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可溶性GST-CRH蛋白原核表达条件的优化及纯化 被引量：5
1
作者 郁硕 陈锋 +5 位作者 刘英富 霍景瑞 李光宗 张益 丁辉 樊毫军 《天津医药》 CAS 2017年第2期146-150,共5页
目的通过谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)原核表达条件的优化及纯化,获得可溶性好、纯度高的重组GST-CRH蛋白。方法通过对GST-CRH转化菌表达温度、菌液密度(OD600)、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度以及诱... 目的通过谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)原核表达条件的优化及纯化,获得可溶性好、纯度高的重组GST-CRH蛋白。方法通过对GST-CRH转化菌表达温度、菌液密度(OD600)、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度以及诱导时间的摸索,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测可溶性GST-CRH蛋白的表达情况,GST琼脂糖凝胶进行GST-CRH的纯化,Western Blot对表达的目的蛋白进一步鉴定。结果起始OD6000.8、IPTG工作浓度0.1 mmol/L、30℃诱导8 h为GST-CRH最优诱导条件;融合蛋白经Western Blot鉴定为表达的GST-CRH,纯化后纯度>95%。结论建立了GST-CRH的原核表达及纯化方法,获得了高纯度的GST-CRH可溶性蛋白。 展开更多
关键词 促肾上腺皮质素释放激素 谷胱甘肽巯基转移酶 原核表达 纯化
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脂多糖诱导脓毒症大鼠脑内氧化损伤及相关信号通路的研究 被引量：5
2
作者 陈锋 刘英富 +4 位作者 李光宗 张益 郁硕 樊毫军 侯世科 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期703-706,共4页
目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的脓毒症造成大鼠脑内氧化损伤的作用及JNK、Nrf2相关信号的变化。方法将大鼠随机分为对照组、低剂量模型组(LPS 5 mg/kg)和高剂量模型组(LPS 10 mg/kg)。模型组造模24 h后,活杀大鼠,将脑组... 目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的脓毒症造成大鼠脑内氧化损伤的作用及JNK、Nrf2相关信号的变化。方法将大鼠随机分为对照组、低剂量模型组(LPS 5 mg/kg)和高剂量模型组(LPS 10 mg/kg)。模型组造模24 h后,活杀大鼠,将脑组织完全取出后,剪碎并研磨成脑匀浆,检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢(H2O2)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的变化。利用qRT-PCR、Western印迹检测JNK与Nrf2蛋白在脑组织亚细胞中的表达水平。结果与对照组比较,在LPS诱导脓毒症大鼠模型中,模型组大鼠脑组织中,MDA、H2O2、SDH含量增加,SOD、GSH-Px、T-AOC含量减少,JNK mRNA水平与总蛋白水平未受明显影响(P>0.05),但磷酸化水平(p-JNK)显著升高(P<0.01);Nrf2 mRNA水平与总蛋白水平显著上调(P<0.01),且磷酸化水平(p-Nrf2)也显著升高(P<0.01),差异具有统计学意义。结论成功构建LPS诱导脓毒血症后大鼠脑内氧化损伤的病理模型,并发现在这一病理过程中p-JNK、总Nrf2以及p-Nrf2表达显著上调,提示JNK、Nrf2相关通路在LPS诱导脓毒症脑损伤中可能参与重要的介导作用。 展开更多
关键词 脂多糖类 脓毒症 脑损伤 丙二醛 超氧化物歧化酶 过氧化氢 琥珀酸脱氢酶
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罗格列酮对高原肺水肿大鼠的保护作用 被引量：2
3
作者 李光宗 陈锋 +4 位作者 刘英富 张益 郁硕 樊毫军 侯世科 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期285-290,共6页
目的探讨罗格列酮对高原肺水肿大鼠的保护作用。方法将36只sD大鼠随机（随机数字法）分为6组：对照组（Control）、低压低氧模型组（HH）、罗格列酮低剂量组[RSG—L，剂量为5mg／（kg·d）]、中剂量组[RSG-M，剂量为10ms／（kg... 目的探讨罗格列酮对高原肺水肿大鼠的保护作用。方法将36只sD大鼠随机（随机数字法）分为6组：对照组（Control）、低压低氧模型组（HH）、罗格列酮低剂量组[RSG—L，剂量为5mg／（kg·d）]、中剂量组[RSG-M，剂量为10ms／（kg·d）]、高剂量组[RSG—H，剂量为20mg／（kg·d）]、地塞米松组[Dex，剂量为4ms／（kg·d）]，每组6只。连续给药3d后，置于模拟海拔6000In低压低氧动物实验舱内，维持恒温恒湿，每24h给药1次。72h后，处死大鼠，用湿干质量比（W／D）法检测肺组织含水量，考马斯亮蓝法检测肺泡灌洗液（BALF）蛋白含量，微量酶标法测量肺组织中谷胱甘肽（GSH）含量，TBA法测量肺组织中丙二醛（MDA）含量，wsT-1法测量肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性，ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）含量。光镜观察肺组织病理变化。结果与Control组比较，HH组W／D（5．08±0．24）和BALF蛋白含量（351：06±44．55）μg／mL明显增加（P〈0．01），病理结果显示肺泡及肺间质内可见红细胞，肺泡内有粉红色液体渗出，肺间隔增宽明显，炎细胞浸润；肺组织SOD活性（10．65±0．94）U／mgprot、GSH含量（1．63±0．20）μmol／grpot显著降低（P〈0．01），MDA含量（2．15±0．18）nmol／mgprot明显升高（P〈0．01），血清TNF-d（56．92±2．87）pg／mL、IL-6（217．80±48．01）pg／mL水平明显增加（P〈0．01），而IL-10（76．85±16．72）pg/mL水平下降（P〈0．05）；与HH组比较，罗格列酮各剂量组W／D和BALF蛋白含量明显下降，肺组织病理改变明显改善，肺组织SOD活性、GSH含量明显升高（P〈0．01），MDA含量降低（P〈0．01），血清TNF-仅、IL-6水平明显下降（P〈0．01），而IL-10水平明显上升（P〈0．01）。结论罗格列酮通过抑制氧化应激，减少炎症因子释放， 展开更多
关键词 罗格列酮 高原肺水肿 氧化应激 炎症 大鼠
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高原低氧加重脂多糖诱导大鼠肺组织的慢性炎症 被引量：2
4
作者 张益 李光宗 +4 位作者 郁硕 陈锋 刘英富 霍景瑞 郑淑芳 《军事医学》 CSCD 北大核心 2017年第4期273-277,共5页
目的探讨高原低氧对大鼠慢性炎症的影响。方法 40只SD大鼠随机均分为正常对照组(对照组)、慢性炎症组(慢炎组)、高原低氧组(高低组)、高原低氧+慢性炎症组(高+慢组);慢炎组大鼠尾静脉注射脂多糖(LPS,0.5 mg/kg),每周2次,连续注射4周,高... 目的探讨高原低氧对大鼠慢性炎症的影响。方法 40只SD大鼠随机均分为正常对照组(对照组)、慢性炎症组(慢炎组)、高原低氧组(高低组)、高原低氧+慢性炎症组(高+慢组);慢炎组大鼠尾静脉注射脂多糖(LPS,0.5 mg/kg),每周2次,连续注射4周,高+慢组经慢炎组相同处理后,同高低组大鼠一起置于模拟海拔6000m的高原低氧环境中连续3 d;然后进行肺组织取材、病理切片HE染色观察。外周血白细胞分类和计数,酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测血清和肺组织IL-6、TNF-α水平,Western印迹检测肺组织IL-6蛋白表达。结果经LPS和高原低氧暴露处理过的大鼠肺组织出现炎细胞浸润、肺泡间毛细血管扩张的病理学变化;外周血白细胞分类和计数。ELISA结果显示,与对照组相比,慢炎组、高低组均能导致大鼠外周血白细胞总数增加(P<0.01),血清和肺组织IL-6和TNF-α水平均升高(均P<0.05);高原低氧和慢性炎症具有交互作用(P<0.01),高+慢组进一步增加了外周血白细胞数,并促进IL-6和TNF-α的表达升高(P<0.01)。结论通过大鼠脂多糖慢性炎症模型,证实高原低氧可加重慢性炎症发展。 展开更多
关键词 炎症 高原低氧 脂多糖类 白细胞介素6 肿瘤坏死因子α
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接种密度对C57BL/6小鼠CIK细胞增殖、分化及杀瘤作用的影响 被引量：1
5
作者 李光宗 曾喜欢 +6 位作者 刘英富 霍景瑞 郁硕 张益 侯世科 陈小义 陈锋 《生物技术通讯》 CAS 2017年第3期342-346,共5页
目的:探讨不同接种密度对C57BL/6小鼠细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)增殖分化及杀瘤作用的影响,进一步优化CIK细胞培养方法。方法:按照1×10~6/mL(A组)、4×10~6/mL(B组)、8×10~6/mL(C组)、12×10~6/mL(D组)4种接种... 目的:探讨不同接种密度对C57BL/6小鼠细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)增殖分化及杀瘤作用的影响,进一步优化CIK细胞培养方法。方法:按照1×10~6/mL(A组)、4×10~6/mL(B组)、8×10~6/mL(C组)、12×10~6/mL(D组)4种接种密度培养细胞,加入必要的细胞因子,14 d后收获细胞,通过流式细胞术、CCK-8法对细胞增殖、分化、杀瘤作用进行分析。结果:培养过程中,C组细胞形态及增殖能力优于A、B组,在14 d时收获细胞并对其进行检测时发现,C组CD3^+/NK1.1^+细胞所占比例明显高于A、B组,杀瘤活性也优于A、B组;D组细胞密度过大,在7 d细胞进入快速增殖期后出现大面积死亡。结论:适当提高C57BL/6小鼠CIK细胞的接种密度利于细胞增殖、分化及杀瘤作用的形成,选择8×10~6/mL的接种密度是较为合适的。 展开更多
关键词 细胞因子诱导的杀伤细胞 密度 细胞培养 增殖 杀瘤作用
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抗Toll样受体4胞外C端结构域单克隆抗体制备及其治疗脓毒症的初步效果 被引量：1
6
作者 陈锋 刘英富 +3 位作者 李光宗 张益 郁硕 侯世科 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期655-660,共6页
目的制备针对Toll样受体4（TLR4）胞外C端结构域的单克隆抗体，并探讨抗TLR4C端单克隆抗体对脓毒症的影响。方法原核表达、丙烯葡聚糖凝胶（SephacrylS-100）纯化获得大鼠来源的TLR4C端多肽（氨基酸序列：368—579，命名为TLR4-C），免... 目的制备针对Toll样受体4（TLR4）胞外C端结构域的单克隆抗体，并探讨抗TLR4C端单克隆抗体对脓毒症的影响。方法原核表达、丙烯葡聚糖凝胶（SephacrylS-100）纯化获得大鼠来源的TLR4C端多肽（氨基酸序列：368—579，命名为TLR4-C），免疫6～8周雌性Balb／c小鼠，经细胞融合、抗体筛选、纯化等程序制备抗TLR4-C单克隆抗体，采用Western印迹、细胞免疫荧光对制备的TLR4-C单克隆抗体进行特异性检测。通过细胞实验和脓毒症动物模型实验进行抗体活性测定。（1）细胞实验：100μg/ml抗体加入培养的NR8383作用1h，加入10ng／ml脂多糖（LPS）继续培养12h后，ELISA检测培养基中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的释放水平；（2）脓毒症动物模型实验：40只SD大鼠按随机数字表法分为对照抗体组、B—D5抗体组，每组尾静脉分别注射50mg／kg相应抗体，1h后经腹腔给予10mg／kg致脓毒症剂量的LPS，4h后检测两组血清TNF—α含量，并连续72h观察两组动物存活情况。结果获得3株特异性高、且能结合TLR4-C和TLR4全蛋白的抗TLR4-C单克隆抗体。细胞活性测定显示，1株单克隆抗体（B—D5）能明显抑制细胞TNF—α的释放，其余2株对抑制细胞TNF-α的作用较弱。动物模型实验显示，B—D5抗体组TNF-α水平为（1．54±0．18）ng／ml，明显低于对照抗体组的（0．51±0．10）ng／ml（P〈0．01），B—D5抗体组存活率（70％）明显高于对照抗体组（30％）（P〈0．05）。结论制备的抗TLR4C端单克隆抗体具有很好的TLR4中和作用，明显提高大鼠的存活率，对LPS诱发的脓毒症具有较好的保护作用。 展开更多
关键词 TOLL样受体4 抗体 单克隆 脓毒症
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3G-ELISA新方法在促肾上腺皮质素释素检测中的应用
7
作者 李光宗 陈锋 +4 位作者 刘英富 张益 郁硕 樊毫军 侯世科 《生物技术通讯》 CAS 2017年第2期137-140,共4页
目的:改进传统ELISA方法,提高其对痕量样本的检测灵敏度,降低检测限。方法:将一抗和二抗分别与纳米金和氧化石墨烯结合,应用于传统ELISA方法,通过纳米材料的信号放大作用,提高对痕量样本的检测灵敏度,降低检测限。结果:优化后的方法可... 目的:改进传统ELISA方法,提高其对痕量样本的检测灵敏度,降低检测限。方法:将一抗和二抗分别与纳米金和氧化石墨烯结合,应用于传统ELISA方法,通过纳米材料的信号放大作用,提高对痕量样本的检测灵敏度,降低检测限。结果:优化后的方法可对浓度为0.02μg/mL的促肾上腺皮质素释素进行检测,灵敏度提高了125倍。结论:改进后的方法性能稳定,重复性好,可用于生物样本中痕量被检测物的测定。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定 纳米金 氧化石墨烯 促肾上腺皮质素释素
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低数据集下基于ASPP-YOLO v5的苋菜识别方法研究 被引量：3
8
作者 张继成 侯郁硕 +1 位作者 郑萍 夏士兴 《农业机械学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第S02期223-228,共6页
针对田间苋菜识别存在准确率低、样本数量少等问题,通过引入扩展感受野和提取上下文信息的ASPP注意力机制改进YOLO v5苋菜识别模型,在低数据集下改进后的模型能够显著提高F1值和mAP。实验结果表明,在低数据集下引入ASPP注意力机制后苋... 针对田间苋菜识别存在准确率低、样本数量少等问题,通过引入扩展感受野和提取上下文信息的ASPP注意力机制改进YOLO v5苋菜识别模型,在低数据集下改进后的模型能够显著提高F1值和mAP。实验结果表明,在低数据集下引入ASPP注意力机制后苋菜识别模型F1值提高13个百分点、mAP提高18.6个百分点。采用横向录制的方式苋菜被检测到的概率提高15.4个百分点。因此,本研究为苋菜或其他杂草在低数据集下的识别提供了有效的方法,为农业领域的杂草识别和管理研究提供了参考。 展开更多
关键词 苋菜识别 YOLO v5 ASPP 低数据集
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黑故子酊对白癜风的作用 被引量：1
9
作者 万海栋 郁硕根 +2 位作者 刘刚成 熊冬兰 马礼坤 《中国现代医生》 2010年第22期59-59,125,共2页
白癜风属中医"白癜"、"白驳风"的范畴。主要由于酪氨酸酶缺乏,而不能合成黑色素,致使局部皮肤色素脱失,病程长,可持续终身,易诊难治。临床表现为皮损局部呈乳白色,毛发也可变白。好发于面部、颈部、手背、腰骶部及... 白癜风属中医"白癜"、"白驳风"的范畴。主要由于酪氨酸酶缺乏,而不能合成黑色素,致使局部皮肤色素脱失,病程长,可持续终身,易诊难治。临床表现为皮损局部呈乳白色,毛发也可变白。好发于面部、颈部、手背、腰骶部及会阴部等。本文报道中药方剂黑故子对其治疗的效果及机制。 展开更多
关键词 白癜风 黑故子 中药
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鼻衄汤治疗鼻出血的体会 被引量：1
10
作者 万海栋 郁硕根 +2 位作者 胡玲 孙攀锋 杨源 《中国民族民间医药》 2010年第13期224-224,共1页
鼻出血是临床常见症状之一,可单存由鼻病引起,亦可由全身疾病所致。出血时间可在白天人清醒状态下,也可在夜间睡梦中,可单侧出血,亦可双侧出血,出血量多少不一,出血部位大多在鼻中隔前下方。
关键词 鼻衄汤 治疗 鼻出血
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