某院ICU医院获得性肺炎患者痰分离MRSA耐药基因和pvl基因携带情况 被引量：15

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作者 夏雯 吴亮 +5 位作者 阴晴 戴晓玥 邹治情 吴瑶 周亚玲 何蕾 《中国感染控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期525-530,共6页

目的了解医院获得性肺炎患者痰中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因和毒力因子pvl基因携带情况。方法对来源于某院重症监护病房(ICU)医院获得性肺炎患者痰中的46株MRSA,采用聚合酶链反应(PCR)检测细菌耐药基因(mecA、aacA-D、tetK... 目的了解医院获得性肺炎患者痰中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因和毒力因子pvl基因携带情况。方法对来源于某院重症监护病房(ICU)医院获得性肺炎患者痰中的46株MRSA,采用聚合酶链反应(PCR)检测细菌耐药基因(mecA、aacA-D、tetK、tet M、msrA、msrB、ermA、ermC、vatA、vatB、vatC、femB和linA)和毒力因子pvl基因,并以PCR法分析MRSA菌株SCCmec型别。结果 46株MRSA中,耐药基因mecA、aacA-D、tetK、msrA、ermA、ermC、femB和linA的检出率分别为100%、54.35%、36.96%、13.04%、36.96%、52.17%、71.74%和10.87%,所有菌株均未检出tet M、msrB、vatA、vatB和vatC基因;毒力基因pvl携带率为65.22%。46株MRSA共检出4种SCCmec基因型,其中SCCmecⅡ型、Ⅲ型、IVc型、V型分别为26.09%、52.17%、2.17%和2.17%。结论医院获得性肺炎患者痰中MRSA携带多种耐药基因,且毒力基因pvl携带率较高,SCCmec基因型以Ⅲ型为主,临床医务人员对此情况应高度重视。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 耐药基因 医院获得性肺炎 PVL基因 SCCmec分型

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社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)肺炎支原体毒素促进THP-1细胞自噬并激活NLRP3炎性体 被引量：10

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作者 夏雯 戴晓玥 +5 位作者 吴亮 易承学 邹治情 丁龙坤 席月 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1076-1082,共7页

目的研究社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)肺炎支原体(Mp)毒素诱导THP-1细胞自噬以及活化含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)炎性体的能力和机制。方法采用原核表达技术获得重组CARDS(rCARDS)Mp毒素,5μg/mL和10μg/m... 目的研究社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)肺炎支原体(Mp)毒素诱导THP-1细胞自噬以及活化含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)炎性体的能力和机制。方法采用原核表达技术获得重组CARDS(rCARDS)Mp毒素,5μg/mL和10μg/mL rCARDS Mp毒素作用THP-1细胞20 min、40 min、1 h、2 h和3 h。Western blot法检测THP-1细胞自噬相关蛋白beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和P62表达水平,实时定量PCR检测THP-1细胞NLRP3、胱天蛋白酶1(caspase-1)和白细胞介素1β(IL-1β)的mRNA水平,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯染色检测THP-1细胞活性氧(ROS)水平。结果与正常细胞对照组相比,rCARDS毒素作用1 h内,THP-1细胞beclin-1、LC3和P62表达量随着作用时间延长明显增加;rCARDS毒素作用2 h和3 h时,beclin-1、LC3和P62表达量降低。rCARDS Mp毒素作用THP-1细胞20 min和40 min时,5μg/mL、10μg/mL rCARDS Mp毒素组细胞NLRP3表达量无显著差别,但在各时间点,rCARDS Mp毒素处理的THP-1细胞NLRP3 mRNA水平均显著高于正常对照组,且作用1 h和2 h时,10μg/mL组细胞NLRP3 mRNA水平显著高于5μg/mL组,而3 h时5μg/mL组和10μg/mL组细胞NLRP3 mRNA水平均低于2 h时。rCARDS Mp毒素作用40 min、1 h和2 h时,不同剂量rCARDS Mp毒素组细胞caspase-1 mRNA水平均高于正常细胞对照组,作用40 min、1 h、2 h和3 h时,10μg/mL组细胞caspase-1 mRNA水平均显著高于5μg/mL组。与正常细胞对照组相比,rCARDS Mp毒素作用20 min和40 min时,不同剂量rCARDS Mp毒素组细胞IL-1βmRNA水平变化不明显,rCARDS Mp毒素作用1 h^3 h时,各组细胞IL-1βmRNA和ROS水平显著增加并呈剂量依赖性。结论CARDS肺炎支原体毒素可以激活THP-1细胞NLRP3炎性体活化并诱导细胞自噬。 展开更多

关键词 肺炎支原体毒素 社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS) 自噬 含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)

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建立实时荧光LAMP法检测肺炎支原体 被引量：8

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作者 吴亮 夏雯 +5 位作者 阴晴 戴晓玥 邹治情 王海波 陈盛霞 易承学 《临床检验杂志》 CAS 2020年第1期7-10,共4页

目的:建立实时荧光环介导等温扩增(LAMP)法检测肺炎支原体。方法:在LAMP体系中添加适量荧光染料SYTO-9,通过实时定量PCR仪监测LAMP反应结果。以肺炎支原体P1基因重组质粒制备一系列浓度标准品,分别使用实时荧光LAMP法和SYBR GreenⅠ染料... 目的:建立实时荧光环介导等温扩增(LAMP)法检测肺炎支原体。方法:在LAMP体系中添加适量荧光染料SYTO-9,通过实时定量PCR仪监测LAMP反应结果。以肺炎支原体P1基因重组质粒制备一系列浓度标准品,分别使用实时荧光LAMP法和SYBR GreenⅠ染料LAMP法检测,比较2种方法的检出限。肺炎支原体M129标准株菌液以10倍梯度稀释,分别以实时荧光LAMP法和肺炎支原体荧光PCR试剂盒检测,比较2种方法灵敏度。以实时荧光LAMP法检测常见呼吸道感染病原体肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌基因组DNA,评估该方法特异性。采集疑似肺炎支原体感染患儿咽拭子标本,分别以实时荧光LAMP法和荧光PCR法检测,比较2种方法检出率差异。结果:实时荧光LAMP法可以检出P1基因最低限为103 copies/μL,当基因拷贝数大于104 copies/μL时,反应30 min样本组即可出现明显荧光信号。SYBR GreenⅠ染料LAMP法可以检出P1基因最低限为104 copies/μL,反应需1 h才可获得足够产物用于显色。实时荧光LAMP法灵敏度高于实时定量PCR法100倍,且对常见呼吸道病原体DNA无扩增。实时荧光LAMP法和荧光PCR法检测疑似肺炎支原体感染咽拭子标本的阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:实时荧光LAMP法可以有效避免因开盖检测造成的气溶胶污染,反应时间短,灵敏度高,适于在基层医院中推广使用。 展开更多

关键词 肺炎支原体 实时荧光环介导等温扩增 快速检测

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改良碱裂解法和煮沸法提取金黄色葡萄球菌DNA效果的比较 被引量：6

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作者 邹治情 王俊玲 +7 位作者 陈思 谢雨 Dinsh Kumar K 吴亮 姜旭淦 阴晴 陈盛霞 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2018年第3期267-270,共4页

目的:建立一种简便经济的金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法。方法:选取10株耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,预先以终浓度2 mg/mL溶菌酶处理6 h,再以改良碱裂解法提取细菌基因组DNA。同时以常规煮沸法制备上述细菌基因组DNA。采用PCR法扩增... 目的:建立一种简便经济的金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法。方法:选取10株耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,预先以终浓度2 mg/mL溶菌酶处理6 h,再以改良碱裂解法提取细菌基因组DNA。同时以常规煮沸法制备上述细菌基因组DNA。采用PCR法扩增两种模板中金黄色葡萄球菌spa基因、mecA基因和femB基因,比较两种方法提取DNA的效果。结果:以改良碱裂解法制备DNA为模板,所有10株标本均可扩增出spa基因和mecA基因,4个标本扩增出femB基因;以直接煮沸法制备DNA为模板,仅1个标本扩增出spa基因,2个标本扩增出mecA基因,所有标本未扩增出femB基因。结论:改良碱裂解法提取基因组DNA效果优于直接煮沸法,所提取基因组DNA可以满足PCR扩增的要求。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 PCR检测 标本处理 DNA提取

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鲍曼不动杆菌OmpA经ROS/NLRP3信号通路调控THP-1细胞自噬和凋亡 被引量：5

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作者 戴晓玥 吴亮 +8 位作者 夏雯 阴晴 邹治情 周亚玲 何蕾 丁龙坤 席月 张有江 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2020年第5期423-429,共7页

目的:探讨鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(outer membrance protein A,OmpA)对人单核巨噬THP-1细胞自噬和凋亡的影响及其可能机制。方法:构建OmpA/pET-28a载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达纯化重组OmpA蛋白,并免疫家兔制备多克隆抗体;采用蛋白... 目的:探讨鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(outer membrance protein A,OmpA)对人单核巨噬THP-1细胞自噬和凋亡的影响及其可能机制。方法:构建OmpA/pET-28a载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达纯化重组OmpA蛋白,并免疫家兔制备多克隆抗体;采用蛋白质印迹法检测呼吸机相关性肺炎患者发病前后血清中OmpA抗体水平变化。以不同浓度(1、10μg/mL)重组OmpA蛋白分别刺激THP-1细胞1、3、6 h,采用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1表达,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧产生,荧光实时定量PCR检测细胞含NLR家族Pyrin域NOD样受体家族3(NLRP3)、Caspase-1和IL-1β等mRNA表达。结果:自制多抗可以识别临床菌株OmpA蛋白。呼吸机相关性肺炎患者发病前后,血清中均可检出OmpA抗体(IgG型),且发病后OmpA抗体水平显著高于气管插管前(P<0.05)。重组OmpA蛋白刺激THP-1细胞后,细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1表达显著上升,细胞凋亡率显著升高,呈一定的时间和浓度依赖性(P<0.05)。与对照组比,在重组OmpA蛋白作用1 h时,细胞IL-1βmRNA表达和活性氧含量显著增加(P<0.05);3 h和6 h时,3种mRNA表达量和活性氧含量显著降低(P<0.05)。结论:OmpA通过激活THP-1细胞NLRP3炎症小体,释放活性氧和IL-1β等炎症介质,诱导THP-1细胞自噬和凋亡发生。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 呼吸机相关性肺炎 OMPA 自噬 NLRP3

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慢性腹泻患者艰难梭菌、人芽囊原虫和隐孢子虫感染的研究 被引量：4

6

作者 周亚玲 吴亮 +5 位作者 阴晴 吴瑶 何蕾 邹治情 戴晓玥 夏雯 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期723-726,共4页

收集江苏大学附属医院2018年收治的慢性腹泻患者粪样,涂片镜检并提取粪样DNA,采用多重PCR技术检测粪样中艰难梭菌16S rDNA基因、毒素A(tcdA)基因、毒素B(tcdB)基因和二元毒素(cdtA和cdtB)基因;常规PCR检测人芽囊原虫SSU rRNA基因;巢式PC... 收集江苏大学附属医院2018年收治的慢性腹泻患者粪样,涂片镜检并提取粪样DNA,采用多重PCR技术检测粪样中艰难梭菌16S rDNA基因、毒素A(tcdA)基因、毒素B(tcdB)基因和二元毒素(cdtA和cdtB)基因;常规PCR检测人芽囊原虫SSU rRNA基因;巢式PCR检测隐孢子虫SSU rRNA基因。96份慢性腹泻患者粪样中,检出艰难梭菌16S rDNA基因64份,阳性率为66.7%;艰难梭菌阳性粪样中,tcdA基因24例,tcdB基因18例,未检出单独携带tcdB基因粪样,产毒株携带率为37.5%,所有粪样中均未检出cdtA基因和cdtB基因;镜检结果显示,人芽囊原虫粪样16份,检出率为16.7%;PCR结果显示,21份粪样扩增出人芽囊原虫SSU rRNA基因,检出率为21.9%,镜检阳性粪样PCR检测也为阳性;未检测到艰难梭菌和人芽囊原虫混合感染;未检出隐孢子虫SSU rRNA基因。江苏大学附属医院慢性腹泻患者中主要检出的病原体为艰难梭菌和人芽囊原虫。 展开更多

关键词 慢性腹泻 艰难梭菌 人芽囊原虫 隐孢子虫

原文传递

肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌耐药基因分析 被引量：4

7

作者 戴晓玥 吴亮 +6 位作者 阴晴 夏雯 邹治情 周亚玲 何蕾 Dinsh Kumar K 许化溪 《临床检验杂志》 CAS 2020年第1期60-65,共6页

目的:分析呼吸内科肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌携带β-内酰胺酶基因及主动外排泵基因情况。方法:收集经生化鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌株160株,将鲍曼不动杆菌特异性片段(Ab-ITS)的二重PCR法确认为鲍曼不动杆菌者纳入研究。... 目的:分析呼吸内科肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌携带β-内酰胺酶基因及主动外排泵基因情况。方法:收集经生化鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌株160株,将鲍曼不动杆菌特异性片段(Ab-ITS)的二重PCR法确认为鲍曼不动杆菌者纳入研究。用PCR法检测鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因和主动外排泵基因,包括A类β-内酰胺酶(blaTEM、blaPER和blaCARB)、B类β-内酰胺酶(blaIMP和blaVIM)、C类β-内酰胺酶(blaADC和blaDHA)、D类β-内酰胺酶(blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51和blaOXA-58)和主动外排泵相关基因(adeB、adeJ、macB、emrB、emrA、abeS、abeM和craA)。以微量肉汤稀释法检测加入外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)前后,携带adeB基因鲍曼不动杆菌对亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC)的变化。结果:临床分离160株醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体中鲍曼不动杆菌143株(占90%),包括亚胺培南耐药株119株(占83.2%)和敏感株24株(占16.8%)。所有鲍曼不动杆菌均检出blaOXA-51基因,其中,亚胺培南耐药株中检出blaOXA-23(98.3%)、blaTEM(41.4%)、blaADC(98.3%)和blaDHA(0.7%),blaPER、blaCARB、blaIMP、blaVIM、blaOXA-24和blaOXA-58均未检出;敏感株中未检出blaOXA-23。adeJ、macB、abeM和craA基因在143株鲍曼不动杆菌中的携带率均为100%;emrB、emrA和abeS基因携带率均超过80%。adeB基因在亚胺培南耐药株中检出117株(98.3%)。在CCCP干预试验中,携带adeB基因的鲍曼不动杆菌MIC50降低1/2。结论:呼吸内科鲍曼不动杆菌主要携带blaOXA-23和adeB主动外排泵基因,可能与亚胺培南耐药密切相关。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 耐药 blaOXA-23 adeB

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表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1单核细胞自噬和凋亡 被引量：4

8

作者 陆娟 邹治情 +7 位作者 夏雯 戴晓玥 席月 丁龙坤 张敏 吴亮 阴晴 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期406-414,共9页

目的研究表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1细胞自噬和凋亡机制。方法在大肠杆菌中表达重组杀白细胞素(rPVL),并免疫家兔制备多克隆抗血清。采用反转录PCR和Western blot法鉴定表达PVL的耐甲氧西林金黄... 目的研究表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1细胞自噬和凋亡机制。方法在大肠杆菌中表达重组杀白细胞素(rPVL),并免疫家兔制备多克隆抗血清。采用反转录PCR和Western blot法鉴定表达PVL的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。分别使用表达PVL的MRSA(MRSA^(PVL+))和不表达PVL的MRSA(MRSA^(PVL-))感染THP-1细胞,于感染后1、3、6 h收集细胞,采用实时定量PCR检测自噬相关基因3(ATG3)、ATG4B、ATG5、ATG7、ATG12;Western blot法检测beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、caspase-3的蛋白水平;二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针负载法检测细胞活性氧(ROS)水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功制备PVL多克隆抗体,鉴定出1株MRSA^(PVL-)菌和1株MRSA^(PVL+)菌。分别以两株菌与THP-1细胞共培养1 h,MRSA^(PVL+)组仅ATG7表达量显著高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组;共培养3 h,MRSA^(PVL+)组ATG7和ATG12表达量高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组,其他基因表达量变化不明显。感染1、3、6 h,MRSA^(PVL+)感染组细胞PI3K、AKT和mTOR磷酸化水平显著低于MRSA^(PVL-)感染组和正常对照组;感染1 h和3 h,MRSA^(PVL-)感染组细胞PI3K、AKT和mTOR磷酸化水平显著低于正常对照组;感染6 h,MRSA^(PVL-)菌感染组细胞mTOR磷酸化水平显著低于正常对照组。感染1、3、6 h,MRSA^(PVL+)组细胞ROS水平和凋亡率均高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组,且随着感染时间的延长细胞ROS水平和凋亡率持续增加;MRSA^(PVL-)组细胞ROS水平和凋亡率也高于正常对照组。结论MRSA^(PVL+)对THP-1细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制作用更强,可促进ATG12/ATG7/AT 展开更多

关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) Panton-Valentine杀白细胞素(PVL) 巨噬细胞 自噬 凋亡

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鲍曼不动杆菌荚膜通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进鼠巨噬细胞自噬和凋亡 被引量：3

9

作者 韩长鸣 戴晓玥 +8 位作者 段前梅 仇圣刚 石立新 夏雯 邹治情 Dinsh Kumar K 吴亮 阴晴 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2020年第1期1-6,共6页

目的:探讨不同厚度荚膜的鲍曼不动杆菌诱导鼠Raw 264.7巨噬细胞自噬和凋亡的能力及潜在的机制。方法:从肺炎患者痰液中分离鉴定鲍曼不动杆菌,以刚果红染色法染色细菌荚膜并筛选荚膜厚度显著不同的菌株用于后续研究。分别以厚荚膜株(Ab-H... 目的:探讨不同厚度荚膜的鲍曼不动杆菌诱导鼠Raw 264.7巨噬细胞自噬和凋亡的能力及潜在的机制。方法:从肺炎患者痰液中分离鉴定鲍曼不动杆菌,以刚果红染色法染色细菌荚膜并筛选荚膜厚度显著不同的菌株用于后续研究。分别以厚荚膜株(Ab-H株)和薄荚膜株(Ab-B株)感染Raw 264.7细胞,于感染后1 h、3 h和6 h时收集细胞,采用免疫印迹法检测细胞自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1表达,以及PI3K、Akt和mTOR磷酸化水平,采用流式细胞术检测细胞活性氧生成量和凋亡率。结果:鲍曼不动杆菌经刚果红染色后,菌体染成紫黑色,背景染成红色,荚膜不着色,可以清晰地观察到细菌荚膜厚度。筛选出两株荚膜厚度差异显著的鲍曼不动杆菌,分别为Ab-H株和Ab-B株。上述菌株感染Raw 264.7细胞后均可以诱导细胞自噬和凋亡,并增加细胞活性氧生成量,PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平受到显著抑制,且抑制作用随着时间延长而增加(P<0.05)。Ab-H株细胞凋亡率、自噬相关蛋白Becline-1表达量和活性氧生成量显著高于Ab-B株(P<0.05)。结论:鲍曼不动杆菌能够诱导Raw 264.7细胞自噬和凋亡的发生,诱导能力与细菌荚膜厚度呈正相关;厚荚膜鲍曼不动杆菌有更强的诱导Raw 264.7细胞活性氧生成能力,以及抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化能力,最终导致Raw 264.7细胞自噬和凋亡。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 荚膜 细胞凋亡 PI3K/Akt/mTOR信号通路

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鲍曼不动杆菌荚膜厚度对鼠巨噬细胞炎症复合体活化的影响 被引量：2

10

作者 吴亮 陆娟 +7 位作者 王廷廷 万晟霞 邹治情 戴晓玥 夏雯 阴晴 陈盛霞 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2019年第2期133-137,共5页

目的:探讨荚膜厚度不同的鲍曼不动杆菌激活鼠巨噬细胞Raw 264.7炎症复合体能力的差异。方法:采用刚果红染色法观察鲍曼不动杆菌荚膜,筛选出荚膜厚度差异显著的两株菌株。将两株菌分别感染Raw 264.7,以实时定量PCR法分析感染6 h的细胞NO... 目的:探讨荚膜厚度不同的鲍曼不动杆菌激活鼠巨噬细胞Raw 264.7炎症复合体能力的差异。方法:采用刚果红染色法观察鲍曼不动杆菌荚膜,筛选出荚膜厚度差异显著的两株菌株。将两株菌分别感染Raw 264.7,以实时定量PCR法分析感染6 h的细胞NOD样受体家族3(NOD-like receptors,NLRP3)、Caspase-1和IL-1β基因表达量;流式细胞术分析感染1、3和6 h的细胞活性氧表达量。结果:刚果红染色可以清晰地观察到鲍曼不动杆菌周围一圈不着色的荚膜,选择出荚膜厚度差异显著的两株鲍曼不动杆菌用于感染细胞。不同荚膜厚度的鲍曼不动杆菌感染均可刺激Raw 264.7细胞NLRP3、Caspase-1和IL-1βmRNA表达上调,其中厚荚膜菌株诱导细胞NLRP3和IL-1βmRNA表达能力显著高于薄荚膜菌株(P <0.05);不同荚膜厚度的鲍曼不动杆菌感染3 h和6 h时,细胞活性氧表达量均显著高于对照组(P <0.05),且厚荚膜菌株诱导活性氧表达能力显著高于薄荚膜菌株(P <0.05)。结论:不同荚膜厚度的鲍曼不动杆菌活化鼠巨噬细胞炎症复合体能力存在差异,厚荚膜菌株诱导炎症复合体活化的能力更强。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 荚膜 炎症复合体 活性氧

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自制多抗检测金黄色葡萄球菌PVL蛋白的研究

11

作者 陈述 邹治情 +5 位作者 张海 丁龙坤 席月 闫曼 孙畅 吴亮 《临床医学进展》 2022年第4期2463-2468,共6页

目的:携带杀伤白细胞素(pvl)基因的耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌毒力强,可以诱发高致死率的社区获得性肺炎,但目前仍缺少快速简便的检测方法。本研究拟制备抗PVL多克隆抗体用于其快速检测。方法:本研究通过将金黄色葡萄球菌PVL蛋白S亚基... 目的:携带杀伤白细胞素(pvl)基因的耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌毒力强,可以诱发高致死率的社区获得性肺炎,但目前仍缺少快速简便的检测方法。本研究拟制备抗PVL多克隆抗体用于其快速检测。方法:本研究通过将金黄色葡萄球菌PVL蛋白S亚基的重组质粒LukS-PV/pET28a导入大肠杆菌诱导表达重组蛋白,再经免疫新西兰兔制备抗血清,以Western blotting法检测金黄色葡萄球菌PVL蛋白表达。结果:成功纯化出重组LukS-PV蛋白,并制备抗LukS-PV抗血清。通过Western blotting法采用自制多克隆抗体成功检测出金黄色葡萄球菌PVL表达。结论:自制抗PVL多克隆抗体可以检测金黄色葡萄球菌PVL表达,为下一步试剂盒制备奠定技术基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 杀白细胞素 多克隆抗体 检测

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鲍曼不动杆菌诱导Raw 264.7细胞自噬研究 被引量：1

12

作者 王廷廷 吴菲菲 +10 位作者 陈曦 邹治情 吴瑶 周亚玲 牛付轩 Dinsh Kumar K 吴亮 姜旭淦 阴晴 陈盛霞 许化溪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期567-570,共4页

目的 探讨鲍曼不动杆菌诱导鼠巨噬细胞Raw 264.7发生自噬的能力。方法 鲍曼不动杆菌标准株(ATCC 17978)感染Raw 264.7细胞,于感染180 min时中止实验,收集细胞提取总RNA和总蛋白,通过Western boltting法检测自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表... 目的 探讨鲍曼不动杆菌诱导鼠巨噬细胞Raw 264.7发生自噬的能力。方法 鲍曼不动杆菌标准株(ATCC 17978)感染Raw 264.7细胞,于感染180 min时中止实验,收集细胞提取总RNA和总蛋白,通过Western boltting法检测自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达。同时通过qPCR法检测自噬相关基因atg3、atg4B、atg5、atg7、atg12、atg16L1、ULK1和GABARAPL1。结果 鲍曼不动杆菌感染Raw 264.7细胞后,细胞LC3和Beclin-1表达量较未感染组升高显著(F(LC3)=457.2;F(Beclin-1)=43.27,P<0.01),自噬相关基因表达量atg3、atg4B、atg5、atg7、atg16L1、ULK1、GABARAPL1变化并不明显,而atg12表达量在180 min时升高显著(F=208.6,P<0.01)。结论 鲍曼不动杆菌可以诱导鼠巨噬细胞Raw 264.7发生自噬,其机制可能是通过ATG12-ATG7-ATG5信号传导通路,但其确切机制有待于进一步研究。 展开更多

关键词 鲍曼不动杆菌 鼠巨噬细胞 自噬

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4种方法提取金黄色葡萄球菌基因DNA效果的比较

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作者 邹治情 张敏 +9 位作者 戴晓玥 夏雯 周亚玲 何蕾 白佳玉 苏叶 Dinesh KumarKesavan 吴亮 阴晴 许化溪 《生物医学》 CAS 2019年第4期154-161,共8页

目的:比较4种方法,包括煮沸法、改良碱裂解法、磁珠法和吸附柱法提取金黄色葡萄球菌基因DNA效果,为临床金黄色葡萄球菌感染的快速检测提供技术支撑。方法:选取20株临床分离耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,分别使用煮沸法、改良碱裂解法、... 目的:比较4种方法,包括煮沸法、改良碱裂解法、磁珠法和吸附柱法提取金黄色葡萄球菌基因DNA效果,为临床金黄色葡萄球菌感染的快速检测提供技术支撑。方法:选取20株临床分离耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,分别使用煮沸法、改良碱裂解法、磁珠法和吸附柱法提取基因DNA。通过PCR法扩增所提取DNA模板中金黄色葡萄球菌spa基因、mecA基因和femB基因,以评估4种方法提取效果。结果:磁珠法制备的模板中,PCR法可以扩增出所有标本的spa基因、mecA基因和femB基因;吸附柱法制备的模板中,所有标本均可扩增出spa基因和mecA基因,而仅19个标本扩增出femB基因;以改良手工碱裂解法制备的模板,所有标本均可扩增出mecA基因,19标本可以扩增出spa基因和femB基因;煮沸法制备的模板中,PCR法可以分别扩增出7个标本的spa基因,8个标本的mecA基因,所有标本均未扩增出femB基因。结论:改良碱裂解法、吸附柱法和磁珠法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA均可以用于PCR扩增,直接煮沸法提取效果较差,不适合用于临床金黄色葡萄球菌基因组DNA提取;磁珠法用时最短,更适合于大量快速自动化提取。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 DNA提取 PCR检测

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镇江地区人乳头状瘤病毒16型E6基因变异分析

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作者 吴瑶 吴亮 +5 位作者 阴晴 周亚玲 邹治情 戴晓玥 姜旭淦 陈盛霞 《临床医学进展》 2018年第10期935-943,共9页

目的:研究镇江地区人乳头瘤病毒16型(HPV-16) E6基因变异情况,为HPV防治提供流行病学数据。方法:采用HPV分型检测试剂盒筛选我院女性患者宫颈脱落细胞样本中HPV-16型病毒阳性标本,并利用E6基因特异性引物扩增HPV-16型病毒阳性标本中病... 目的:研究镇江地区人乳头瘤病毒16型(HPV-16) E6基因变异情况,为HPV防治提供流行病学数据。方法:采用HPV分型检测试剂盒筛选我院女性患者宫颈脱落细胞样本中HPV-16型病毒阳性标本,并利用E6基因特异性引物扩增HPV-16型病毒阳性标本中病毒E6基因全长。PCR产物经测序后,采用BLAST比对分析基因突变位点,并使用软件MEGA 5.0以邻接法(Neighbor Joining, NJ)进行进化树分析。结果:从650例样本检出35例HPV-16型病毒阳性,感染率为27.3%。在35例HPV-16型病毒样本中,20例样本的E6基因在220位核苷酸发生碱基错义突变,突变频率为57%;14例样本的E6基因在178位核苷酸发生碱基错义突变,突变频率为40%;另有8例样本的E6基因在702位核苷酸发生碱基同义突变,突变频率为23%。进化树分析结果表明,镇江地区流行株主要为亚洲变异型,没有发现非洲1型,非洲2型,亚洲美洲及北美洲变异型。结论:镇江地区HPV-16型病毒的E6基因普遍存在突变,该突变可能导致感染者癌变概率的增加,同时分析本地区HPV病毒突变热点区域和保守区域也可以为研究针对中国人群的宫颈癌疫苗的研制提供线索。 展开更多

关键词 HPV-16 E6基因 基因变异

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