牛环形泰勒虫HSP70基因的克隆表达、特性分析及互作蛋白网络构建 被引量：5

1

作者 樊新丽 宋瑞其 +5 位作者 呼尔查 李敏 翟雪洁 郝蕴伟 巴音查汗 张杨 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期1-11,共11页

为了表达牛环形泰勒虫(Theileria annulata)截短HSP70基因编码蛋白并研究该蛋白的结构与功能特性,本研究扩增牛环形泰勒虫HSP70目的基因并构建重组质粒pMD18-T-HSP70,选取其他种的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树;利用生物信息学方法分... 为了表达牛环形泰勒虫(Theileria annulata)截短HSP70基因编码蛋白并研究该蛋白的结构与功能特性,本研究扩增牛环形泰勒虫HSP70目的基因并构建重组质粒pMD18-T-HSP70,选取其他种的同源HSP70蛋白序列构建系统进化树;利用生物信息学方法分析HSP70基因编码蛋白的氨基酸组成、基本理化性质、亲疏水性、跨膜区结构、信号肽、可能的磷酸化位点、亚细胞定位及蛋白的二级结构和三级结构;对重组蛋白HSP70进行蛋白互作网络分析;构建原核表达载体pET28a-HSP70,筛选诱导表达条件,镍柱纯化重组蛋白及检测反应原性。结果显示,牛环形泰勒虫HSP70蛋白序列与小泰勒虫的序列同源性较高,蛋白分子质量为42 ku,理论等电点(pI)为5.61,属于酸性亲水性蛋白,无跨膜区及信号肽;蛋白功能预测结果显示,HSP70包含32个可能的磷酸化位点,亚细胞定位分析显示该蛋白主要分布于细胞质。蛋白质二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链分别占39.18%、8.51%、30.41%和21.91%。蛋白互作网络构建结果显示,与HSP70相互作用的蛋白主要为HSP90家族成员,另外还有伴侣蛋白GrpE同系物,预示着HSP70可能在细胞内与HSP90形成复合体发挥作用。本试验成功构建原核表达载体,获得了大小约为48 ku的融合蛋白,以0.6 mmol/L IPTG于37℃诱导5 h,蛋白表达较好;点状印迹及Western blotting结果表明,表达产物可被自然感染的牛环形泰勒虫阳性血清识别,具有良好的反应原性。本试验结果为进一步探讨牛环形泰勒虫HSP70功能机制提供了理论依据。 展开更多

关键词 牛环形泰勒虫 HSP70基因 原核表达 反应原性 生物信息学分析

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基于最大熵模型的新疆银盾革蜱和边缘革蜱生境适应性评价 被引量：3

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作者 何文文 伍军 +6 位作者 呼尔查 阿力木江 史倩云 诺明达来 甘露 郝蕴伟 巴音查汗 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2022年第1期68-75,83,共9页

目的对银盾革蜱和边缘革蜱的生境适应性进行评价,为银盾革蜱、边缘革蜱及其传播疾病的防控提供参考。方法从中国蜱的分布和多样性数据集中收集1980—2017年新疆维吾尔自治区(简称新疆)银盾革蜱和边缘革蜱的分布点,通过中国知网、百度学... 目的对银盾革蜱和边缘革蜱的生境适应性进行评价,为银盾革蜱、边缘革蜱及其传播疾病的防控提供参考。方法从中国蜱的分布和多样性数据集中收集1980—2017年新疆维吾尔自治区(简称新疆)银盾革蜱和边缘革蜱的分布点,通过中国知网、百度学术、 PubMed等数据库收集2017—2021年的分布点;在世界气象数据库中收集环境因子变量。以75%的数据作为训练子集,其余的25%作为模型评估测试集建立最大熵(MaxEnt)模型,通过MaxEnt模型的刀切法试验和R软件筛选主要的环境变量因子;利用MaxEnt物种预测分布模型和ArcGIS空间分析方法预测银盾革蜱和边缘革蜱的孳生环境分布情况;通过ArcMap 10.1绘制模型输出结果,根据MaxEnt模型绘制的生物气候变量响应曲线预测两种蜱的生态环境特性。结果分别筛选出银盾革蜱、边缘革蜱分布点数据46、 64个;银盾革蜱、边缘革蜱模型评估测试集的受试者工作特性曲线下面积(AUC)值分别为0.847、 0.815;从19个环境变量因子中筛选出8个对银盾革蜱和边缘革蜱生存有影响的环境因子。适生区预测结果显示,银盾革蜱在新疆的适生区主要为准噶尔盆地、吐鲁番盆地以及塔里木盆地等,边缘革蜱主要为准噶尔山脉、天山山脉和昆仑山脉;银盾革蜱的非适生区、低度适生区、中度适生区和高度适生区的面积分别占新疆总面积的35.80%、 29.18%、 10.32%和24.70%,边缘革蜱分别占33.62%、 17.01%、 17.08%和32.28%。刀切法筛出最干月降水量(Bio14)、温度季节性变化(Bio4)、最湿季度平均温度(Bio8)为银盾革蜱分布的主要环境变量因子,最干季度降水量(Bio17)、年降水量(Bio12)、最湿季度降水量(Bio16)为边缘革蜱分布的主要环境变量因子。主要环境变量响应曲线显示,银盾革蜱在Bio14为21 mm、 Bio4的变异系数为1 510、 Bio8的为20℃时存在概率最大;边缘革蜱在Bio17为71 mm、 Bio12为230 mm 展开更多

关键词 边缘革蜱 银盾革蜱 最大熵模型 地理信息系统 环境变量因子

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蒙古国科布多省牛新孢子虫病PCR诊断初报 被引量：2

3

作者 吾力江 道尔加拉 +3 位作者 郝蕴伟 刚特穆尔 马钰 巴音查汗 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第7期83-86,共4页

为了查明科布多省牛只是否感染犬新孢子虫(Neospora caninum)并造成流产隐患,本文应用PCR方法,以新孢子虫NC-5为诊断靶基因,对随机采集科布多省3个检测点的120份牛血样进行DNA提取、扩增诊断,并基因测序。结果显示,成功获得了231 bp目... 为了查明科布多省牛只是否感染犬新孢子虫(Neospora caninum)并造成流产隐患,本文应用PCR方法,以新孢子虫NC-5为诊断靶基因,对随机采集科布多省3个检测点的120份牛血样进行DNA提取、扩增诊断,并基因测序。结果显示,成功获得了231 bp目的片段;测序结果经BLAST比对,与犬新孢子虫新西兰株(GenBank登录号:AY459289.1)同源性达99%,构建的系统发育树中,本株与犬新孢子虫聚为一支,置信度达99%。说明科布多省牛只已感染了新孢子虫;在3个检测点中,艾尔登特苏木乡感染率最高,为12.7%(7/55),总感染率为7.5%(9/120)。本文初次报道蒙古国科布多省牛群不同程度的感染新孢子虫,应该引起重视。 展开更多

关键词 科布多 牛 新孢子虫 PCR 初报

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帕米尔高原脚下牦牛及山羊的流产病原抗体检测 被引量：2

4

作者 吾力江 郝蕴伟 +3 位作者 秋盼 道敏 阿布都吾甫尔 巴音查汗 《新疆畜牧业》 2019年第6期28-30,43,共4页

基于分析导致新疆帕米尔高原特有的牦牛及山羊流产的病因-新孢子虫病、弓形虫病及布鲁氏杆菌病的感染及流行情况,本试验采集了帕米尔高原5个试验点的牦牛、山羊血清共计166份,应用抗体检测方法对所采集样本进行了上述3种病原血清学调查... 基于分析导致新疆帕米尔高原特有的牦牛及山羊流产的病因-新孢子虫病、弓形虫病及布鲁氏杆菌病的感染及流行情况,本试验采集了帕米尔高原5个试验点的牦牛、山羊血清共计166份,应用抗体检测方法对所采集样本进行了上述3种病原血清学调查。结果显示:牦牛新孢子虫、弓形虫、布鲁氏杆菌的抗体阳性率分别为20.9%(9/43)、2.32%(1/43)和4.65%(2/43);山羊新孢子虫、弓形虫及布鲁氏杆菌的抗体阳性率分别为2.43%(3/123)、5.69%(7/123)和10.56%(13/123)。此外,本试验对牦牛及山羊的年龄进行危险因素分析,结果显示不同年龄段的牦牛感染新孢子虫及弓形虫差异不显著(P>0.05),布鲁氏杆菌的感染差异显著(P<0.05);不同年龄段的山羊感染新孢子虫、弓形虫及布鲁氏杆菌差异不显著(P>0.05)。本试验首次对帕米尔高原牦牛及山羊流产病因—新孢子虫、弓形虫、布鲁氏杆菌进行了检测,实验结果不仅为该省周边地区的这些传染性疾病的防控提供了基础数据,而且有利于建立一套符合当地实际情况的有效综合防制体系,了解其感染率及强度,为有效预控、保障地方畜牧业的发展提供参考。 展开更多

关键词 帕米尔高原 牦牛 山羊 抗体检测

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边缘革蜱铁蛋白1的原核表达与理化特性分析 被引量：2

5

作者 马英 呼尔查 +5 位作者 李敏 陈宋琴 郝蕴伟 祖力亚 刘一凡 郭庆勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期609-614,共6页

为探明蜱源铁蛋白1(FER1)在边缘革蜱铁代谢中的功能,本研究经PCR扩增了边缘革蜱源FER1基因编码区(CDs),测序结果显示FER1基因CDs区为519 bp;BLAST分析其与硬蜱科常见蜱FER1的氨基酸序列同源性,利用Mega 6.0软件分析了FER1基因与其他常... 为探明蜱源铁蛋白1(FER1)在边缘革蜱铁代谢中的功能,本研究经PCR扩增了边缘革蜱源FER1基因编码区(CDs),测序结果显示FER1基因CDs区为519 bp;BLAST分析其与硬蜱科常见蜱FER1的氨基酸序列同源性,利用Mega 6.0软件分析了FER1基因与其他常见蜱该基因之间的系统进化关系;利用Swiss-model、Vaxijen2.0及Allertop等程序预测分析了FER1的空间结构、抗原性等特性。结果显示,FER1基因与革蜱属其他种之间进化关系较近,其编码的氨基酸序列与硬蜱科常见蜱FER1氨基酸序列之间差异很小,边缘革蜱FER1基因的CDs区编码172个氨基酸,理论等电点(pI)为5.04,该蛋白以中空的24聚体形式存在,单个亚基的抗原位点主要集中在aa8~aa12、aa80~aa93处,位于24聚体模型表面,具有抗原性。氨基酸线性片段预测FER1未显示过敏性。将FER1基因克隆至原核表达载体,构建重组质粒pET-28a-FER1,表达重组FER1蛋白(rFER1),western blot检测其免疫原性,结果显示该蛋白具有良好的反应原性,并经His-Bind镍柱亲和层析获得纯化蛋白,其大小为25 ku。本研究分析了FER1蛋白的氨基酸序列同源及FER1基因的系统进化关系,预测了该蛋白的空间结构、抗原性等特性,通过重组蛋白表达与血清学试验,推断FER1可能存在于蜱唾液腺中,说明该蛋白具有作为抗蜱疫苗候选抗原的潜力。 展开更多

关键词 边缘革蜱 铁蛋白1 原核表达 抗蜱疫苗 候选抗原

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马梨形虫病在新疆昭苏地区流行相关因素的调查与分析 被引量：1

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作者 宋瑞其 呼尔查 +4 位作者 樊新丽 翟雪洁 李敏 郝蕴伟 巴音查汗 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期62-67,共6页

为了解新疆昭苏县马匹体表蜱虫和周围游离蜱虫携带马梨形虫情况及其之间流行关系,于2016年4―7月份,分别采集马匹血液、相应马体表携带蜱虫和周围牧场的蜱虫,经PCR检测总携带梨形虫率分别为93.9%(31/33),15.8%(6/38),3.4%(6/175);对所... 为了解新疆昭苏县马匹体表蜱虫和周围游离蜱虫携带马梨形虫情况及其之间流行关系,于2016年4―7月份,分别采集马匹血液、相应马体表携带蜱虫和周围牧场的蜱虫,经PCR检测总携带梨形虫率分别为93.9%(31/33),15.8%(6/38),3.4%(6/175);对所采集的蜱虫进行形态学鉴定,结果分别为草原革蜱、森林革蜱和边缘革蜱;3种革蜱占马体表蜱虫总数的比率和带虫率分别为52.6%(7.9%),44.8%(7.9%),2.6%(0.0%),占牧场游离蜱虫总数的比率和带虫率分别为56.0%(2.3%),43.4%(1.1%),0.6%(0.0%);根据统计学分析,马匹年龄与携带梨形虫及其媒介蜱之间差异显著(P<0.05),马携带蜱虫数量与马源性、蜱源性泰勒虫的感染三者之间均存在显著性差异(P<0.01)。因此,新疆昭苏地区马梨形虫的流行与马匹年龄、带虫媒介蜱虫的数量、种类等因素有关联性。 展开更多

关键词 马梨形虫病 马泰勒虫 驽巴贝斯虫 蜱虫 草原革蜱 森林革蜱 边缘革蜱

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铁蛋白1基因在边缘革蜱各发育龄期、吸血期及不同器官中的表达分析 被引量：1

7

作者 马英 呼尔查 +7 位作者 李建龙 郝蕴伟 李敏 范士龙 韦丽婷 陈宋琴 张婷 郭庆勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第5期1841-1848,共8页

试验旨在了解铁蛋白1(ferritin 1,Fer1)基因在边缘革蜱各发育龄期、吸血期及不同器官中的表达情况。用实时定量荧光PCR法分析了Fer1基因在边缘革蜱各发育阶段、吸血期和不同器官中的相对表达情况,以饥饿雌蜱为基准(1 FC),用2-△△Ct法... 试验旨在了解铁蛋白1(ferritin 1,Fer1)基因在边缘革蜱各发育龄期、吸血期及不同器官中的表达情况。用实时定量荧光PCR法分析了Fer1基因在边缘革蜱各发育阶段、吸血期和不同器官中的相对表达情况,以饥饿雌蜱为基准(1 FC),用2-△△Ct法计算结果。结果显示,雌性蜱在开始吸血后第72 h Fer1基因的相对表达量最高,在刚刚孵化的饥饿成蜱(雌、雄)、卵及幼蜱中相对表达量较低;在若蜱中相对表达量较高,其中,幼蜱和若蜱在饥饿状态下比同时期饱血蜱的相对表达量高。在雌蜱的不同器官中,以饱血蜱唾液腺为基准(1 FC),半饱血蜱中肠的表达量最高,在卵巢和马氏管不表达;在饱血蜱唾液腺、中肠、卵巢和马氏管中均表达,其中,在卵巢和马氏管中的表达量较高,中肠次之,唾液腺中的表达较低。试验结果表明,边缘革蜱体内Fer1基因的相对表达量随着蜱吸血过程变化而变化,这与蜱体内消化细胞的完善及消化酶在该过程中的变化相关,可为该类蜱铁代谢通路中关键功能基因的研究提供参考。 展开更多

关键词 边缘革蜱 铁蛋白1 发育龄期 吸血期 不同器官 相对表达量

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边缘革蜱GST序列生物信息学分析及表达鉴定

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作者 郝蕴伟 翟雪洁 +3 位作者 李才善 呼尔查 刘凯强 巴音查汗·盖力克 《动物医学进展》 北大核心 2022年第11期46-51,共6页

为挖掘边缘革蜱谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase, GST)家族功能基因,根据边缘革蜱转录组数据信息设计引物,对边缘革蜱6种GST基因进行扩增、克隆、序列测定,测序后进行比对、绘制系统进化树,进行生物信息学分析及抗原性预测... 为挖掘边缘革蜱谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase, GST)家族功能基因,根据边缘革蜱转录组数据信息设计引物,对边缘革蜱6种GST基因进行扩增、克隆、序列测定,测序后进行比对、绘制系统进化树,进行生物信息学分析及抗原性预测;根据系统进化分析,选择4个不同亚型进行原核表达及鉴定。结果显示,经试验筛选了6种边缘革蜱GST功能基因,根据构建出的系统进化树将其命名为DmGSTE2、DmGSTE3、DmGSTK1、DmGSTM5、DmGSTM6和DmGSTZ2,将6种功能基因序列上传至NCBI的GenBank;获得的6种GST均为非过敏原;DmGSTM6有信号肽,存在跨膜区,其他GST皆无信号肽、无跨膜区、无明显疏水区,均为亲水性蛋白;DmGSTM5和DmGSTK1抗原性较强,DmGSTE2抗原性最弱。筛选构建并表达了4种不同亚型的GST,获得了相应重组蛋白。Western blot发现重组蛋白能够与相应蛋白免疫过的阳性鼠血清发生反应,说明具有一定的免疫原性和反应原性。试验结果可为边缘革蜱GST家族抗蜱候选疫苗筛选等深层研究奠定基础。 展开更多

关键词 边缘革蜱 谷胱甘肽硫转移酶(GST) 生物信息学分析 原核表达

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小亚璃眼蜱CPL截短基因的多克隆抗体制备及其应用研究

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作者 翟雪洁 郝蕴伟 +6 位作者 阿力木江·加帕尔 宋瑞其 诺明达来 蒋倩 何文文 郑会珍 巴音查汗 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期655-660,共6页

组织蛋白酶L(CPL)是半胱氨酸蛋白水解酶,属于木瓜蛋白酶家族,参与蜱对血红蛋白降解与消化,是一种潜在的抗蜱疫苗候选抗原。为了制备小亚璃眼蜱(H.anatolicum)CPL多克隆抗体,并对其初步应用,本研究利用PCR方法扩增CPL截短基因(HanCPL)后... 组织蛋白酶L(CPL)是半胱氨酸蛋白水解酶,属于木瓜蛋白酶家族,参与蜱对血红蛋白降解与消化,是一种潜在的抗蜱疫苗候选抗原。为了制备小亚璃眼蜱(H.anatolicum)CPL多克隆抗体,并对其初步应用,本研究利用PCR方法扩增CPL截短基因(HanCPL)后构建pET-28a-HanCPL和pEGFP-C3-HanCPL质粒,pET-28aHanCPL经IPTG诱导后通过SDS-PAGE检测重组HanCPL蛋白(rHanCPL)的表达,结果显示,正确构建了pET-28a-HanCPL和p EGFP-C3-HanCPL质粒;rHanCPL以包涵体形式表达,分子量大小约为27 ku,可以被兔抗His tag抗体特异性识别;利用亲和层析柱和尿素透析法纯化rHanCPL后经western blot鉴定纯化效果,并测浓度后免疫新西兰兔,制备rHanCPL多克隆抗体,经western blot检测rHanCPL的反应性,采用间接ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示,rHanCPL纯化效果较好,浓度为3 mg/mL;rHanCPL可以与其多克隆抗体发生特异反应,且制备的r HanCPL多克隆抗体效价高达1:204800,可用于后续试验。利用制备的rHanCPL多克隆抗体作为一抗,通过免疫组化试验检测天然CPL在H.anatolicum中的定位,结果显示,天然CPL蛋白可以被rHanCPL多克隆抗体特异性识别,且其定位于H.anatolicum中的肠上皮细胞;另外将pEGFP-C3-HanCPL质粒转染至HEK-293T中,以制备的rHanCPL多克隆抗体作为一抗,使用western blot和IFA方法检测重组蛋白(EGFP-HanCPL)的表达及定位情况,结果显示EGFP-HanCPL蛋白也可与rHanCPL多克隆抗体特异性结合,其分子量约为46 ku,其主要定位于细胞质。本研究利用表达的rHanCPL制备了r HanCPL多克隆抗体,并初步将该多克隆抗体用于CPL的相关研究,为后续抗蜱疫苗蛋白抗原的筛选提供参考依据。 展开更多

关键词 小亚璃眼蜱 组织蛋白酶L 多克隆抗体 免疫组化

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亚洲璃眼蜱和小亚璃眼蜱Ferritin 2基因的原核表达及蛋白特性预测

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作者 翟雪洁 宋瑞其 +5 位作者 郝蕴伟 何文文 郑会珍 祖力亚·克力木江 刘一凡 巴音查汗 《动物医学进展》 北大核心 2021年第11期13-18,共6页

铁蛋白2(ferritin 2,Fer2)是一类储存铁的蛋白,在蜱生理活动中起到解毒作用,是一种抗蜱疫苗候选抗原。利用原核表达系统,分别对亚洲璃眼蜱(H.as)和小亚璃眼蜱(H.an)Fer2基因进行了克隆、表达以及蛋白特性预测,为挖掘抗蜱疫苗候选抗原奠... 铁蛋白2(ferritin 2,Fer2)是一类储存铁的蛋白,在蜱生理活动中起到解毒作用,是一种抗蜱疫苗候选抗原。利用原核表达系统,分别对亚洲璃眼蜱(H.as)和小亚璃眼蜱(H.an)Fer2基因进行了克隆、表达以及蛋白特性预测,为挖掘抗蜱疫苗候选抗原奠定基础。提取H.as和H.an总RNA,并反转录为cDNA,以此为模板克隆、表达出重组蛋白rHasFer2和rHanFer2,并分别用尿素透析法和亲和层析柱对2个重组蛋白进行了纯化;应用Western blot分析蛋白的反应原性;用Prot Param、TMHMM、SignalP-5.0、Antibody Epitope Prediction及SWISS-MODEL等软件对HasFer2和HanFer2序列进行蛋白特性预测。构建了重组质粒pGEX-4T-1/HasFer2和pET-28a/HanFer2,rHasFer2和rHanFer2均以包涵体形式表达,Western blot分析结果表明,2种蛋白可与相应阳性血清发生特异性反应。蛋白特性预测分析表明,HasFer2无跨膜区,不属于跨膜蛋白,分子质量为21.908 ku,等电点为5.542,主要存在于胞外(66.7%)和分泌系统的囊泡(22.2%);HanFer2有跨膜区,分子质量为23.033 ku,等电点为6.29,主要分布于胞质(34.8%)和胞外(26.1%);2种蛋白均有较高的抗原性,存在信号肽区域,均无T细胞表位,成功构建了蛋白3D模型。研究结果为探究Fer2在H.as和H.an中发挥的功能及抗蜱亚单位疫苗研制奠定了基础。 展开更多

关键词 亚洲璃眼蜱 小亚璃眼蜱 铁蛋白Fer2 蛋白特性预测

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2014—2023年博州温泉县鼠疫监测分析

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作者 甫拉提·伊明江 古丽阿依·包开西 +6 位作者 夏木西丁 阿布都吉力力·托合提 黄凯 郝蕴伟 穆合亚提·阿依提哈孜 帕尔哈提·居马西 王希江 《疾病预防控制通报》 2024年第4期62-65,共4页

目的分析2014—2023年博州温泉县鼠疫监测数据,为后续制定鼠疫防控策略提供科学依据。方法收集2014—2023年鼠疫监测数据,使用EXCEL 2010整理数据,采用描述流行病学方法进行分析。结果2014—2023年温泉县无人间鼠疫疫情报告。2014—202... 目的分析2014—2023年博州温泉县鼠疫监测数据,为后续制定鼠疫防控策略提供科学依据。方法收集2014—2023年鼠疫监测数据,使用EXCEL 2010整理数据,采用描述流行病学方法进行分析。结果2014—2023年温泉县无人间鼠疫疫情报告。2014—2023年温泉县路线法和定点法灰旱獭平均密度分别为0.62只/hm^(2)和1.81只/hm^(2);灰旱獭平均染蚤率为88.89%,蚤指数为1.75,长尾黄鼠平均染蚤率为98.78%,蚤指数为3.85;宿主动物的血清学和病原学结果均为阴性;宿主动物体表寄生物病原学结果均为阴性;自毙动物材料280份中分离出鼠疫菌35株,其中灰旱獭26株、赤狐1株,寄生物8株(谢氏山蚤3株、斧形盖蚤1株、草原硬蜱3株、古北拟额虱1株)。结论温泉县动物鼠疫流行猛烈,为防止疫区牧民、施工人员、游客感染鼠疫,应加大动物间鼠疫疫情监测力度,扩大鼠疫监测范围,提升处置鼠疫疫情能力,同时加强高危人群的健康宣传教育,严防人间鼠疫发生。 展开更多

关键词 鼠疫 监测 媒介蚤 阳性率 鼠疫菌

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