低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)浓度极化可能是动脉粥样硬化局灶性的重要原因,本文以狭窄血管远心端为研究对象,探讨LDL浓度极化对动脉粥样硬化发生、发展的影响。用数值计算模拟狭窄血管远心端LDL的壁面浓度分布,用激光扫...低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)浓度极化可能是动脉粥样硬化局灶性的重要原因,本文以狭窄血管远心端为研究对象,探讨LDL浓度极化对动脉粥样硬化发生、发展的影响。用数值计算模拟狭窄血管远心端LDL的壁面浓度分布,用激光扫描共聚焦显微镜测定狭窄血管远心端LDL沿z轴的浓度分布;用外科手术方法建立颈总动脉局部狭窄的实验模型,从整体动物水平观察LDL浓度极化对动脉粥样硬化形成的影响。数值计算和激光扫描共聚焦显微镜测定的结果表明,狭窄血管远心端存在显著的LDL浓度极化现象,且LDL壁面浓度与入口液流速度和狭窄程度有关:在相同的速率下,LDL壁面浓度在狭窄度为40%的圆管内最大;在狭窄程度相同的情况下,雷诺数(Re)为250时测得的LDL壁面浓度高于Re为500时测得的壁面浓度。整体动物实验表明,在狭窄血管远心端LDL浓度极化显著的区域形成明显的动脉粥样硬化病变,并且有大量的脂质沉积。以上结果提示,LDL浓度极化可能是导致动脉粥样硬化局灶性的重要因素。展开更多
目的探讨棕榈酰化修饰调节非受体酪氨酸激酶Fyn活性的分子机制。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时检测细胞中的Fyn活性,并结合棕榈酰化位点缺失和共转染蛋白质酪氨酸激酶(C-terminal Src...目的探讨棕榈酰化修饰调节非受体酪氨酸激酶Fyn活性的分子机制。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时检测细胞中的Fyn活性,并结合棕榈酰化位点缺失和共转染蛋白质酪氨酸激酶(C-terminal Src kinase,CSK)表达质粒研究其分子机制。结果实验发现,(C3,C6)任一位点的棕榈酰化缺失能引起Fyn的高活性表达,且C6位点影响更显著。已知CSK激活后发生膜转移,FRET检测证实其对细胞中的Fyn活性有下调作用,但不能有效调控(C3,C6)棕榈酰化位点缺失的Fyn(GSS)活性。结论本文结果初步支持了Fyn活性受细胞内的物理空间定位分布的一种调控机制假设,即棕榈酰化缺失的Fyn(GSS)受细胞膜上CSK抑制性的调节作用被减弱,从而促进了组成性的高活性表达。展开更多
Ras同源家族成员A(ras homologous family member A,RhoA)被认为是治疗哮喘的新靶点之一,为探究RhoA在哮喘中的生理机制,本研究利用荧光共振能量转移探针技术实时监测细胞内RhoA活性,发现在血小板衍生生长因子(platelet-derived growth ...Ras同源家族成员A(ras homologous family member A,RhoA)被认为是治疗哮喘的新靶点之一,为探究RhoA在哮喘中的生理机制,本研究利用荧光共振能量转移探针技术实时监测细胞内RhoA活性,发现在血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)的刺激下,气道平滑肌(airway smooth muscle,ASM)细胞中的RhoA信号呈下降趋势。考虑到Rac和RhoA活性存在拮抗效应,本研究进一步抑制细胞中的Rac信号,以及通过转染Vav2激活Rac后,RhoA的下降趋势未受到明显影响;抑制或激活细胞中Cdc42也呈现出类似结果。研究结果表明,PDGF可促进RhoA活性的下调,其不直接受Rac或Cdc42的影响,具体的分子机制仍有待进一步探索。展开更多
目的探索Jurkat T细胞中胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)活性动力学以及基质刚度对ERK活性的影响。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时观测Jurkat细胞中ER...目的探索Jurkat T细胞中胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)活性动力学以及基质刚度对ERK活性的影响。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时观测Jurkat细胞中ERK活性的变化,或细胞处于I型胶原基质胶中检测其影响。结果部分Jurkat细胞中存在ERK活性脉冲现象,频率约为3次/h,FRET振幅变化约为20%。在抗体激活T细胞抗原受体(T-cell receptor,TCR)的条件下,ERK脉冲依然存在,频率和振幅无显著变化。当细胞处于I型胶原水凝胶中,随着胶基质刚度增加,脉冲频率有所下调。结论Jurkat T细胞中存在自发的ERK活性脉冲现象,初步实验显示其频率受基质刚度影响。而该信号波动的生理意义和分子机制仍有待探索。展开更多
基金This work was supported by the Key Project of Science and Technology of Ministry of EducationChina(No.1041580)+1 种基金the Science and Technology Program of Education Commission of Chongqing Municipality(No.030001)the National"111 Plan"of China(No.B06023)
文摘低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)浓度极化可能是动脉粥样硬化局灶性的重要原因,本文以狭窄血管远心端为研究对象,探讨LDL浓度极化对动脉粥样硬化发生、发展的影响。用数值计算模拟狭窄血管远心端LDL的壁面浓度分布,用激光扫描共聚焦显微镜测定狭窄血管远心端LDL沿z轴的浓度分布;用外科手术方法建立颈总动脉局部狭窄的实验模型,从整体动物水平观察LDL浓度极化对动脉粥样硬化形成的影响。数值计算和激光扫描共聚焦显微镜测定的结果表明,狭窄血管远心端存在显著的LDL浓度极化现象,且LDL壁面浓度与入口液流速度和狭窄程度有关:在相同的速率下,LDL壁面浓度在狭窄度为40%的圆管内最大;在狭窄程度相同的情况下,雷诺数(Re)为250时测得的LDL壁面浓度高于Re为500时测得的壁面浓度。整体动物实验表明,在狭窄血管远心端LDL浓度极化显著的区域形成明显的动脉粥样硬化病变,并且有大量的脂质沉积。以上结果提示,LDL浓度极化可能是导致动脉粥样硬化局灶性的重要因素。
文摘Ras同源家族成员A(ras homologous family member A,RhoA)被认为是治疗哮喘的新靶点之一,为探究RhoA在哮喘中的生理机制,本研究利用荧光共振能量转移探针技术实时监测细胞内RhoA活性,发现在血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)的刺激下,气道平滑肌(airway smooth muscle,ASM)细胞中的RhoA信号呈下降趋势。考虑到Rac和RhoA活性存在拮抗效应,本研究进一步抑制细胞中的Rac信号,以及通过转染Vav2激活Rac后,RhoA的下降趋势未受到明显影响;抑制或激活细胞中Cdc42也呈现出类似结果。研究结果表明,PDGF可促进RhoA活性的下调,其不直接受Rac或Cdc42的影响,具体的分子机制仍有待进一步探索。
文摘目的探索Jurkat T细胞中胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)活性动力学以及基质刚度对ERK活性的影响。方法利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术实时观测Jurkat细胞中ERK活性的变化,或细胞处于I型胶原基质胶中检测其影响。结果部分Jurkat细胞中存在ERK活性脉冲现象,频率约为3次/h,FRET振幅变化约为20%。在抗体激活T细胞抗原受体(T-cell receptor,TCR)的条件下,ERK脉冲依然存在,频率和振幅无显著变化。当细胞处于I型胶原水凝胶中,随着胶基质刚度增加,脉冲频率有所下调。结论Jurkat T细胞中存在自发的ERK活性脉冲现象,初步实验显示其频率受基质刚度影响。而该信号波动的生理意义和分子机制仍有待探索。
