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Activin A诱导大鼠胰腺导管干细胞分化形成胰岛β细胞 被引量：1
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作者 赵一 吴江 +6 位作者 康恺 栗烨 李光辉 刘斌 郎贯存 安立龙 效梅 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期209-216,共8页
【目的】研究Activin A体外定向诱导大鼠胰腺导管干细胞分化形成胰岛β细胞的作用,为移植体外新生β细胞治疗宠物犬糖尿病打下基础,同时为胰岛细胞体外再生培养的优化提供科学依据。【方法】采用培养液RPMI-1640+10%FBS+10 ng/mL EGF+1... 【目的】研究Activin A体外定向诱导大鼠胰腺导管干细胞分化形成胰岛β细胞的作用,为移植体外新生β细胞治疗宠物犬糖尿病打下基础,同时为胰岛细胞体外再生培养的优化提供科学依据。【方法】采用培养液RPMI-1640+10%FBS+10 ng/mL EGF+1%青霉素-链霉素扩增大鼠胰腺导管干细胞至单层,空白对照组加基础培养液,诱导组在基础培养液中分别添加5、10、15和20 ng/mL Activin A,连续培养28 d。诱导培养期间于倒置显微镜下观察细胞形态变化,诱导结束后通过双硫腙(DTZ)染色、细胞免疫荧光染色、ELISA检测及实时荧光定量PCR等方法对分化形成的类胰岛细胞团功能和性状进行验证。【结果】大鼠胰腺导管干细胞经Activin A诱导分化形成球形细胞,并聚集成团(类胰岛),DTZ染色结果均呈阳性。诱导28 d后,20 ng/mL Activin A诱导组的类胰岛细胞团数量及其Insulin基因表达水平均极显著高于其他3个Activin A诱导组(P<0.01,下同),且类胰岛细胞体积最大,类胰岛细胞的Pdx1基因表达水平最高;无论在低葡萄糖(5 mmol/L)还是高葡萄糖(25 mmol/L)的刺激下,20 ng/mL Activin A诱导组类胰岛细胞的Insulin和C-peptide分泌量均极显著高于其他3个Activin A诱导组。【结论】Activin A能体外诱导大鼠胰腺导管干细胞分化形成胰岛β细胞,且以基础培养液中添加20 ng/mL Activin A的诱导效果最佳。 展开更多
关键词 大鼠 Activin A 胰腺导管干细胞 Β细胞 胰岛素(Insulin)
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大鼠胰腺导管干细胞分化形成类胰岛的改良诱导方法
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作者 张文琦 杨洁 +2 位作者 吴江 郎贯存 效梅 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期387-395,共9页
目的对大鼠胰腺导管干细胞(rPDSCs)分化形成类胰岛的诱导方法进行改良。方法在基础培养液DMEM/F12+10%FBS+1%青霉素/1%链霉素中,分别添加2、4、6和8μmol/L全反式维A酸(ATRA),体外诱导rPDSCs分化形成类胰岛,筛选ATRA最适诱导浓度。以ATR... 目的对大鼠胰腺导管干细胞(rPDSCs)分化形成类胰岛的诱导方法进行改良。方法在基础培养液DMEM/F12+10%FBS+1%青霉素/1%链霉素中,分别添加2、4、6和8μmol/L全反式维A酸(ATRA),体外诱导rPDSCs分化形成类胰岛,筛选ATRA最适诱导浓度。以ATRA最适诱导浓度为基础,再分别采用基质胶(matrigel)培养,悬浮培养或悬滴培养方式体外诱导rPDSCs分化形成类胰岛,筛选最适诱导培养方式。采用细胞形态学,双硫腙(DTZ)染色,细胞免疫荧光染色,Real-time PCR和ELISA方法对诱导类胰岛进行检测。结果与对照组相比,在基础培养液中,添加6μmol/L ATRA及采用基质胶培养方式诱导效果最好。诱导28 d,细胞富集分化形成胰岛样球形细胞团;DTZ染色呈阳性;在基因和蛋白水平上分别表达胰岛素(insulin)和胰腺十二指肠同源框1(Pdx1);葡萄糖刺激,释放胰岛素和C肽,且具有葡萄糖浓度依赖性。结论在基质胶培养方式下,采用6μmol/L ATRA+DMEM/F12+10%FBS+1%青霉素/1%链霉素可以成功诱导rPDSCs体外分化形成类胰岛。 展开更多
关键词 胰腺导管干细胞 全反式维A酸 胰岛 实时定量聚合酶链反应 大鼠
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