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双重RT-PCR体系检测美洲南瓜病毒病的研究
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作者 郭银潇 郑勇民 +5 位作者 徐秉良 刘佳 张文军 张树武 薛应钰 沈志彦 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期150-156,共7页
【目的】建立南瓜病毒病双重RT-PCR检测方法,检测南瓜多种病毒病.【方法】根据GenBank登录的WMV和ZYMV等病毒外壳蛋白基因序列,设计两对特异性引物,以复合感染4种病毒的南瓜病叶组织为材料,进行双重RT-PCR检测体系的优化.【结果】调查... 【目的】建立南瓜病毒病双重RT-PCR检测方法,检测南瓜多种病毒病.【方法】根据GenBank登录的WMV和ZYMV等病毒外壳蛋白基因序列,设计两对特异性引物,以复合感染4种病毒的南瓜病叶组织为材料,进行双重RT-PCR检测体系的优化.【结果】调查发现武威美洲南瓜病毒病种类有西瓜花叶病毒(WMV)、小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)、南瓜花叶病毒(SqMV)、烟草花叶病毒(TMV),症状类型有黄化、蕨叶、疱斑、黄化、疱斑混合症状、蕨叶、疱斑混合症状、蕨叶、疱斑、黄化混合症状.双重RT-PCR共检测到两种病毒ZYMV和WMV,双重RTPCR的最佳优化体系为:dNTPs浓度为0.3mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为0.5U,Mg^(2+)浓度为1.0mmol/L,最佳退火温度为50℃.双重RT-PCR检测体系验证表明从复合感染WMV和ZYMV的南瓜病叶上同时能够检测到这两种病毒,且片段大小分别为485和280bp的外壳蛋白.【结论】初步建立和优化了美洲南瓜病毒病双重RTPCR检测体系. 展开更多
关键词 美洲南瓜 西瓜花叶病毒(WMV) 小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV) 双重RT-PCR
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美洲南瓜种质资源遗传多样性的ISSR分析 被引量：4
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作者 郑勇民 张旭业 +4 位作者 徐秉良 刘佳 张树武 薛应钰 郭银潇 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期76-82,共7页
【目的】解决武威地区美洲南瓜品种归类不明确的问题.【方法】利用ISSR标记对28份美洲南瓜材料进行了遗传多样性的研究.【结果】从48条ISSR引物中共筛选出7条重复性高和扩增条带清晰的引物,PCR扩增共获得56条条带,平均每条引物扩增条带... 【目的】解决武威地区美洲南瓜品种归类不明确的问题.【方法】利用ISSR标记对28份美洲南瓜材料进行了遗传多样性的研究.【结果】从48条ISSR引物中共筛选出7条重复性高和扩增条带清晰的引物,PCR扩增共获得56条条带,平均每条引物扩增条带数为8条,多态性条带54条,多态性比率为96.43%,材料间遗传相似系数为0.60~0.93,表现出丰富的遗传多样性,并通过UPGMA分子系统聚类法,将28份美洲南瓜材料分为5个大类群.【结论】本研究为拓展美洲南瓜种质资源和发掘新种质提供了理论基础. 展开更多
关键词 美洲南瓜 ISSR 遗传多样性 种质资源
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