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一种带增强子的原核高效表达载体的构建及初步应用 被引量:34
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作者 罗文新 张军 +5 位作者 杨海杰 李少伟 谢小燕 李少菁 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期578-581,共4页
构建的 pTO T7大肠杆菌高效融合表达载体 ,调控序列中有一个Ω序列和一个T7启动子串联 ;多克隆位点 (MCS)包括 8个常用酶切位点 ;可进行融合表达或者非融合表达 ,根据不同的需要加以选择 ;融合蛋白N端为T7g10的 12个起始氨基酸 ,C端为Hi... 构建的 pTO T7大肠杆菌高效融合表达载体 ,调控序列中有一个Ω序列和一个T7启动子串联 ;多克隆位点 (MCS)包括 8个常用酶切位点 ;可进行融合表达或者非融合表达 ,根据不同的需要加以选择 ;融合蛋白N端为T7g10的 12个起始氨基酸 ,C端为His标签 ;含kan抗性基因作为选择标记。将增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因克隆至 pTO T7载体 ,在E .coli中的表达结果表明 ,融合EGFP达到菌体总蛋白量的 5 0 %以上 ,90 %以上的融合蛋白以可溶性形式存在 ,融合后的EGFP仍保持原有的荧光性质。与同时构建的不含Ω序列的 pT T7载体的表达产量的比较研究结果表明 ,Ω序列在 pTO T7载体中能显著提高表达效率。 展开更多
关键词 增强子 原核细胞 表达载体 PTO-T7 Ω序列
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大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2多肽对恒河猴的免疫保护研究 被引量:22
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作者 葛胜祥 张军 +3 位作者 黄果勇 周开姣 夏宁邵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期35-42,共8页
在大肠杆菌中表达的一段戊型肝炎病毒 (HEV)结构蛋白NE2 ,纯化后以弗氏佐剂 ,按0d ,1 0d ,30d的方案 1 0 μg 针的剂量免疫 3只恒河猴 ,在第 2周抗体阳转 ,第 6周时 1只滴度达 1∶1 0 0 0 0 0 ,另 2只滴度 1∶2 0 0 0 0 ,此时以 1 0 6PC... 在大肠杆菌中表达的一段戊型肝炎病毒 (HEV)结构蛋白NE2 ,纯化后以弗氏佐剂 ,按0d ,1 0d ,30d的方案 1 0 μg 针的剂量免疫 3只恒河猴 ,在第 2周抗体阳转 ,第 6周时 1只滴度达 1∶1 0 0 0 0 0 ,另 2只滴度 1∶2 0 0 0 0 ,此时以 1 0 6PCR滴度的HEV病毒粪悬液攻击。对照组 3只均出现血清转氨酶 (ALT)升高 ,抗体阳转 ,粪便持续排毒 1月以上 ;疫苗组无一发病 ,未检出非疫苗来源的抗体 ,其中 1只始终未检出粪便排毒 ,另 2只仅出现短暂排毒。以一份NE2免疫后猴血清 (滴度 1∶2 0 0 0 0 )与 1 0 3PCR滴度的病毒混匀后感染 2只恒河猴 ,结果对照组 2只均持续排毒 3周以上 ,抗体阳转 ,1只ALT明显升高 ;而抗体中和组 2只猴始终未检出粪便排毒 ,抗NE2抗体缓慢下降 ,ALT正常。这些结果表明NE2具有良好的免疫原性和免疫保护性 ,有可能成为有效的戊肝疫苗。 展开更多
关键词 大肠杆菌 基因表达 戊型肝炎病毒 ORF2多肽 恒河猴 免疫保护
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大肠杆菌重组颗粒性戊型肝炎疫苗对恒河猴的免疫保护 被引量:7
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作者 张军 李益民 +7 位作者 李少伟 欧山海 黄果勇 何志 葛胜祥 鲜阳凌 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期1-6,共6页
大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2片段HEV 2 39重组蛋白颗粒 ,经铝佐剂吸附后 ,分别以5 μg、1 0 μg和 2 0 μg剂量免疫恒河猴 ,2 8天时以相同剂量加强免疫 1次 ,3周后分别以不同病毒滴度的基因Ⅰ型或基因Ⅳ型HEV静脉攻... 大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2片段HEV 2 39重组蛋白颗粒 ,经铝佐剂吸附后 ,分别以5 μg、1 0 μg和 2 0 μg剂量免疫恒河猴 ,2 8天时以相同剂量加强免疫 1次 ,3周后分别以不同病毒滴度的基因Ⅰ型或基因Ⅳ型HEV静脉攻击。结果 ,加强后 3周 ,3个免疫剂量组猴的抗体几何平均滴度分别为 1∶2 71 75、1∶344 0 9、1∶4 16 0 7,以世界卫生组织参比血清定量 ,则分别为 1 0 98IU/ml,1 35 7IU/ml、1 72 4IU/ml。每个剂量免疫组及对照组各有 3只猴接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被成功感染 ,2只出现肝炎 ;2 0 μg免疫组 3只猴均未被感染 ;1 0 μg和 5 μg免疫组各有 2只猴未被感染 ,另 1只猴出现短暂感染 ,免疫猴均未出现肝炎。 3个剂量免疫组及对照组另外 3只猴 ,接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被感染 ,1只出现肝炎 ;而免疫猴均未被感染 ,也未出现肝炎。 3只 1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染并出现肝炎 ,而免疫组均未出现肝炎 ,有 2只未被感染 ,另 1只被短暂感染。另有 3只 1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染 ,而免疫组均未被感染。这些结果表明 展开更多
关键词 戊型肝炎 疫苗 原核表达 恒河猴 保护率
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福建沿海地区人T淋巴细胞白血病病毒1型膜基因的克隆和系统树分析 被引量:13
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作者 王颖彬 张军 +4 位作者 张国忠 徐颖潇 杨丰 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期193-197,共5页
人T淋巴细胞白血病病毒 1型 (HTLV 1)是最早发现的一种RNA肿瘤病毒。利用HTLV 1基因组长末端重复区 (LTR)或膜基因 (env)序列进行系统树分析 ,可分为C、J、WA、CA和M 5个亚型。为了解我国HTLV 1流行区毒株的主要基因型别 ,从福建莆田地... 人T淋巴细胞白血病病毒 1型 (HTLV 1)是最早发现的一种RNA肿瘤病毒。利用HTLV 1基因组长末端重复区 (LTR)或膜基因 (env)序列进行系统树分析 ,可分为C、J、WA、CA和M 5个亚型。为了解我国HTLV 1流行区毒株的主要基因型别 ,从福建莆田地区克隆出 3株HTLV 1的env基因。其序列与已知各亚型代表株进行系统树分析 ,结果表明均为C亚型。首次证实了中国大陆HTLV 1C亚型的存在。该地区地处福建沿海 ,近几个世纪以来对海外人口迁徙频繁。这一地区HTLV 1C亚型的存在是否与目前全球性C亚型的分布有关 ,值得进一步研究。 展开更多
关键词 人类T淋巴细胞白血病病毒 膜基因 系统树分析
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大型多管水母的绿色荧光蛋白 被引量:4
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作者 罗文新 张军 +5 位作者 杨海杰 谢小燕 覃映雪 李少菁 夏宁邵 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期82-91,共10页
采用PCR扩增和southern杂交筛选相结合的方法 ,从厦门水域的大型多管水母中分离到了新的绿色荧光蛋白基因 gfpxm ,并在大肠杆菌中进行了表达 .gfpxmDNA序列编码区长为 1 0 4 2bp,包含 3个外显子和两个内含子 ,cDNA编码区全长为71 7bp .g... 采用PCR扩增和southern杂交筛选相结合的方法 ,从厦门水域的大型多管水母中分离到了新的绿色荧光蛋白基因 gfpxm ,并在大肠杆菌中进行了表达 .gfpxmDNA序列编码区长为 1 0 4 2bp,包含 3个外显子和两个内含子 ,cDNA编码区全长为71 7bp .gfpxmcDNA与已知野生型Aeqgfp 1 0cDNA长度一致 ,核苷酸同源性为81 9% ,推导的氨基酸序列全长为 2 38个氨基酸 ,与AeqGFP1 0的氨基酸同源性为83 6 % .将 gfpxm克隆至pTO -T7表达载体 ,GFPxm在大肠杆菌BL2 1中的表达量达菌体总蛋白的 50 %左右 .荧光性质和强度分析结果表明 ,GFPxm蛋白的激发峰为 4 76nm ,发射峰为 4 96nm ,荧光量子产率为 1 GFPxm蛋白的荧光很稳定 ,对热、碱性。 展开更多
关键词 大型多管水母 绿色荧光蛋白 克隆表达 荧光性质 海洋生物
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重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白工程菌的高密度培养 被引量:5
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作者 刘如石 何志 +6 位作者 李少伟 杨坤宇 鲜阳凌 张军 李益民 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期450-455,共6页
在 10L发酵罐中对戊型肝炎病毒衣壳蛋白在重组大肠杆菌中表达发酵工艺进行了研究 ,用分批培养方法探讨了不同培养基、培养基中磷酸盐浓度和Mg2 + 浓度等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响 ;用分批补料培养研究了不同的补料工艺对菌体... 在 10L发酵罐中对戊型肝炎病毒衣壳蛋白在重组大肠杆菌中表达发酵工艺进行了研究 ,用分批培养方法探讨了不同培养基、培养基中磷酸盐浓度和Mg2 + 浓度等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响 ;用分批补料培养研究了不同的补料工艺对菌体生长与重组蛋白表达的影响 ,同时对重组菌诱导时期、诱导持续时间以及不同诱导温度表达包含体在尿素溶液中的溶解性进行了研究。结果表明 ,在优化后的培养基中 ,磷酸盐浓度、Mg2 + 浓度分别为 80mmol L与 2 0mmol L时菌体生长与表达效果较好 ;分批补料培养中 ,37℃培养 9h菌体达到对数期中期 (约 4 5OD6 0 0 )为适宜诱导时期 ,加入终浓度为 1 0mmol LIPTG后诱导 5h ,OD6 0 0 达到 80以上 ,重组蛋白表达量达到2 9 74 % ,为最适收获菌体时间 ;37℃表达的包含体 80 %以上溶解在 4mol L的尿素溶液中 ,最终浓度达到 14mg mL ;10L发酵罐中确定的发酵工艺参数在 30L发酵罐中进行了放大培养 ,10L发酵罐中确定的发酵工艺参数在 30L发酵罐上具有可放大性与重复性 ,可以应用于工业生产。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 衣壳蛋白 重组大肠杆菌 高密度培养
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中国HTLV-Ⅰ env基因的克隆及Ⅰ+Ⅱ型嵌合基因的原核表达与抗原活性检测 被引量:4
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作者 张军 王颖彬 +4 位作者 徐颖潇 张国忠 杨海杰 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期38-42,共5页
为尽快研制出国产HTLV抗体诊断试剂 ,首先从福建HTLV流行区 1名HTLV感染者外周血细胞中克隆出HTLV Ⅰ的全长膜基因 (env) ,继而结合文献报道、PSA软件的亲疏水性分析和EPI软件的B细胞表位分析数据 ,选择了gp46中段开始延伸至 gp2 1N端 2... 为尽快研制出国产HTLV抗体诊断试剂 ,首先从福建HTLV流行区 1名HTLV感染者外周血细胞中克隆出HTLV Ⅰ的全长膜基因 (env) ,继而结合文献报道、PSA软件的亲疏水性分析和EPI软件的B细胞表位分析数据 ,选择了gp46中段开始延伸至 gp2 1N端 2 12个氨基酸 (aa185~aa396 )的基因 ,并在 3′端通过 (GlySer) 2 与人工合成的HTLV Ⅱ型的型特异性表位区基因嵌合 ,插入原核表达载体 pRSET ,在 E .coli中得到了高效表达 ,目的蛋白产量约占菌体总蛋白的 30 %。通过Triton X10 0洗涤 ,低浓度尿素逐步变性处理 ,8mol/L尿素溶解后纯度在 75 %左右 ,经电泳洗脱纯化 ,最终纯度可达 95 %左右 ,纯蛋白得率约 40 %。经Westernblotting检测 ,该蛋白对 4份HTLV Ⅰ型和 2份HTLV Ⅱ型血清均有较强反应 ,而对 4份阴性血清无反应 ,从而有可能用于研制HTLV抗体诊断试剂盒。 展开更多
关键词 人类T淋巴细胞白血病病毒 膜基因 原核表达 抗原
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中国药品流通渠道模式分析 被引量:1
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作者 李先国 《市场营销案例》 2007年第2期29-31,共3页
医药企业药品销售模式很多,但可以从两个方面划分为:一是根据实物流及所有权和资金流可以分为买断制销售模式、代理制销售模式、直销制销售模式、经销制销售模式;二是根据促销流和促销队伍活动可以分为广告拉动模式、底价承包销售模... 医药企业药品销售模式很多,但可以从两个方面划分为:一是根据实物流及所有权和资金流可以分为买断制销售模式、代理制销售模式、直销制销售模式、经销制销售模式;二是根据促销流和促销队伍活动可以分为广告拉动模式、底价承包销售模式和专业销售模式。很显然这两种划分出的销售模式在医药企业的药品实际销售活动中是相互交融,相互辅助的。 展开更多
关键词 药品流通 渠道模式 销售模式 中国 医药企业 销售活动 买断制 资金流
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