕作年份实地取样,并进行粒径分析,结果表明,砂层中混入的土含量随着砂田耕作年限增加而逐步增加;参照实地取样后粒径分析,以砂层混入土的不同重量百分比梯度设置处理T1-5%、T2-10%、T3-20%、T4-25%、T5-30%、T6-40%,并设对照CK1(纯砂砾覆盖)和CK2(无覆盖裸地),进行温度变化和蒸发效应的模拟研究。结果表明,5cm、10cm的土壤温度在8:00和20:00均随着退化程度的加重而降低,而在中午则呈横置S状;与对照纯砂砾覆盖CK1相比日高温延时性随退化程度加重而逐步减弱,日积温减小且昼夜温差增大;蒸发强度随着砂田退化程度的加重而逐渐增强,无覆盖处理蒸发量约是纯砂砾覆盖蒸发量的3倍,而严重退化的处理T5、T6分别是纯砾石覆盖的2倍,即严重退化砂田年蒸发量要比CK1多110mm。 展开更多
关键词 砂田 退化 温度 土壤水分 蒸发
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诱抗剂对切花百合生长、抗病性及相关酶活性的影响 被引量：15
4
作者 郭芳 王亚军 +4 位作者 谢忠奎 高永平 郭志鸿 张玉宝 童勋章 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期763-768,共6页
分别用DL-β氨基丁酸(DL-β-aminobutyric acid,BABA)、移栽灵(Isolane,有效成分:10%稻瘟灵,10%噁霉灵)、表油菜素内酯(epibrassino1ide,epi-BR)、水溶性壳聚糖(hydrosoluble chitosan,OS)、苯并噻二唑(acibenzolar,BTH)、脱落酸(abscis... 分别用DL-β氨基丁酸(DL-β-aminobutyric acid,BABA)、移栽灵(Isolane,有效成分:10%稻瘟灵,10%噁霉灵)、表油菜素内酯(epibrassino1ide,epi-BR)、水溶性壳聚糖(hydrosoluble chitosan,OS)、苯并噻二唑(acibenzolar,BTH)、脱落酸(abscisic acid,ABA)、MgO和NH4Cl浸泡切花百合种球根部与鳞片,通过盆栽、田间种植和鳞片包埋,测定其生长指标,POD、PAL、PPO等防御酶活性以及根腐病的病情指数。结果表明,各种试剂处理后,植株叶片防御酶活性增加,株高、叶片数、茎粗等生长性状得到改善,子球鳞片数增加,病情指数减小。其中OS400mg·L-1处理的百合在各个生理指标以及抗病性上明显高于对照。 展开更多
关键词 百合 切花百合 根腐病 生理生化指标 水溶性壳聚糖
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ubi启动子驱动的花生芪合酶基因表达载体的构建及玉米遗传转化初报 被引量：11
5
作者 郭志鸿 王汉宁 +3 位作者 陶玲 张金文 白斌 陈正华 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第2期117-123,共7页
研究克隆了玉米的ubi启动子,以pBI 121为基本载体,构建了含有ubi启动子的中间载体pBI UB及ubi启动子驱动的GFP基因的植物表达载体pBI UG;采用基因枪法将载体pBI UG转入洋葱表皮细胞对启动子活性进行检测,结果表明GFP基因在洋葱表皮细胞... 研究克隆了玉米的ubi启动子,以pBI 121为基本载体,构建了含有ubi启动子的中间载体pBI UB及ubi启动子驱动的GFP基因的植物表达载体pBI UG;采用基因枪法将载体pBI UG转入洋葱表皮细胞对启动子活性进行检测,结果表明GFP基因在洋葱表皮细胞中得到了表达。本实验同时采用RT-PCR技术克隆了花生的芪合酶基因(Res),该基因编码的蛋白质的氨基酸序列与已公布的芪合酶的氨基酸序列的同源性为99.49 %,并且164位的活性中心Cys没有发生突变;将该Res基因插入载体pBI UB构建了ubi启动子控制下的花生芪合酶基因植物表达载体pBI UA,并对玉米进行了遗传转化,得到了转化苗。 展开更多
关键词 花生芪合酶基因 玉米ubi启动子 植物表达载体 玉米 遗传转化
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生物炭对兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)连作土壤的改良作用 被引量：15
6
作者 周丽靖 王亚军 +5 位作者 谢忠奎 张玉宝 郭志鸿 邱阳 华翠平 赵成政 《中国沙漠》 CSCD 北大核心 2019年第2期134-143,共10页
连作障碍严重影响兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)的产量和品质。生物炭在土壤改良中具有一定的作用。将竹炭和稻壳炭加入兰州百合连作土壤,测定了土壤生物化学性质,探讨生物炭对连作退化土壤的改良效应。结果表明:(1)生物炭的... 连作障碍严重影响兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)的产量和品质。生物炭在土壤改良中具有一定的作用。将竹炭和稻壳炭加入兰州百合连作土壤,测定了土壤生物化学性质,探讨生物炭对连作退化土壤的改良效应。结果表明:(1)生物炭的添加提高了百合连作土壤的有机质、碱解氮、有效磷和有效钾的含量。(2)生物炭的施用在一定程度上提高了土壤酶活性。(3)利用Illumina Miseq平台检测了土壤样品微生物群落,与对照相比,添加生物炭使微生物群落结构发生了明显的变化,有益细菌鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)的丰度升高,而兰州百合主要致病真菌镰刀菌属(Fusarium)的丰度下降,降低了枯萎病发生的可能。(4)在盆栽试验中,各处理的根系活力和生物量皆高于对照,生物量提高11.85%～13.21%,根系活力提高了57.88%～58.88%。施用生物炭对克服兰州百合的连作障碍、提高土壤肥力有明显的促进作用。 展开更多
关键词 兰州百合(Lilium davidii var.unicolor) 生物炭 土壤生物化学性质
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马铃薯重离子辐射育种研究 被引量：11
7
作者 谢忠奎 王亚军 +2 位作者 颉红梅 郭志鸿 卫增泉 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期187-190,共4页
在2000—2005年将杂交技术和重离子辐射相结合,采用55MeV/u的40Ar17+离子对马铃薯杂交种子和微型薯进行了不同剂量的贯穿辐射或离子注入处理。结果表明,对马铃薯微型薯进行重离子辐射能显著提高块茎的产量。而杂交技术和重离子辐射相结... 在2000—2005年将杂交技术和重离子辐射相结合,采用55MeV/u的40Ar17+离子对马铃薯杂交种子和微型薯进行了不同剂量的贯穿辐射或离子注入处理。结果表明,对马铃薯微型薯进行重离子辐射能显著提高块茎的产量。而杂交技术和重离子辐射相结合是一种更高效的育种方式,不仅能提高块茎的增产幅度,还能改善其加工品质。微型薯重离子辐射的最佳剂量为60Gy,杂交种子辐射的适宜剂量范围在60—120Gy之间。通过对辐射后代的多年选育,获得了几个产量显著高于对照、品质优良的马铃薯新品系。 展开更多
关键词 马铃薯 重离子辐射 产量 品质
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陇中黄土高原土地利用变化对土壤有机碳、无机碳的影响 被引量：11
8
作者 张丽华 谢忠奎 +1 位作者 王亚军 郭志鸿 《土壤通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期369-375,共7页
通过对陇中黄土高原5种典型土地利用方式土壤理化性状、土壤有机、无机碳含量和碳酸盐的6C值的分析表明，（1）荒漠草原开垦、栽植人工林后，土壤砂粒含量减少、粉粒增加，以荒漠草原开垦变化显著；pH值降低，以荒漠草原栽植人工林变化... 通过对陇中黄土高原5种典型土地利用方式土壤理化性状、土壤有机、无机碳含量和碳酸盐的6C值的分析表明，（1）荒漠草原开垦、栽植人工林后，土壤砂粒含量减少、粉粒增加，以荒漠草原开垦变化显著；pH值降低，以荒漠草原栽植人工林变化显著；电导率均显著降低。退耕还草、弃耕后砂粒含量增加、粉粒减少，pH值升高，均以耕地弃耕后变化显著；退耕还草后电导率显著降低。（2）荒漠草原开垦、退耕还草、弃耕后0—100cm土壤有机碳含量增加，天然植被栽植人工林后土壤有机碳降低，其中，退耕还草引起土壤有机碳显著变化。（3）荒漠草原转变为人工林、耕地后1m深土壤无机碳含量显著下降，而耕地弃耕或退耕还草后土壤无机碳的下降未达到显著水平。土地利用类型之间土壤无机碳含量的垂直分布、碳稳定同位素也存在一定差异。 展开更多
关键词 土地利用 覆被 土壤有机碳 无机碳 碳稳定同位素 黄土高原
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rd29A启动子克隆及对低温响应的研究 被引量：5
9
作者 白斌 张金文 +1 位作者 郭志鸿 陈正华 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第3期249-254,共6页
研究从拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组DNA克隆了rd29A基因启动子,序列分析表明该启动子具有两个干旱、高盐和低温响应顺式作用元件(DRE),在851～856 bp碱基处为TATA box,其它主要调控区域也存在。然后,分别用rd29A启动子和CaMV 35... 研究从拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组DNA克隆了rd29A基因启动子,序列分析表明该启动子具有两个干旱、高盐和低温响应顺式作用元件(DRE),在851～856 bp碱基处为TATA box,其它主要调控区域也存在。然后,分别用rd29A启动子和CaMV 35S启动子,构建了具有绿色荧光蛋白(GFP)基因的植物表达载体pBIG和pBIRG。通过基因枪导入法转化洋葱表皮细胞,在25 ℃和4 ℃条件下培养16 h后,用荧光显微镜观察GFP基因的表达水平。结果表明,在低温条件下,rd29A启动子的活性明显高于CaMV 35S启动子,说明rd29A启动子是一低温诱导型启动子,可满足在低温条件下使目的基因在转基因植物中进行表达的目的。 展开更多
关键词 RD29A启动子 绿色荧光蛋白基因 基因枪法 低温诱导 表达活性
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复方地黄对老年痴呆小鼠细胞形态影响和相关增殖因素的变化 被引量：6
10
作者 孙丽慧 费洪新 +3 位作者 侯魁元 陈志伟 李林 郭志鸿 《光明中医》 2009年第7期1243-1246,共4页
目的:研究复方地黄对老年小鼠的神经生长因子改变及形态学的影响,进一步探讨复方地黄对老年痴呆的作用机制。方法:将实验小鼠随机分为4组,实验组给予复方地黄混浊液2ml/只.天灌胃。治疗组给予安理申混悬液400mg/千克.天,空白对照组和模... 目的:研究复方地黄对老年小鼠的神经生长因子改变及形态学的影响,进一步探讨复方地黄对老年痴呆的作用机制。方法:将实验小鼠随机分为4组,实验组给予复方地黄混浊液2ml/只.天灌胃。治疗组给予安理申混悬液400mg/千克.天,空白对照组和模型对照组用等量生理盐水。三周后,各组小鼠进行行为学测试,应用免疫组化法检测脑组织神经生长因子改变及电镜观察形态学改变。结果:复方地黄能够改善SAM-P/8小鼠的学习和记忆能力,减少痴呆模型小鼠的包涵体数量,增加大脑皮层及海马区神经营养因子的含量,对SAM-P/8小鼠具有较好防治作用。结论:复方地黄能够明显改善老年痴呆小鼠的学习能力和蛋白表达。 展开更多
关键词 复方地黄 学习记忆 神经营养因子
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非物质文化遗产与高校美术教育——原生态美术的思考 被引量：7
11
作者 郭志鸿 《美术教育研究》 2017年第3期152-153,共2页
在我国,非物质文化遗产属于崭新的课题。该文作者认为,非物质文化遗产传承和发展的主体是高等院校,高等院校在非物质文化遗产的传承和发展中发挥着非常重要的作用。高校美术教学需要重视非物质文化遗产的研究,更好地传承本民族原生态的... 在我国,非物质文化遗产属于崭新的课题。该文作者认为,非物质文化遗产传承和发展的主体是高等院校,高等院校在非物质文化遗产的传承和发展中发挥着非常重要的作用。高校美术教学需要重视非物质文化遗产的研究,更好地传承本民族原生态的美术文化,使那些原生态的美术可以走进高校,使母体文化得到有效的保护和发展。 展开更多
关键词 非物质文化遗产 高校 美术教育
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利用RNA干涉技术及微束激光转化法培育抗病毒马铃薯 被引量：6
12
作者 郭志鸿 张金文 +1 位作者 陈正华 王兰岚 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第5期525-531,共7页
针对马铃薯生产中危害严重、分布广泛并且具有强烈协生作用的马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒,开展了抗病毒病的育种研究.采用RT-PCR技术分别克隆了267 bp的编码马铃薯X病毒外壳蛋白（PVX-cp）基因的相对保守区段X和294 bp的编码马铃薯Y病毒... 针对马铃薯生产中危害严重、分布广泛并且具有强烈协生作用的马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒,开展了抗病毒病的育种研究.采用RT-PCR技术分别克隆了267 bp的编码马铃薯X病毒外壳蛋白（PVX-cp）基因的相对保守区段X和294 bp的编码马铃薯Y病毒外壳蛋白（PVY-cp）基因的相对保守区段Y两个片段,将其按顺序连接,形成融合基因XY,然后分别将融合基因XY正向和反向插入到载体pHANNIBAL中,得到了载体pHIV,再用NotI对pHIV进行酶切,将产生的大片段插入到载体pART27中,得到同时以PVX-cp基因和PVY-cp基因为靶标的XY的RNAi载体pARIV.采用微束激光穿刺转化技术转化马铃薯品种Favorita的愈伤组织,得到了14株表型正常的转基因植株,转基因植株的southern blot分析表明,导入的外源融合基因拷贝数介于2～4之间.攻毒实验表明,其中11株转基因植株对PVX、PVY°以及PVX和PVY°混合侵染均表现免疫,而其它3株的病毒浓度也低于对照.这一结果将为利用RNAi干涉技术开展植物抗多种病毒病的育种提供重要依据,验证了所构建的RNA干涉（RNA interference RNAi）载体具有良好的功能,同时又一次证明微束激光穿刺法是一种有效的遗传转化手段. 展开更多
关键词 RNA干涉 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒 融合基因 微束激光穿刺技术
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复方地黄对老年痴呆小鼠形态影响和相关增殖因素变化的研究 被引量：6
13
作者 孙丽慧 费洪新 +5 位作者 纪慧 张腾腾 唐菠 刘文华 李林 郭志鸿 《中华中医药学刊》 CAS 2009年第12期2605-2607,共3页
目的:研究复方地黄对老年小鼠的神经生长因子改变及形态学的影响,进一步探讨复方地黄对老年痴呆的作用机制。方法:将实验小鼠随机分为4组,实验组给予复方地黄混浊液每天2mL/只灌胃。治疗组给予安理申混悬液每天400mg/kg,空白对照组和模... 目的:研究复方地黄对老年小鼠的神经生长因子改变及形态学的影响,进一步探讨复方地黄对老年痴呆的作用机制。方法:将实验小鼠随机分为4组,实验组给予复方地黄混浊液每天2mL/只灌胃。治疗组给予安理申混悬液每天400mg/kg,空白对照组和模型对照组用等量生理盐水。3周后,各组小鼠进行行为学测试,应用免疫组化法检测脑组织神经生长因子改变及电镜观察形态学改变。结果:复方地黄能够改善SAM-P/8小鼠的学习和记忆能力,减少痴呆模型小鼠的包涵体数量,增加大脑皮层及海马区神经营养因子的含量,对SAM-P/8小鼠具有较好防治作用。结论:复方地黄能够明显改善老年痴呆小鼠的学习能力和蛋白表达。 展开更多
关键词 复方地黄 学习记忆 神经营养因子
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不同灌溉量对兰州百合生长发育及产量的影响 被引量：6
14
作者 李文美 王亚军 +2 位作者 谢忠奎 张玉宝 郭志鸿 《北方园艺》 CAS 北大核心 2020年第11期54-63,共10页
以兰州百合为试材,采用遮雨棚人工控水方式,研究了在不同灌溉条件下兰州百合的生长形态、脯氨酸、糖含量、产量及水分利用效率的变化。结果表明:随着灌溉量的增加,兰州百合的株高、叶绿素含量(SPAD值)、叶片相对含水量、地上部、地下部... 以兰州百合为试材,采用遮雨棚人工控水方式,研究了在不同灌溉条件下兰州百合的生长形态、脯氨酸、糖含量、产量及水分利用效率的变化。结果表明:随着灌溉量的增加,兰州百合的株高、叶绿素含量(SPAD值)、叶片相对含水量、地上部、地下部、产量和水分利用率均增加。在350 mm灌溉量下脯氨酸含量显著上升,在灌溉量为450 mm条件下兰州百合鳞茎中的淀粉含量、海藻糖含量和多糖含量差异显著且含量最高,可溶性糖随着灌溉量的增加而增加。兰州百合鳞茎中葡萄糖的含量随着灌溉量的增大呈现先升高后降低的趋势。在550 mm灌溉量下兰州百合鳞茎中果糖含量最高(2.86 mg·g-1)。灌溉量在550 mm下兰州百合产量(鳞茎质量)显著提高。在350~450 mm灌溉量下兰州百合鳞茎中腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性最高,450 mm灌溉量下蔗糖合成酶活性最低,α-淀粉酶活性在650 mm灌溉量下最高。不同灌溉量下耗水量和水分利用效率依次为650 mm>550 mm>450 mm>350 mm。结合兰州百合在不同灌溉量下的产量(鳞茎质量)、淀粉含量、可溶性糖含量、果糖含量等指标,可知在550 mm的灌溉量下兰州百合的产量和品质均显著提高,因此兰州百合的灌溉量以550 mm最佳。 展开更多
关键词 不同灌溉量 叶片含水量 糖含量 渗透调节 兰州百合
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砾石长期覆盖对土壤呼吸的影响 被引量：6
15
作者 赵成政 王亚军 +5 位作者 谢忠奎 张玉宝 郭志鸿 邱阳 华翠平 周丽靖 《中国沙漠》 CSCD 北大核心 2020年第2期232-239,共8页
砾石覆盖是西北黄土高原地区的传统保护性耕作技术,具有明显的蓄水、保墒、增温、压碱和保持地力作用。研究砾石覆盖农田系统中的土壤呼吸,有助于了解地面覆盖条件对CO2通量的影响和土壤健康状况。利用LI6400土壤呼吸系统对甘肃皋兰长... 砾石覆盖是西北黄土高原地区的传统保护性耕作技术,具有明显的蓄水、保墒、增温、压碱和保持地力作用。研究砾石覆盖农田系统中的土壤呼吸,有助于了解地面覆盖条件对CO2通量的影响和土壤健康状况。利用LI6400土壤呼吸系统对甘肃皋兰长期砾石覆盖农田(12年)不同覆盖厚度下的土壤呼吸进行了原位监测,并对环境因子与土壤呼吸的日变化相关性进行了分析。结果表明:(1)土壤呼吸的日变化与温度的变化一致,呈单峰型,砾石覆盖后土壤呼吸峰值出现在16:00-17:00,明显滞后于裸地出现的峰值时间(14:00-15:00),且峰值随着覆盖厚度的增加而减小;(2)土壤表层(0~10 cm)温度与土壤呼吸呈极显著幂函数关系(P<0.01),砾石覆盖降低了土壤呼吸的温度敏感性指数(Q10),覆盖后两次监测中Q10为1.78~2.87(2017年)和1.70~1.96(2018年);(3)砾石覆盖后提高了夜间土壤呼吸,导致土壤呼吸的日累积碳排放量显著提高,随着覆盖厚度的增加而降低,覆盖处理中厚度为11 cm最小的碳排放量两次测量分别为2.00 g·m-2和0.90 g·m-2,比裸地分别增加了15%和18%;(4)土壤特征因子中,土壤水分、pH与土壤呼吸累积碳排放量呈正相关,有机质、碱解氮、速效磷、电导率与土壤呼吸累积碳排放量呈负相关。 展开更多
关键词 砾石覆盖 土壤呼吸 温度敏感性指数
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利用ihpRNA介导的基因沉默培育抗冷糖化马铃薯 被引量：4
16
作者 郭志鸿 张金文 +1 位作者 王蒂 陈正华 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期479-484,共6页
为培育抗冷糖化的转基因马铃薯材料,克隆了368 bp的马铃薯酸性转化酶(AcInv)基因3′端非翻译区(3′UTR)和281 bp的马铃薯VP1-ABI3-like protein基因的第一内含子,构建了内含子连接的马铃薯AcInv基因3′UTR的发夹型RNA(ihpRNA)载体pBIV;... 为培育抗冷糖化的转基因马铃薯材料,克隆了368 bp的马铃薯酸性转化酶(AcInv)基因3′端非翻译区(3′UTR)和281 bp的马铃薯VP1-ABI3-like protein基因的第一内含子,构建了内含子连接的马铃薯AcInv基因3′UTR的发夹型RNA(ihpRNA)载体pBIV;采用微束激光穿刺技术转化马铃薯品种,得到了149个转基因株系,其中139个转基因株系在低温贮藏35 d时块茎还原糖含量低于亲本材料。RT-PCR分析表明还原糖含量降低的转基因植株中检测不到AcInv基因mRNA的积累。本研究结果表明以3′UTR作为RNAi载体的干涉片段可以有效地抑制靶标基因mRNA的积累,通过对AcInv沉默可获得抗低温糖化的马铃薯育种材料。 展开更多
关键词 马铃薯 冷糖化 酸性转化酶 3’端非翻译区 ihpRNA
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采用一种新型RNAi载体培育转基因高直链淀粉马铃薯 被引量：4
17
作者 郭志鸿 王亚军 +4 位作者 张金文 张玉宝 王金牛 谢忠奎 陈正华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期809-815,共7页
采用PCR技术分别克隆nos终止子、烟草axi1内含子和烟草ubi.u4启动子,亚克隆部分与马铃薯Sbe1同源、部分与Sbe2同源的融合基因SIII,构建具有“ubi.u4启动子—反向SIII—反向nos终止子—axi1内含子—正向nos终止子”结构的异源3′端UTR反... 采用PCR技术分别克隆nos终止子、烟草axi1内含子和烟草ubi.u4启动子,亚克隆部分与马铃薯Sbe1同源、部分与Sbe2同源的融合基因SIII,构建具有“ubi.u4启动子—反向SIII—反向nos终止子—axi1内含子—正向nos终止子”结构的异源3′端UTR反向重复序列型RNAi载体pCUSNI,采用农杆菌介导法转化马铃薯品种陇薯3号、甘农薯2号和大西洋,获得了16个转基因植株,其中14个的块茎直链淀粉含量大幅度增加,表观直链淀粉含量介于53.80%~85.33%;但随着直链淀粉含量的升高,转基因马铃薯淀粉含量下降。半定量RT-PCR分析表明,在直链淀粉含量超过80%的转基因株系中检测不到Sbe1和Sbe2基因mRNA的积累。结果表明,异源3′端UTR反向重复序列型RNAi载体pCUSNI能够高频、高效地同时抑制马铃薯Sbe1和Sbe2基因的表达,是一个优良的RNAi载体。以载体pCUSNI为基础,再以植物的其他基因为靶,只需在pCUSNI的BamHI和XbaI位点之间插入干涉片段替换SIII即可完成载体构建,而不必构建靶标基因的反向重复序列,使载体制备迅速便捷。 展开更多
关键词 RNAI nos终止子 反向重复序列 高直链淀粉马铃薯
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白藜芦醇对衰老昆明小鼠肝细胞作用机制的探讨 被引量：3
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作者 李永涛 费洪新 +5 位作者 沈雷 姜杨 郭志鸿 高磊 石小芳 刘文华 《中国医药导报》 CAS 2010年第6期25-27,共3页
目的:观察白藜芦醇对衰老雌性昆明小鼠肝细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及其抗氧化能力的影响,研究白藜芦醇延缓肝细胞衰老的作用和机制。方法:采用自然衰老雌性昆明小鼠,给予不同剂量的白藜芦醇,用免疫组化方法观察肝细胞凋亡相关蛋白Bcl-... 目的:观察白藜芦醇对衰老雌性昆明小鼠肝细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及其抗氧化能力的影响,研究白藜芦醇延缓肝细胞衰老的作用和机制。方法:采用自然衰老雌性昆明小鼠,给予不同剂量的白藜芦醇,用免疫组化方法观察肝细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,用生化法测定血清总超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。结果:衰老对照组与青年对照组比较,Bcl-2表达明显降低,Bax表达升高,血清中SOD活力下降、MDA含量显著升高(P<0.05),120mg/ml白藜芦醇可以使Bcl-2表达及SOD活力升高,Bax表达降低,MDA含量显著减少(P<0.05)。结论:120mg/ml白藜芦醇可调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达和对抗自由基对肝细胞的损伤,对肝细胞具有一定的保护作用。 展开更多
关键词 白藜芦醇 衰老 细胞凋亡
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东方百合低温打破休眠期间碳水化合物及呼吸代谢变化 被引量：4
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作者 张亚娟 谢忠奎 +3 位作者 高宏 安丽萍 郭志鸿 张玉宝 《中国沙漠》 CSCD 北大核心 2012年第1期100-104,共5页
以东方百合"西伯利亚"为试材,对不同温度(25℃和4℃)处理下百合外部及内部鳞片的碳水化合物含量和呼吸代谢途径的关键酶进行了测定。结果表明,随着储藏时间的延长,百合淀粉含量不断下降,可溶性糖含量在低温处理中期较高,且外... 以东方百合"西伯利亚"为试材,对不同温度(25℃和4℃)处理下百合外部及内部鳞片的碳水化合物含量和呼吸代谢途径的关键酶进行了测定。结果表明,随着储藏时间的延长,百合淀粉含量不断下降,可溶性糖含量在低温处理中期较高,且外部鳞片变化较内部鳞片变化剧烈,4℃低温处理糖化比25℃明显;在百合休眠期间,3条主要呼吸代谢途径的关键酶——糖酵解(EMP)途径的丙酮酸激酶(ATP)、三羧酸循环途径(TCA)的琥珀酸脱氢酶(SDH)和磷酸戊糖途径(PPP)的葡萄糖六磷酸脱氢酶(G6PDH)呈现不同的变化趋势。根据不同途径关键酶的变化趋势判断,处理前30d,3条主要呼吸途径变化较剧烈,EMP占绝对优势且不断升高,TCA和PPP呈不断下降过程,且内部鳞片变化比外部鳞片明显;其后随着休眠处理时间的延长,EMP不断下降,而TCA和PPP不断得到活化;呼吸强度变化趋势与碳水化合物自然休眠解除的进程基本一致。 展开更多
关键词 东方百合 休眠 碳水化合物 呼吸代谢
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一种快速检测启动子调控基因表达活性方法的探讨 被引量：2
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作者 白斌 张金文 郭志鸿 《中国农学通报》 CSCD 2005年第7期47-49,共3页
启动子活性检测是基因工程实验的重要组成部分,利用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对rd29A启动子在受体细胞中调控基因表达的活性进行检测,采用基因枪法进行对洋葱表皮细胞的遗传转化,培养24h后在荧光显微镜下观察GFP基因的表达情... 启动子活性检测是基因工程实验的重要组成部分,利用绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,对rd29A启动子在受体细胞中调控基因表达的活性进行检测,采用基因枪法进行对洋葱表皮细胞的遗传转化,培养24h后在荧光显微镜下观察GFP基因的表达情况,并通过软件测定不同培养条件下GFP基因表达后的荧光强度,能较为准确的鉴定该启动子的活性大小,并达到量化目的。方法简单、省时、可靠,可以作为一种有效的检测启动子活性的方法。 展开更多
关键词 表达活性 快速检测 绿色荧光蛋白(GFP) RD29A启动子 调控基因表达 GFP基因 启动子活性 组成部分 基因工程 活性检测 报告基因 受体细胞 遗传转化 表皮细胞 基因枪法 镜下观察 荧光显微 荧光强度 培养条件
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