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我国彝族一个新的DR15(2)等位基因的核苷酸序列分析 被引量：1
1
作者 费虹明 陆嫣 +3 位作者 林标扬 蒋伟宏 邹嫣琼 陈仁彪 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期45-48,共4页
对一组彝族样本的寡核苷酸分型中发现的９个与ＤＲＢ１１５０１反应格局基本相似，但有差异的ＤＲ１５（２）阳性细胞进行了组特异性扩增并对扩增产物进行了Ｍ１３克隆和测序。发现它们第二外显子为６７位氨基酸编码的密码子由ＤＲＢ１... 对一组彝族样本的寡核苷酸分型中发现的９个与ＤＲＢ１１５０１反应格局基本相似，但有差异的ＤＲ１５（２）阳性细胞进行了组特异性扩增并对扩增产物进行了Ｍ１３克隆和测序。发现它们第二外显子为６７位氨基酸编码的密码子由ＤＲＢ１１５０１的ＡＴＣ（为异亮氨酸编码）转换成为苯丙氨酸编码的ＴＴＣ。它是与所有已发表的ＤＲ２组的等位基因不同的一个新的等位基因，我们暂称之为ＤＲＢ１１５Ｙ１。 展开更多
关键词 寡核苷酸分型 人白细胞抗原 聚合酶链反应
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重组人骨形成蛋白2在皮肤成纤维细胞中的表达 被引量：1
2
作者 王英 邹嫣琼 +3 位作者 仓辉 李慧 汤雪明 易静 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2003年第6期508-511,共4页
目的构建人骨形成蛋白2(BMP2)的真核表达载体以探讨成纤维细胞表达BMP2的情况。 方法构建携带人BMP2基因的真核表达载体pRK5-hBMP2,并将其转染CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞后,采用RT-PCR方法检测人BMP2在mRNA水平上的表达... 目的构建人骨形成蛋白2(BMP2)的真核表达载体以探讨成纤维细胞表达BMP2的情况。 方法构建携带人BMP2基因的真核表达载体pRK5-hBMP2,并将其转染CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞后,采用RT-PCR方法检测人BMP2在mRNA水平上的表达。 结果RT-PCR显示转染后的CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞可以有效地转录BMP2 mRNA。 结论含有人BMP2 cDNA的重组质粒pRK5-hBMP2转染正常人皮肤成纤维细胞后可以有效地表达BMP2。 展开更多
关键词 重组人骨形成蛋白2 皮肤 成纤维细胞 表达 RT-PCR
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我国彝族另一新的DR15(2)等位基因的核苷酸序列分析
3
作者 蒋伟宏 邹嫣琼 +3 位作者 林标扬 陆嫣 费虹明 陈仁彪 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期156-157,共2页
目的对在用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法作我国彝族群体样本ＨＬＡＤ区寡核苷酸分型中发现的１例ＤＲＢ１的杂合子进行等位基因序列分析。方法用ＤＲＢ基因类引物扩增该特殊的ＤＲＢ１杂合子细胞基因组的ＤＲＢ基因的第二外显子。扩增产物经纯化... 目的对在用ＰＣＲ／ＳＳＯ方法作我国彝族群体样本ＨＬＡＤ区寡核苷酸分型中发现的１例ＤＲＢ１的杂合子进行等位基因序列分析。方法用ＤＲＢ基因类引物扩增该特殊的ＤＲＢ１杂合子细胞基因组的ＤＲＢ基因的第二外显子。扩增产物经纯化转染大肠杆菌ＪＭ１０１，克隆后再经酚／氯仿抽提后得到单链Ｍ１３ＤＮＡ。利用ＡＢＩ３７７测序仪自动测序。结果彝族这一特殊的ＤＲＢ１杂合子细胞的ＤＲＢ１基因阳性克隆，经序列分析证实了该ＤＲＢ１杂合子中一个等位基因确为ＤＲＢ１＊１２０２，与ＰＣＲ／ＳＳＯ分型一致；另一个新等位基因ＤＲＢ１＊１５Ｙ２（暂定）等位基因在第二外显子的４７位由编码苯丙氨酸的ＴＴＣ（ＤＲＢ１＊１５０２）变为编码酪氨酸的ＴＡＣ。结论在云南彝族样本中发现的ＤＲＢ１＊１５Ｙ２，其４７位由ＴＡＣ（酪氨酸）置换了相应于ＤＲＢ１＊１５０２的ＴＴＣ（苯丙氨酸）。在我国这样一个多民族国家中，就ＨＬＡ系统而言，可能还有更多新等位基因有待鉴定。 展开更多
关键词 HLA抗原 聚合酶链反应 彝族 碱基序列
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RIG-Ⅰ与干扰素信号通路的关系 被引量：1
4
作者 孙岳平 肖家祁 +1 位作者 邹嫣琼 王铸钢 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1210-1214,共5页
目的研究干扰素(IFNs)对维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)的调控作用,同时探讨RIG-Ⅰ对IFNs生物学效应的介导作用。方法Northern杂交和半定量RT-PCR检测小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)、在IFNs作用前后RIG-Ⅰ基因的表达。MTT比色法和细胞病变抑制... 目的研究干扰素(IFNs)对维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)的调控作用,同时探讨RIG-Ⅰ对IFNs生物学效应的介导作用。方法Northern杂交和半定量RT-PCR检测小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)、在IFNs作用前后RIG-Ⅰ基因的表达。MTT比色法和细胞病变抑制法比较野生型和RIG-基因剔除(RIG-Ⅰ-/-)小鼠的MEFs在IFNs作用前后的生长情况和抗病毒活性。结果IFN-γ、IFN-β均能上调小鼠MEFs中RIG-Ⅰ的表达;100 U/mL IFN-γ处理后,野生型小鼠MEFs的生长抑制较RIG-Ⅰ-/-小鼠的MEFs明显;RIG-Ⅰ缺失后,IFN-β对细胞病毒感染的保护作用较野生型明显减弱。结论RIG-Ⅰ是一新发现的介导干扰素细胞效应的基因,它可能通过调节细胞因子的产生参与干扰素介导的炎症反应。 展开更多
关键词 维甲酸诱导Ⅰ型基因 干扰素 炎症反应
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重组Nox1在NIH3T3细胞中的表达及其对活性氧的影响 被引量：1
5
作者 仓辉 邹嫣琼 +4 位作者 杨洁 王毓美 王英 史桂英 易静 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期471-474,共4页
目的构建Nox1的真核表达载体,探讨其在NIH3T3细胞中表达后对活性氧水平和药物细胞毒易感性的影响。方法构建携带Nox1基因的真核表达载体pcDNA3-Nox1,并将其转染NIH3T3细胞,采用RT-PCR方法检测Nox1在mRNA水平上的表达,检测细胞活性氧和... 目的构建Nox1的真核表达载体,探讨其在NIH3T3细胞中表达后对活性氧水平和药物细胞毒易感性的影响。方法构建携带Nox1基因的真核表达载体pcDNA3-Nox1,并将其转染NIH3T3细胞,采用RT-PCR方法检测Nox1在mRNA水平上的表达,检测细胞活性氧和细胞活力。结果RT-PCR显示转染后的NIH3T3细胞可以有效地转录Nox1mRNA,细胞中的活性氧水平明显升高,同时对As2O3细胞毒作用更加敏感。结论含有Nox1cDNA的重组质粒pcDNA3-Nox1转染细胞后可有效表达Nox1,使活性氧水平升高,并因此增加细胞对药物细胞毒的敏感性。 展开更多
关键词 NIH3T3细胞 活性氧 表达及 RT-PCR方法 真核表达载体 MRNA水平 细胞毒作用 AS2O3 细胞活力 转染细胞 重组质粒 cDNA 易感性 1基因 Nox 敏感性 药物 检测 升高
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含EGFP的人BMP2表达载体在人皮肤成纤维细胞中的表达
6
作者 邹嫣琼 王英 +3 位作者 陈玉英 胡庆沈 李慧 易静 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第12期1007-1010,共4页
目的构建带加强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因的人骨形成蛋白 2 (hBMP2 )真核表达载体 ,观察其在正常人皮肤成纤维细胞中的表达情况。方法构建携带hBMP2和EGFP基因的真核表达载体 pcDNA3 hBMP2 IRES EGFP(pcBE) ,将其转染NIH3T3细胞和正... 目的构建带加强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因的人骨形成蛋白 2 (hBMP2 )真核表达载体 ,观察其在正常人皮肤成纤维细胞中的表达情况。方法构建携带hBMP2和EGFP基因的真核表达载体 pcDNA3 hBMP2 IRES EGFP(pcBE) ,将其转染NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞后 ,采用RT PCR和免疫组化染色方法分别检测人BMP2和EGFP基因在mRNA和蛋白质水平上的表达情况。结果转染后的NIH3T3和正常人皮肤成纤维细胞均能转录人BMP2mRNA和表达人BMP2蛋白 ,同时显示绿色荧光。结论 pcBE真核表达载体可在正常人皮肤成纤维细胞内有效表达人BMP2蛋白 ,并以其荧光报告基因起示踪作用。 展开更多
关键词 BMP2 人皮肤成纤维细胞 正常人 真核表达载体 EGFP基因 转染 绿色荧光蛋白 RNA 转录 报告基因
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细胞特异性的非病毒载体增强BMP-2在成纤维细胞中表达
7
作者 王茸影 邹嫣琼 +1 位作者 朱振安 易静 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期466-469,共4页
目的构建含有胶原蛋白1A2启动子和增强子的人皮肤成纤维细胞(HDFs)特异的非病毒骨形成蛋白-2(BMP-2)表达载体pcDNA3-CEP-BMP-2,验证其是否增强BMP-2特异性在HDFs表达并增强成骨诱导作用,从而探索非病毒载体介导正常细胞的基因修饰用于... 目的构建含有胶原蛋白1A2启动子和增强子的人皮肤成纤维细胞(HDFs)特异的非病毒骨形成蛋白-2(BMP-2)表达载体pcDNA3-CEP-BMP-2,验证其是否增强BMP-2特异性在HDFs表达并增强成骨诱导作用,从而探索非病毒载体介导正常细胞的基因修饰用于骨修复的可能性。方法将胶原蛋白增强子、启动子及BMP-2基因导入pcDNA3质粒中,用脂质体法转入HDFs,将血管内皮细胞(VEC)作为对照,RT-PCR检测BMP-2基因在两种细胞中的表达差异,并检测转染后HDFs体外成骨表型。结果转染pcDNA3-CEP-BMP-2在HDFs造成BMP-2表达高于pcDNA3-BMP-2,而在VEC的BMP-2表达不增高。转染了pcDNA3-CEP-BMP-2的HDFs骨钙素的分泌和矿化能力高于pcDNA3-BMP-2。结论胶原蛋白1A2启动子和增强子能特异性地增强BMP-2基因在HDFs中的表达。 展开更多
关键词 细胞特异 成纤维细胞 骨形成蛋白-2 胶原蛋白 启动子 增强子 基因治疗
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消除小鼠肝脏冰冻切片自发荧光4种封闭方法的比较 被引量：1
8
作者 刘晓宁 邹嫣琼 +3 位作者 袁继行 李贵苹 杭勤 黄莹 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期871-875,共5页
目的通过对小鼠肝脏冰冻切片进行不同的封闭处理,探寻消除小鼠肝脏自发荧光的最佳方法,以降低对免疫荧光阳性信号的干扰,提高免疫荧光结果的准确性。方法(1)经脾静脉注射肝脏荷瘤裸小鼠:将Hepa1-6-GFP细胞通过脾脏注射方法使其在雄性无... 目的通过对小鼠肝脏冰冻切片进行不同的封闭处理,探寻消除小鼠肝脏自发荧光的最佳方法,以降低对免疫荧光阳性信号的干扰,提高免疫荧光结果的准确性。方法(1)经脾静脉注射肝脏荷瘤裸小鼠:将Hepa1-6-GFP细胞通过脾脏注射方法使其在雄性无胸腺BALB/c裸小鼠肝脏定植,并将肝脏进行冰冻连续切片,对切片分别进行AB液(内源性生物素封闭液)、blocking、AB液+blocking、丙酮+AB液+blocking封闭处理,然后检测小鼠肝脏冰冻切片自发荧光。(2)C57BL/6小鼠:对C57BL/6小鼠肝脏进行冰冻连续切片,对切片分别进行上述4种封闭处理,用F4/80标记肝巨噬细胞(Kupffer细胞),然后检测小鼠肝脏冰冻切片自发荧光。结果肝脏组织冰冻切片免疫荧光染色时,4种封闭处理都可以减弱肝脏切片的自发荧光,但丙酮+AB液+blocking封闭处理效果最佳。结论丙酮+AB液+blocking联合应用对小鼠肝脏组织冰冻切片自发荧光的消除效果最好。 展开更多
关键词 小鼠 肝 冰冻切片 自发荧光 免疫荧光技术
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小泛素样修饰物蛋白酶3调控小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬
9
作者 朱慧琴 邹嫣琼 +2 位作者 杨洁 易静 杨洁 《实验动物与比较医学》 CAS 2020年第4期270-278,共9页
目的探讨小泛素样修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)特异性蛋白酶3(SUMO-specific protease 3,SENP3)对小鼠肺组织细胞自噬的调控作用及分子机制。方法应用免疫荧光技术检测SENP3在肺组织细胞中的定位;对SENP3基因野生型C57BL... 目的探讨小泛素样修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)特异性蛋白酶3(SUMO-specific protease 3,SENP3)对小鼠肺组织细胞自噬的调控作用及分子机制。方法应用免疫荧光技术检测SENP3在肺组织细胞中的定位;对SENP3基因野生型C57BL/6J小鼠(SENP3^+/+)和SENP3基因敲除杂合子小鼠(SENP3^+/-)进行饥饿处理,诱导细胞自噬;应用免疫印迹法评估细胞自噬水平;应用电子显微镜观察和免疫荧光技术分析发生自噬的细胞类型;应用免疫共沉淀方法检测自噬相关分子卷曲螺旋状Myosin样Bcl-2相互作用蛋白1(coiled-coil myosin-like Bcl-2-interacting protein 1,BECN1)的SUMO化修饰。结果 SENP3在肺泡Ⅱ型上皮细胞中高表达。小鼠经饥饿处理后,肺泡Ⅱ型上皮细胞出现自噬现象,且SENP3^+/-小鼠较SENP3^+/+小鼠更明显。同时,肺组织样品中BECN1的SUMO2/3化修饰被SENP3去除。结论 SENP3抑制饥饿应激时小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的自噬,并可对细胞自噬程度进行精细调控。 展开更多
关键词 小泛素样修饰物蛋白酶3 自噬 肺泡Ⅱ型上皮细胞 小鼠
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