从家蚕(Bombyx mori L.)5龄幼虫肠道分离鉴定产淀粉酶细菌菌株以用作微生态制剂的研究,并对该菌α-淀粉酶基因进行克隆、序列分析及在大肠杆菌中原核表达。通过含淀粉NA培养基筛选分离得到产淀粉酶菌,通过形态学观察及16S rDNA序列分析...从家蚕(Bombyx mori L.)5龄幼虫肠道分离鉴定产淀粉酶细菌菌株以用作微生态制剂的研究,并对该菌α-淀粉酶基因进行克隆、序列分析及在大肠杆菌中原核表达。通过含淀粉NA培养基筛选分离得到产淀粉酶菌,通过形态学观察及16S rDNA序列分析鉴定其种属,DNS法测定酶活,并设计了淀粉酶基因引物进行克隆,构建了DZ-a号菌淀粉酶基因的原核表达载体,经酶切鉴定后转化到大肠杆菌Transetta(DE3)中并诱导表达。共分离得到2株产淀粉酶细菌菌株,将其PCR扩增得到的16S rDNA序列分别与GenBank上已有序列进行比对,均与芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus有99%的同源性,DZ-a号菌和DZ-h号菌的产酶能力分别为20.5U/mL和24.2U/mL。产淀粉酶基因片段测序结果表明两株菌的克隆基因片段长度分别为3414bp和3378bp,均包括完整的编码区序列,可编码586个氨基酸,SDS-PAGE分析得到大小约66kD的目的蛋白。鉴定该2株菌DZ-a、DZ-h号菌均属于芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌,克隆测序所得序列为完整的蜡样芽孢杆菌α-淀粉酶基因序列,并成功表达。为进一步纯化和鉴定目的蛋白及研究其功能奠定了试验基础。展开更多
