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融合表达载体pET22b-SUMO-FGFR4的构建及其在大肠杆菌中表达条件的优化 被引量：5
1
作者 刘微 姚杨 +4 位作者 马萧萧 邓裕宣 梅迪 刘磊 王会岩 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期642-647,共6页
目的:设计合成小泛素修饰物-成纤维细胞生长因子受体4(SUMO-FGFR4)基因,构建pET22bSUMO-FGFR4表达载体,并对其表达条件进行优化。方法:采用Overlap PCR方法制备SUMO-FGFR4融合基因,并连接到原核表达载体pET22b中,获得pET22b-SUMO-FGFR4... 目的:设计合成小泛素修饰物-成纤维细胞生长因子受体4(SUMO-FGFR4)基因,构建pET22bSUMO-FGFR4表达载体,并对其表达条件进行优化。方法:采用Overlap PCR方法制备SUMO-FGFR4融合基因,并连接到原核表达载体pET22b中,获得pET22b-SUMO-FGFR4重组表达载体。以乳糖为诱导剂,观察乳糖浓度、诱导时机、诱导温度、诱导时间和乳糖的添加方式等因素对SUMO-FGFR4蛋白表达量的影响,确定最佳诱导条件,并进行重组蛋白的可溶性分析。结果:pET22b-SUMO-FGFR4表达的融合蛋白在相对分子质量40 000处显示目标条带,并与FGFR4抗体特异性结合。融合蛋白在乳糖终浓度为1.0g·L-1、诱导时间为3h、诱导时机A(600)值为0.8、诱导温度为37℃时表达量最高,乳糖的添加方式对SUMO-FGFR4融合蛋白的表达量无明显影响。乳糖作为诱导剂比传统诱导剂IPTG诱导SUMO-FGFR4融合蛋白的表达量高7.5%,融合蛋白以包涵体形式为主。结论:以乳糖作为诱导剂,成功表达了SUMO-FGFR4融合蛋白,确定了融合蛋白的最佳表达条件。 展开更多
关键词 小泛素相关修饰物 成纤维细胞生长因子受体4 重组融合蛋白类
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