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未培养厌氧甲烷氧化古菌来源细胞色素c的异源表达优化 被引量：2
1
作者 崔玲炜 范晓军 郑艳宁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期226-237,共12页
细胞色素c是一类在生物体内广泛存在的血红素蛋白,由亚铁血红素和细胞色素c前体组成,在生物电子学、生物医药以及污染物降解等领域具有很大的潜在应用价值。然而,细胞色素c很难通过异源表达而大量获取。对于未培养厌氧甲烷氧化古菌来源... 细胞色素c是一类在生物体内广泛存在的血红素蛋白,由亚铁血红素和细胞色素c前体组成,在生物电子学、生物医药以及污染物降解等领域具有很大的潜在应用价值。然而,细胞色素c很难通过异源表达而大量获取。对于未培养厌氧甲烷氧化古菌来源的细胞色素c (CytC4),目前尚无成功表达和功能研究。本研究首先通过在CytC4的N端分别引入组氨酸标签和凝血酶位点,同时过量表达可帮助细胞色素c分子成熟的CcmABCDEFGH,成功在大肠杆菌中异源表达了CytC4。接下来又以含有细胞色素c分子成熟系统的奥奈达希瓦氏菌为表达宿主,提高了CytC4的表达量。未培养厌氧甲烷氧化古菌CytC4的异源表达,为其生理功能的探索及生物工程的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 未培养古菌 细胞色素C 异源表达 大肠杆菌 希瓦氏菌
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顺德职业技术学院设计学院教师作品
2
作者 汤强 陈子健 +11 位作者 周峻岭 谢凌峰 郑艳宁 江芳 张俊竹 苏镜科 干珑 肖娜 陈晓琳 李小婧 肖文婷 周淑君 《装饰》 CSSCI 北大核心 2020年第4期144-144,F0003,共2页
原文传递
食用菌发酵液中水溶性糖类含量的检测研究
3
作者 朱光 郑艳宁 董志彪 《食品界》 2019年第8期82-82,84,共2页
食用菌具有较高的营养价值和药用价值,在市场上受到了人们的广泛欢迎。要想提高食用菌的附加价值,充分发挥其优势和作用,就需要加大对其营养功能与成分组成。
关键词 食用菌 糖类含量 水溶性 发酵液 检测 药用价值 营养价值 附加价值
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利用工程大肠杆菌生产不同类型的游离脂肪酸 被引量：4
4
作者 李玲玲 刘强 +2 位作者 郑艳宁 秦文 咸漠 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期158-162,共5页
游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对食品风味能够产生重要的影响,生产更多类型的FFAs能够更好的满足食品工业的需求。通过在大肠杆菌(E.coli)中分别过量表达7种不同的硫酯酶基因,7个用于生产FFAs的重组菌株被成功构建。并对重组菌株的... 游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)对食品风味能够产生重要的影响,生产更多类型的FFAs能够更好的满足食品工业的需求。通过在大肠杆菌(E.coli)中分别过量表达7种不同的硫酯酶基因,7个用于生产FFAs的重组菌株被成功构建。并对重组菌株的FFAs生产条件进行了优化,确定最佳的培养条件为:以15g/LNa2HPO4和7.5g/LKH2PO4作为培养基中的磷酸盐浓度,采用0.25mmol/L的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)在30℃进行诱导培养。在优化的培养条件下,7个重组菌株的FFAs通过气相色谱(GC)进行了定性和定量分析。结果显示,过量表达BTE、AtFatA、‘tesA的重组菌株LL1、LL2、LL4均显著提高了FFAs的产量,其中LL1取得了346.4mg/L最高的FFAs产量。进一步对LL1、LL2、LL4的FFAs组成进行分析表明,BTE、AtFatA、‘TesA具有不同的底物特异性,能够用来生产C12～C18等不同链长和饱和度的FFAs。因此,通过微生物代谢工程可以获得天然动植物油脂中不存在的更多类型的FFAs。 展开更多
关键词 游离脂肪酸 工程大肠杆菌 硫酯酶
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代谢工程改造大肠杆菌对中碳脂肪酸生产的加强作用 被引量：4
5
作者 刘强 郑艳宁 +3 位作者 姜兴林 刘东杰 秦文 咸漠 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第21期131-135,共5页
通过在大肠杆菌(Escherichia coli)中过量表达来自加州月桂(Umbellulana california)的硫酯酶基因BTE,极大地加强了大肠杆菌中碳脂肪酸(MCFAs)的生产。并对MCFAs在大肠杆菌胞内外的分布,以及是否对大肠杆菌细胞膜磷脂组成产生影响等进... 通过在大肠杆菌(Escherichia coli)中过量表达来自加州月桂(Umbellulana california)的硫酯酶基因BTE,极大地加强了大肠杆菌中碳脂肪酸(MCFAs)的生产。并对MCFAs在大肠杆菌胞内外的分布,以及是否对大肠杆菌细胞膜磷脂组成产生影响等进行了系统的分析。结果发现,产生的MCFAs绝大部分存在于大肠杆菌细胞内,且未对其细胞膜磷脂组成产生明显影响。为了继续提高MCFAs的产量,又进一步对大肠杆菌进行了代谢工程改造,通过结合表达乙酰-CoA羧化酶(ACCase),优化硫酯酶的表达水平等,最终获得了188.9mg/L的总MCFAs产量,并且产生的MCFAs的比例高达85%以上,实现了MCFAs的高特异性生产。 展开更多
关键词 中碳脂肪酸 大肠杆菌 硫酯酶 代谢工程
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利用大肠杆菌工程菌株生物转化脂肪酸的初步研究 被引量：4
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作者 刘强 刘玉珍 +2 位作者 刘东杰 郑艳宁 秦文 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第7期41-45,共5页
羟基脂肪酸(Hydroxyfatty Acid,HFA)是一种有多种用途和广阔应用前景的多碳化学品。细胞色素P450单加氧酶(P450 P450 BM3)可高特异性的催化脂肪酸的ω碳位发生羟基化反应而生成羟基脂肪酸,该研究利用工程大肠杆菌成功表达了来源于巨大... 羟基脂肪酸(Hydroxyfatty Acid,HFA)是一种有多种用途和广阔应用前景的多碳化学品。细胞色素P450单加氧酶(P450 P450 BM3)可高特异性的催化脂肪酸的ω碳位发生羟基化反应而生成羟基脂肪酸,该研究利用工程大肠杆菌成功表达了来源于巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的单加氧酶基因P450 BM3,实现了底物脂肪酸的成功转化。最终获得了羟基十二酸和羟基十四酸的最高产量分别为593.3 mg/L和547.3 mg/L,同时外源脂肪酸的转化率分别为59.7%和52.3%。对3种产物ω1、ω2、ω3-HFA进行定量分析发现3种产物的产量基本相同,表明单加氧酶对脂肪酸的羟基化位置没有特定偏爱性。最后通过优化表达载体的拷贝数来进一步优化单加氧酶基因P450 BM3的表达水平,最终利用中拷贝数质粒载体pACYCDuet-1表达单加氧酶基因P450 BM3获得了547.3 mg/L的羟基十四酸,代表了目前羟基十四酸生产的一个较高水平。 展开更多
关键词 羟基脂肪酸 大肠杆菌 P450 BM3 脂肪酸
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