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犬冠状病毒诊断技术研究进展 被引量：12
1
作者 郝雲峰 由欣月 +1 位作者 秦彤 崔尚金 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第12期3514-3519,共6页
犬冠状病毒(canine coronavirus,CCoV)是导致犬胃肠道疾病的常见病原,与其他肠道病原共同感染时犬死亡率显著升高,严重影响养犬业的健康发展。快速、灵敏和特异的诊断技术对该病的防控起到至关重要的作用。除临床诊断外,常见的CCoV实验... 犬冠状病毒(canine coronavirus,CCoV)是导致犬胃肠道疾病的常见病原,与其他肠道病原共同感染时犬死亡率显著升高,严重影响养犬业的健康发展。快速、灵敏和特异的诊断技术对该病的防控起到至关重要的作用。除临床诊断外,常见的CCoV实验室诊断技术主要有病毒分离培养、电镜观察及血清学诊断技术,然而这些技术往往耗时长且工作量较大,分子诊断技术主要包括普通RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、纳米PCR等检测方法,这些诊断技术在准确性、敏感性及特异性上有极大提高,诊断效率也显著提高。近年来,随着分子免疫诊断技术与新型材料研发技术的迅速发展,新的检测方法应运而生,纳米金、核酸探针、芯片技术及纳米生物传感器等技术更加敏感、便捷、高效且都具有制备试剂盒的可能性,从而在诊断上具有简洁性和普适性。文章将针对CCoV的诊断技术进行全面综述,以期为CCoV诊断试剂的研发提供参考。 展开更多
关键词 犬冠状病毒(CCoV) 流行病学 临床诊断 实验室诊断
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犬腺病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：10
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作者 由欣月 郝雲峰 +1 位作者 崔尚金 秦彤 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第6期29-34,共6页
为建立良好的犬腺病毒检测方法,参考GenBank中犬腺病毒毒株(GenBank登录号:U77082.1)的E3基因,设计并合成了一对特异性引物。扩增的目的片段与pMD19-T载体相连接构建重组质粒,以该重组质粒为模板建立特异性好、灵敏度高且可快速检测犬... 为建立良好的犬腺病毒检测方法,参考GenBank中犬腺病毒毒株(GenBank登录号:U77082.1)的E3基因,设计并合成了一对特异性引物。扩增的目的片段与pMD19-T载体相连接构建重组质粒,以该重组质粒为模板建立特异性好、灵敏度高且可快速检测犬腺病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。经特异性方法验证,在常见的五种犬病毒病中,本方法只能检测出犬腺病毒存在。敏感性试验结果表明,本方法的灵敏性较普通PCR方法高出100倍。重复性试验结果的变异系数均不高于0.95%。本方法的建立可为犬腺病毒的检测提供技术支持。 展开更多
关键词 犬腺病毒 荧光定量PCR E3基因 检测方法
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14株北京地区犬细小病毒分离毒株的VP2、NS1基因序列分析 被引量：5
3
作者 李少晗 由欣月 +4 位作者 范君文 徐一 郝雲峰 崔尚金 秦彤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期262-267,共6页
从北京地区疑似细小病毒感染的犬粪拭子中成功分离鉴定出14株犬细小病毒(CPV)毒株,并对其完整的VP2和NS1基因进行了序列分析。结果表明,鉴定到的14株CPV毒株中,7株为New CPV-2a型,7株为CPV-2c型。此外,NS1的19、33、293、588、624和656... 从北京地区疑似细小病毒感染的犬粪拭子中成功分离鉴定出14株犬细小病毒(CPV)毒株,并对其完整的VP2和NS1基因进行了序列分析。结果表明,鉴定到的14株CPV毒株中,7株为New CPV-2a型,7株为CPV-2c型。此外,NS1的19、33、293、588、624和656位氨基酸以及VP2的13、574位氨基酸为新鉴定的氨基酸突变位点。基于VP2、NS1基因的系统进化分析表明,大部分的New CPV-2a型和CPV-2c型毒株与广西南宁和吉林长春地区的分离毒株亲缘关系密切,说明本次分离毒株与广西或吉林地区分离毒株具有相同的起源。本研究为更好地开展犬细小病毒流行病学调查提供了有益借鉴,也为深入研究犬细小病毒变异和传播的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 分离鉴定 VP2基因 NS1基因 进化分析
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犬腺病毒CAV-BJ02株的分离与鉴定 被引量：4
4
作者 由欣月 刘畅 +3 位作者 郝雲峰 梁琳 秦彤 崔尚金 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期2016-2021,共6页
本研究旨在分离犬腺病毒(CAV)的北京地区流行株,采集北京地区某宠物医院2~4月龄发生咳嗽等呼吸道症状犬的鼻咽拭子,经胶体金和PCR检测,初筛为犬腺病毒阳性。经过处理后,将其处理液接种于MDCK细胞,进行连续传代培养,出现变圆、脱落、葡... 本研究旨在分离犬腺病毒(CAV)的北京地区流行株,采集北京地区某宠物医院2~4月龄发生咳嗽等呼吸道症状犬的鼻咽拭子,经胶体金和PCR检测,初筛为犬腺病毒阳性。经过处理后,将其处理液接种于MDCK细胞,进行连续传代培养,出现变圆、脱落、葡萄串样等特征性细胞病变。通过形态学观察、PCR鉴定及动物回归试验等方法对其进行鉴定。PCR扩增片段测序结果表明,该分离株为犬腺病毒Ⅱ型,遂将其命名为CAV-BJ02(GenBank:MN744708)株。用Reed-Muench法测得CAV-BJ02株的TCID 50为106.7·(100μL)-1。电镜下可清晰地观察到呈正六边形的二十面体、直径在86 nm左右的犬腺病毒颗粒。遗传进化分析结果表明,本株病毒为CAV-Ⅱ型。动物回归试验结果表明,CAV-BJ02株可引起犬发热等轻微临床症状,以口鼻分泌物为主要排毒方式,排毒期为5~6 d,不导致犬死亡。上述研究结果为深入了解北京地区CAV的流行情况,为犬腺病毒病的诊断、防治及后续相关研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 犬腺病毒 分离鉴定 进化分析 动物试验
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