猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(JS-2012-△gI/gE株)最小免疫剂量测定 被引量：7

1

作者 童武 李国新 +10 位作者 郑浩 刘飞 梁超 田青 李林 曹艳云 武吉强 王涛 郑旭晨 单同领 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2017年第1期26-31,共6页

为了确定猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(PRV JS-2012-△g I/g E株)的最小免疫剂量,本研究将25头14日龄仔猪(猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型病原抗体均为阴性)随机分成5组,每组5头。第1~4组分别接种猪伪... 为了确定猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(PRV JS-2012-△g I/g E株)的最小免疫剂量,本研究将25头14日龄仔猪(猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型病原抗体均为阴性)随机分成5组,每组5头。第1~4组分别接种猪伪狂犬病灭活疫苗(PRV JS-2012-△g I/g E株)0.5、1、2、3 m L/头,免疫28 d后各组参照第1次免疫的剂量分别加强免疫1次,第5组实验猪不做处理作为阴性对照。免疫后,每周采集各组猪血清检测抗体水平。待第2次免疫28 d后,5组实验猪均滴鼻接种PRV JS-2012株第5代强毒2 m L,含病毒105.0TCID50/头。结果表明:第1次免疫后14 d,第2~4组猪PRV g B抗体全部转为阳性,而第1组猪在第1次免疫后21 d全部转阳。攻毒后,第1组有1头猪发病,表现精神沉郁、厌食和轻微神经症状,其余4头猪有一过性的发热,无任何其他异常临床表现,保护率为80%;第2~4组,实验猪只有一过性的发热,无任何其他异常临床表现,保护率为100%;第5组猪在攻毒后48 h,体温迅速上升到41℃以上,并表现为明显的精神沉郁、厌食和神经症状,发病率为100%,死亡率为40%。由此确定猪伪狂犬病灭活疫苗(JS-2012-△g I/g E株)最小免疫剂量为1 m L/头。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 灭活疫苗 最小免疫剂量

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伪狂犬病毒实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：7

2

作者 田青 郑浩 +6 位作者 童武 刘飞 梁超 曹艳云 郑旭晨 童光志 李国新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第3期1-6,共6页

根据伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,RV)g B基因保守序列,设计合成一套特异引物和Taq Man探针,建立了一种快速、敏感和特异的检测伪狂犬病毒的实时荧光定量PCR方法。该方法可检测到相当于10 copies/μL的病毒DNA,比常规PCR检测方法高约... 根据伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,RV)g B基因保守序列,设计合成一套特异引物和Taq Man探针,建立了一种快速、敏感和特异的检测伪狂犬病毒的实时荧光定量PCR方法。该方法可检测到相当于10 copies/μL的病毒DNA,比常规PCR检测方法高约100倍,敏感性较强;该方法检验猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型呈现阴性结果,特异性强;变异系数小于1%,具有良好的重复性。本研究建立的实时荧光定量PCR方法为临床上对伪狂犬病毒的检测和定量奠定了坚实基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 g B基因 荧光定量PCR

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猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(JS-2012-△gI/gE株)的制备及免疫效力评价 被引量：7

3

作者 童武 李国新 +10 位作者 郑浩 刘飞 梁超 李林 田青 曹艳云 武吉强 王涛 郑旭晨 单同领 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第6期12-18,共7页

本研究将猪伪狂犬病毒双基因缺失毒株（JS-2012-△g I/g E株）用0.15%的甲醛灭活后,与赛彼科公司MONTANIDE ISA201VG佐剂进行乳化,制备成猪伪狂犬病灭活疫苗。为了评价灭活疫苗的免疫效力,15头14日龄的健康仔猪（猪伪狂犬病毒、猪繁殖... 本研究将猪伪狂犬病毒双基因缺失毒株（JS-2012-△g I/g E株）用0.15%的甲醛灭活后,与赛彼科公司MONTANIDE ISA201VG佐剂进行乳化,制备成猪伪狂犬病灭活疫苗。为了评价灭活疫苗的免疫效力,15头14日龄的健康仔猪（猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒Ⅱ型抗原和抗体均为阴性）随机分成3组,每组5头。第一组猪颈部肌肉接种猪伪狂犬病灭活疫苗（JS-2012-△g I/g E株）每头2 m L,接种后28 d,第一组和第二组同样方式同等剂量接种猪伪狂犬病灭活疫苗（JS-2012-△g I/g E株）,第三组猪作为对照。第二次免疫后d 28,三组实验猪均滴鼻接种PRV JS-2012第5代强毒,每头105.0TCID50/2 m L。攻毒后0~14 d,每日测量体温并记录临床症状。通过抗体检测和保护效率来评价猪伪狂犬病灭活疫苗（JS-2012-△g I/g E株）免疫效力。结果表明,两次免疫（第一组）PRV g B抗体水平明显高于一次免疫（第二组）,两次免疫提供了更好的保护效力。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 灭活疫苗 制备 效力评价

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竖向荷载下柔性接口管道的纵向力学计算 被引量：2

4

作者 吴为义 张土乔 +1 位作者 郑旭晨 孙宇坤 《中国给水排水》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期58-60,共3页

探讨了柔性接口管道在竖向荷载作用下的竖向位移计算方法和计算模型 ,据此对管道的竖向位移、转角、弯矩、剪力等纵向力学性状进行了计算。通过与工程测试结果比较 ,验证了该计算方法与计算模型的合理性 ,为给排水管道的合理优化设计。

关键词 竖向荷载 柔性接口管道 纵向力学 计算 工程测试

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宿主菌株及培养温度对乙型脑炎病毒cDNA克隆稳定性的影响 被引量：2

5

作者 郑旭晨 郑浩 +3 位作者 童武 单同领 郭亦非 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第5期27-33,共7页

本研究旨在探讨宿主菌株及培养温度对JEV cDNA克隆在宿主菌中稳定性的影响。选取猪源乙型脑炎病毒基因Ⅰ型HEN0701株和基因Ⅲ型SH0601株为研究对象,分别将两毒株基因组克隆中不稳定的质粒转化不同大肠杆菌菌株,并改变转化菌的培养温度,... 本研究旨在探讨宿主菌株及培养温度对JEV cDNA克隆在宿主菌中稳定性的影响。选取猪源乙型脑炎病毒基因Ⅰ型HEN0701株和基因Ⅲ型SH0601株为研究对象,分别将两毒株基因组克隆中不稳定的质粒转化不同大肠杆菌菌株,并改变转化菌的培养温度,将不同条件下培养的质粒进行序列分析。试验结果表明,不同宿主菌株对重组质粒不稳定性的影响不显著;低温培养可以克服克隆序列的不稳定。对获得的突变质粒的分析结果显示,基因组5'端的3个起始密码子和E蛋白可能与质粒的不稳定性相关。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 遗传不稳定性 培养温度

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乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定因子的初步研究 被引量：1

6

作者 郑旭晨 郑浩 +6 位作者 郭亦非 刘飞 梁超 童武 单同领 于海 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第4期17-22,共6页

为了探求乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定遗传的影响因子，本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1-2913 bp为研究对象，分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用。在... 为了探求乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定遗传的影响因子，本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1-2913 bp为研究对象，分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用。在5＇端，分析片段中潜在的原核启动子序列，通过PCR扩增得到不同长度的cDNA片段；在3＇端，通过内切酶酶切截断基因组prM蛋白或E蛋白编码区，获得3＇末端不同的cDNA片段。将各片段克隆入pCR-BluntII-TOPO载体，转化大肠杆菌，于37℃条件下培养。结果显示，片段73-2913 bp、97-2913 bp、355-2913 bp及1-933 bp、1-1275 bp能够在转化菌中稳定遗传；含有其他片段39-2913 bp、54-2913 bp及1-1800 bp、1-1971 bp的重组细菌不能在37℃条件下生长；片段1-1600 bp虽然能够在转化菌中传代，但是出现不规律突变。以上结果表明：软件所预测各原核启动子片段中，基因组73-118 bp区域与cDNA克隆稳定性有关，且上游的54 bp至73 bp的序列对该区域启动子存在影响；在JEV基因组1275 bp至1600 bp之间可能存在毒性蛋白编码序列。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 遗传不稳定性 潜在启动子 毒性蛋白编码序列位置

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1.09万m^3蛋形壳体结构无粘结预应力张拉分析

7

作者 郑旭晨 陈雪仙 陈观胜 《上海力学》 CSCD 1999年第4期423-430,共8页

本文通过对杭州市四堡污水处理厂蛋形消化池无粘结预应力张拉对混凝土结构影响的试验研究,测定了张拉应力的影响范围,分析了预应力张拉工艺,比较了规范与施工相近有关系数的取值,提出了供设计、施工参考采用的控制张拉力和张拉工艺等。

关键词 混凝土结构 蛋形壳体结构 无粘结预应力张拉

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乙型脑炎病毒致弱株的筛选及其生长特性 被引量：1

8

作者 郑浩 郑旭晨 +5 位作者 郭亦非 童武 刘飞 张青占 单同领 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第5期21-26,共6页

本文将乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因I型HEN0701株在BHK-21细胞上传代,并通过空斑纯化和接种小鼠来筛选弱毒株。通过空斑试验和一步生长曲线,比较弱毒株和其亲本强毒株的生长特性。结果显示,JEV HEN0701株经过在BH... 本文将乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因I型HEN0701株在BHK-21细胞上传代,并通过空斑纯化和接种小鼠来筛选弱毒株。通过空斑试验和一步生长曲线,比较弱毒株和其亲本强毒株的生长特性。结果显示,JEV HEN0701株经过在BHK-21细胞上传代100代和10轮空斑纯化,挑选获得6株克隆株。将6株克隆株经脑内和皮下接种小鼠,筛选获得一株致弱株10S3。与HEN0701相比,10S3的空斑形态比较一致;而生长曲线显示,HEN0701在BHK-21上生长速度比10S3快。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 基因I型 致弱

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城市高架桥之高独柱墩横向位移探讨

9

作者 郑旭晨 周松国 陈雪仙 《城市道桥与防洪》 2005年第4期31-33,共3页

结合城市高架高独柱墩顶部发生横向位移这一现象,对高独柱墩顶部横向荷载产生的原因进行初步分析,并应用三维非线性屈曲分析,阐述组合荷载所引起的大变形及混凝土徐变效应与墩顶横向位移之间的关系,提出了设计、施工类似结构时应注意的... 结合城市高架高独柱墩顶部发生横向位移这一现象,对高独柱墩顶部横向荷载产生的原因进行初步分析,并应用三维非线性屈曲分析,阐述组合荷载所引起的大变形及混凝土徐变效应与墩顶横向位移之间的关系,提出了设计、施工类似结构时应注意的事项。 展开更多

关键词 城市高架桥 高独柱墩 横向荷载 横向位移

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市政施工企业组织模式研究 被引量：1

10

作者 张土乔 俞亭超 郑旭晨 《中国市政工程》 2002年第2期52-54,共3页

在分析市政施工企业组织模式变迁的基础上 ,以杭州市市政工程总公司的组织结构重建为例 。

关键词 市政施工企业 组织模式 资产配置

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伪狂犬病毒的microRNAs靶基因预测及功能鉴定

11

作者 刘飞 童武 +5 位作者 郑浩 李国新 梁超 郑旭晨 田青 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第2期8-12,共5页

为研究猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)编码的微小RNA(micro RNA,mi RNA)的功能,本研究通过生物信息学预测结合双荧光素酶报告系统验证方法,对病毒mi RNA(virus mi RNA,vmi RNA)进行靶基因鉴定。结果表明,PRV编码的prv-mi R-LLT1... 为研究猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)编码的微小RNA(micro RNA,mi RNA)的功能,本研究通过生物信息学预测结合双荧光素酶报告系统验证方法,对病毒mi RNA(virus mi RNA,vmi RNA)进行靶基因鉴定。结果表明,PRV编码的prv-mi R-LLT1、prv-mi R-LLT7和prv-mi R-LLT9对病毒转录极早期基因IE180有抑制作用,prv-mi R-LLT7对参与调控病毒复制的UL48基因有抑制作用。初步研究表明这些vmi RNA可能在病毒感染过程中具有基因调控作用,本研究结果为进一步研究PRV vmi RNA在病毒复制、免疫逃避及潜伏感染过程中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 微小RNA 靶基因

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《大体积混凝土工程施工技术规程》编制研究

12

作者 顾健 郑旭晨 +1 位作者 俞锐 陈雪仙 《城市道桥与防洪》 2005年第5期133-135,共3页

通过在规程编制过程中对大体积混凝土定义、温控指标取值、水化热温度应力计算等几个主要问题的研究,阐述了大体积混凝土温控技术的主要内容,以引起各方的重视,确保大体积混凝土的工程质量。

关键词 大体积混凝土 技术规程 温控指标 水化热温度 浙江省

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一株携带EGFP基因的重组伪狂犬病毒变异株的构建

13

作者 童武 郑浩 +8 位作者 梁超 刘飞 曹艳云 李林 田青 郑旭晨 单同领 李国新 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第4期1-7,共7页

本研究运用同源重组的方法,在伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株PRV JS-2012基础上,构建了一株携带增强型绿色荧光蛋白基因的标记重组伪狂犬病毒,命名为r PRV JS-2012-EGFP。经PCR方法鉴定及荧光显微镜观察分析,结果表明重组病... 本研究运用同源重组的方法,在伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株PRV JS-2012基础上,构建了一株携带增强型绿色荧光蛋白基因的标记重组伪狂犬病毒,命名为r PRV JS-2012-EGFP。经PCR方法鉴定及荧光显微镜观察分析,结果表明重组病毒构建成功,并能在感染细胞中稳定表达绿色荧光蛋白。生长曲线和空斑试验结果显示,r PRV JS-2012-EGFP与亲本株PRV JS-2012在体外具有相似的生长特性。将r PRV JS-2012-EGFP毒接种14日龄PRV阴性仔猪,能使实验猪100%发病,病死率高达40%,表明r PRV JS-2012-EGFP是一株具有强致病力的标记伪狂犬病毒变异株,在伪狂犬病毒变异株致病机制研究中具有一定的使用价值。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 同源重组 重组病毒 绿色荧光蛋白

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乙型脑炎病毒NS1'蛋白编码框的扩展对病毒毒力的影响

14

作者 郭亦非 郑浩 +6 位作者 郑旭晨 童武 刘飞 梁超 单同领 于海 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第2期27-31,共5页

通过分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组中核糖体移码序列,在对NS2A基因实施同义突变基础上,设计2组引物,通过PCR突变方法,依次删除移码后NS1'基因开放阅读框的终止密码子,并将突变片段替换JEV感染性克隆pJE... 通过分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)基因组中核糖体移码序列,在对NS2A基因实施同义突变基础上,设计2组引物,通过PCR突变方法,依次删除移码后NS1'基因开放阅读框的终止密码子,并将突变片段替换JEV感染性克隆pJEHEN中相应片段,获得了2株突变全长克隆。经体外转录合成RNA,再以RNA转染细胞,拯救出两株突变病毒vJET1和vJET2。通过RT-PCR扩增突变病毒中含突变位点的基因组片段,测序证实了vJET1基因组3690位核苷酸存在由T向A的突变,vJET2基因组3690位和3819位核苷酸均存在由T向A的突变。将vJET1和vJET2感染Vero细胞后,Western blot检测显示,两株突变病毒表达的NS1'蛋白均出现延长现象。生长曲线显示,与亲本病毒vTHen相比,突变病毒增殖速度均出现下降。动物实验显示,与vTHen相比,vJET1和vJET2对小鼠的神经毒力与神经侵袭力也出现下降。上述结果表明,NS1'编码框的延伸降低病毒在体外培养细胞上的增值速度,也减弱了病毒对小鼠的毒力。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 NS1’ 突变 毒力

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“10项新技术”在污水处理工程建设中的应用

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作者 陈观胜 陈雪仙 郑旭晨 《市政技术》 2001年第4期22-24,共3页

杭州市市政工程集团有限公司在四堡污水处理扩建工程中,贯彻建设部颁发的“建筑业10项新技术”文件,在提高工程质量、加速技术进步、加强企业管理方面做出了显著成绩。

关键词 污水处理工程 企业管理 深基坑 支护

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DIY小型投影仪

16

作者 刘芷晴 温家悦 +1 位作者 郑旭晨 阮新宇(辅导老师) 《少年发明与创造（中学版）》 2009年第10期5-5,共1页

出于教学需要，我们经常要到多媒体教室观看一些图片。可一所学校只有两三个多媒体教室，显然供不应求。为什么不在每一间教室都安装一台投影仪呢？我们了解到原来每间教室都有一个柜子，里面是老式的静态投影仪，但早就过时了。而新型... 出于教学需要，我们经常要到多媒体教室观看一些图片。可一所学校只有两三个多媒体教室，显然供不应求。为什么不在每一间教室都安装一台投影仪呢？我们了解到原来每间教室都有一个柜子，里面是老式的静态投影仪，但早就过时了。而新型的动态液晶投影仪不仅价格昂贵， 展开更多

关键词 液晶投影仪 DIY 多媒体教室 教学需要 供不应求 学校

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