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利用转基因小鼠筛选全人源炭疽致死因子中和抗体 被引量：2
1
作者 王潇霖 迟象阳 +10 位作者 刘炬 刘威岑 刘树玲 邱顺芳 温中华 范鹏飞 刘坤 宋小红 付玲 张军 于长明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1590-1599,共10页
炭疽是由炭疽芽孢杆菌引起的严重威胁人类健康的传染病。炭疽毒素包括3种蛋白质成分:保护性抗原(PA)、致死因子(LF)和水肿因子(EF)。PA与LF形成致死毒素(LT),与EF形成水肿毒素(ET)。由于致死毒素(LT)在感染者损伤及死亡中发挥主要作用,... 炭疽是由炭疽芽孢杆菌引起的严重威胁人类健康的传染病。炭疽毒素包括3种蛋白质成分:保护性抗原(PA)、致死因子(LF)和水肿因子(EF)。PA与LF形成致死毒素(LT),与EF形成水肿毒素(ET)。由于致死毒素(LT)在感染者损伤及死亡中发挥主要作用,因此在炭疽感染晚期单纯使用抗生素治疗难以发挥疗效,治疗性中和抗体成为目前最有效的炭疽治疗药物。目前国外获得的炭疽毒素抗体多为炭疽PA抗体,美国FDA已批准瑞西巴库(人源PA单抗)用于吸入性炭疽的治疗。一旦炭疽芽孢杆菌被人为改构或PA中和表位发生突变,针对PA单一表位的抗体将可能失效,因此针对LF的抗体将成为炭疽治疗的有效补充。目前国外已有的LF抗体多为鼠源抗体和嵌合抗体,而全人源抗体可以避免鼠源抗体免疫原性高等缺点。本研究首先用LF抗原免疫人抗体转基因小鼠,利用流式细胞仪从小鼠脾淋巴细胞中分选抗原特异的记忆B细胞,通过单细胞PCR方法快速获得两株具有结合活性的抗LF单抗1D7和2B9。瞬时转染Expi 293F细胞制备抗体,通过毒素中和实验(TNA)发现1D7和2B9在细胞模型中均显示较好的中和活性,并且与PA单抗联合使用时,表现出较好的协同作用。总之,本文利用转基因小鼠、流式分选技术和单细胞PCR技术的优势,快速筛选到全人源LF抗体,为快速筛选全人源单克隆抗体开辟了新的思路与方法。 展开更多
关键词 炭疽致死因子 转基因小鼠 流式分选 记忆B细胞 单细胞PCR 全人源单克隆抗体
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CAR-T细胞制备过程中磁珠法激活T细胞条件的优化 被引量：1
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作者 张章 邱顺芳 +5 位作者 王潇霖 丁乾 王晶 于长明 徐俊杰 张晓鹏 《生物技术通讯》 CAS 2018年第6期789-795,共7页
目的:研究CAR-T细胞制备过程中,磁珠法体外激活人类原代T细胞的最佳条件。方法:新鲜分离的人外周血单个核细胞(PBMCs)与anti-CD3/CD28抗体包被的Dynabeads磁珠按3种不同的比例,于22℃混合孵育30 min,以激活T细胞。随后,通过细胞自动计数... 目的:研究CAR-T细胞制备过程中,磁珠法体外激活人类原代T细胞的最佳条件。方法:新鲜分离的人外周血单个核细胞(PBMCs)与anti-CD3/CD28抗体包被的Dynabeads磁珠按3种不同的比例,于22℃混合孵育30 min,以激活T细胞。随后,通过细胞自动计数,检测不同激活条件对细胞活力和直径的影响;利用流式细胞术检测CD3^+T细胞所占比例;连续监测并绘制T细胞生长曲线,分析激活条件对T细胞增殖速度的影响。结果:以3种激活条件处理的细胞,在激活早期,细胞活力随着磁珠数的增加而降低;流式细胞术检测结果表明,随着磁珠数的降低,CD3^+T细胞所占比例呈上升趋势。然而,只有当PBMCs数与磁珠数比例为1∶1时,T细胞的生长速度最快,在第15 d时可扩增50倍。结论:T细胞激活条件对细胞活力及增殖有重要影响,PBMCs数与磁珠数比例为1∶1有利于T细胞快速扩增,这对在较短时间内获得足够的T细胞,缩短整个CAR-T细胞制备周期具有较重要的意义。 展开更多
关键词 CAR-T细胞 CD3 CD28 细胞激活 细胞增殖
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