目的比较2种不同腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的增强型绿色荧光蛋白对人皮肤成纤维细胞(human fibroblast,HFB)的转染效率。方法原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数(multiple of in-fection,MOI)为104、10...目的比较2种不同腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的增强型绿色荧光蛋白对人皮肤成纤维细胞(human fibroblast,HFB)的转染效率。方法原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数(multiple of in-fection,MOI)为104、105、106转染传2代的人成纤维细胞,流式细胞检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的转染效率,倒置荧光显微镜观察转染后的荧光强度。MTT法检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的毒性。结果腺相关病毒AAV2-EGFP对HFB的转染效率随着MOI增加而增高,MOI为104时转染效率为(7.68±1.18)%,当MOI达到105后,转染效率稳定在(22.16±5.59)%,随着MOI增加,最高至MOI 106转染效率无显著提高。而病毒AAV2/1对于HFB的转染效率在MOI为106转染效率仅为(3.47±0.93)%。2种病毒在转染过程中,细胞生长正常,MTT显示各转染组与未转染组的吸光度值无统计学差异。结论AAV2载体对体外培养的HFB转染效率高于AAV2/1,但2种病毒载体对人皮肤成纤维细胞转染效率均不高,AAV2/1-EGFP对HFB几乎无感染能力。展开更多
目的:比较2种不同腺病毒(adenovirus,AD)介导的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)对人皮肤成纤维细胞(Human Fibroblast,HFB)的转染效率。方法:原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数MOI为10、25...目的:比较2种不同腺病毒(adenovirus,AD)介导的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)对人皮肤成纤维细胞(Human Fibroblast,HFB)的转染效率。方法:原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数MOI为10、25、50、100转染传2代的人成纤维细胞,流式细胞检测AD5-EGFP和AD5/F35-EGFP对HFB的转染效率,荧光显微镜观察转染后的荧光强度。MTT法检测AD5-EGFP和AD5/F35-EGFP对HFB的毒性。结果:两种腺病毒对HFB的转染效率随着MOI增加而增高。AD5-EGFP和AD5/F35-EGFP在MOI为10、25、50、100时转染效率分别为9.44+3.44%、31.96+11.19%、51.7+7.24%、69.99+3.26%和22.82+8.98%、55.08+2.19%、63.37+7.24%、88.63+2.58%。两种病毒在转染过程中,细胞生长正常,MTT显示各转染组与未转染组的吸光度值无统计学差异。结论:AD5/F35载体对HFB嗜性显著高于AD5。在皮肤组织的基因修饰中,AD5/F35比AD5更具优越性。展开更多
文摘目的:比较2种不同腺病毒(adenovirus,AD)介导的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)对人皮肤成纤维细胞(Human Fibroblast,HFB)的转染效率。方法:原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数MOI为10、25、50、100转染传2代的人成纤维细胞,流式细胞检测AD5-EGFP和AD5/F35-EGFP对HFB的转染效率,荧光显微镜观察转染后的荧光强度。MTT法检测AD5-EGFP和AD5/F35-EGFP对HFB的毒性。结果:两种腺病毒对HFB的转染效率随着MOI增加而增高。AD5-EGFP和AD5/F35-EGFP在MOI为10、25、50、100时转染效率分别为9.44+3.44%、31.96+11.19%、51.7+7.24%、69.99+3.26%和22.82+8.98%、55.08+2.19%、63.37+7.24%、88.63+2.58%。两种病毒在转染过程中,细胞生长正常,MTT显示各转染组与未转染组的吸光度值无统计学差异。结论:AD5/F35载体对HFB嗜性显著高于AD5。在皮肤组织的基因修饰中,AD5/F35比AD5更具优越性。
