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沙门氏菌的invA基因序列分析与分子检测 被引量:58
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作者 陈金顶 索青利 +1 位作者 廖明 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期868-871,共4页
目的采用聚合酶链反应和DNA序列分析,了解沙门氏菌侵袭蛋白A(invasionproteinA,invA)基因核苷酸序列有何差异,建立沙门氏菌的分子快速检测方法。方法根据沙门氏菌的invA基因核苷酸序列设计一对引物,应用聚合酶链反应技术,分别对3种沙门... 目的采用聚合酶链反应和DNA序列分析,了解沙门氏菌侵袭蛋白A(invasionproteinA,invA)基因核苷酸序列有何差异,建立沙门氏菌的分子快速检测方法。方法根据沙门氏菌的invA基因核苷酸序列设计一对引物,应用聚合酶链反应技术,分别对3种沙门氏菌标准菌株的invA基因及6种非沙门氏菌株进行PCR扩增,并将扩增的片段进行克隆及序列分析。结果3种沙门氏菌标准菌株PCR均扩增出283bp的特异条带,非沙门氏菌皆无特异带扩增;DNA序列分析证实,沙门氏菌的invA基因核苷酸序列比较保守。结论本研究建立的检测沙门氏菌方法具有较高的特异性与灵敏性,invA基因的序列分析为进一步研究沙门氏菌不同分离株的流行病学、遗传学与分子致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 沙门氏菌 invA基因 DNA序列分析 分子检测
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PCR制备地高辛标记的探针检测禽流感病毒核酸 被引量:37
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作者 黄庚明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第12期3-7,共5页
用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,制备了广东禽流感无致病力分离株 A/goose/China/2 4/96 (H7N3 )核蛋白基因片段(NPc)的地高辛标记的 c DNA探针。建立并优化了检测禽流感病毒核酸的探针杂交法 ,探针杂交法能鉴别出非免疫鸡胚和SPF鸡胚尿囊... 用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,制备了广东禽流感无致病力分离株 A/goose/China/2 4/96 (H7N3 )核蛋白基因片段(NPc)的地高辛标记的 c DNA探针。建立并优化了检测禽流感病毒核酸的探针杂交法 ,探针杂交法能鉴别出非免疫鸡胚和SPF鸡胚尿囊液中的病毒 ,攻毒后第 3天的 SPF和非免疫鸡泄殖腔拭子中 AIV的最大检出率为 1/10 ,对临床样品中的 AIV的最大检出率为 1/7,而直接 HA和 HI法及 AGP试验检不出临床样品的 AIV。该探针具有较好的特异性和敏感性 ,为从分子水平探讨 AIV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。 展开更多
关键词 地高辛标记 PCR探针 禽流感病毒 核酸检测 禽流感
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鹅源禽副粘病毒GPMV/QY97-1株的生物学特性 被引量:38
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作者 陈金顶 任涛 +1 位作者 廖明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期128-131,共4页
对新近分离到的鹅源禽副粘病毒 GPMV/QY97-1株的生物学特性进行了研究。结果表明 ,该病毒粒子在电镜下呈球形 ,直径 1 2 1~ 2 50 nm,表面有纤突 ,能凝集鸡的红细胞 ,血凝反应能被 I型禽副粘病毒阳性血清所抑制 ,由此初步判定该病毒属... 对新近分离到的鹅源禽副粘病毒 GPMV/QY97-1株的生物学特性进行了研究。结果表明 ,该病毒粒子在电镜下呈球形 ,直径 1 2 1~ 2 50 nm,表面有纤突 ,能凝集鸡的红细胞 ,血凝反应能被 I型禽副粘病毒阳性血清所抑制 ,由此初步判定该病毒属于 I型禽副粘病毒。该病毒人工感染 1、1 4、2 8、4 8日龄的鹅 ,发病率均为1 0 0 %,致死率分别为 1 0 0 %、87.5%、62 .5%、1 2 .5%;人工感染 2 5日龄的鸡 ,发病率和致死率均为 1 0 0 %; 展开更多
关键词 禽副粘病毒 生物学特性 HA试验 HI试验
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利用PCR检测鸭瘟病毒 被引量:24
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作者 郭霄峰 廖明 +2 位作者 严英华 李剑峰 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期13-16,共4页
参照文献 ,设计和合成了 1对引物。用这对引物 ,以标准毒株DPVF3 4的DNA为模板 ,经PCR扩增出 1个特异的DNA片段。经序列测定 ,该DNA片段由 42 0bp组成。与文献报道的序列比较 ,该片段为鸭瘟病毒UL6基因DNA的一部分 ,与美国毒株LakeAndes... 参照文献 ,设计和合成了 1对引物。用这对引物 ,以标准毒株DPVF3 4的DNA为模板 ,经PCR扩增出 1个特异的DNA片段。经序列测定 ,该DNA片段由 42 0bp组成。与文献报道的序列比较 ,该片段为鸭瘟病毒UL6基因DNA的一部分 ,与美国毒株LakeAndes(LA)的同源性达 99%。用该PCR方法扩增小鹅瘟病毒、细小病毒和禽巴氏杆菌 ,结果为阴性。以该PCR方法检测 6份送检病料 ,5份为阳性 ,检出率与病毒的分离一致。另外 ,该方法检测DPVDNA的敏感性达到了 展开更多
关键词 检测 鸭温病毒 PCR 序列测定
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鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的表达 被引量:17
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作者 廖明 王林川 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期539-543,共5页
将含有传染性支气管炎病毒(IBV)广东地方分离株D41的S1基因cDNA(从ATG到S前体蛋白裂解位点)的片段克隆到具有多角体启动子(PXIV)和人工合成启动子(Psyn)的杆状病毒转移载体质粒pSX-IVVI+X3... 将含有传染性支气管炎病毒(IBV)广东地方分离株D41的S1基因cDNA(从ATG到S前体蛋白裂解位点)的片段克隆到具有多角体启动子(PXIV)和人工合成启动子(Psyn)的杆状病毒转移载体质粒pSX-IVVI+X3中,构建了重组转基因载体质粒pSXIVVI+X3-S1.D41。用该重组转移质粒与无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒TnNPV-SVI-GDNA(occ-,gal+)共转染草地夜蛾(Sf9)细胞,筛选并纯化出既能表达S1基因又能形成多角体的重组病毒TnNPV-IBVS1-occ+(occ+,gal-)。通过间接ELISA和Western-blot等方法在感染了重组病毒的Sf9细胞中成功地检测到分子量约62000的S1基因表达产物。虽然该重组S1糖蛋白可能由于N-糖基化不完全而分子量小于天然蛋白,但它可以像正常病毒粒子一样,被鸡抗IBVD41株血清特异识别。 展开更多
关键词 传染性支气管炎 病毒 S1基因 昆虫细胞 表达
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Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量:22
6
作者 马秀丽 宋敏训 +2 位作者 黄兵 廖明 《家禽科学》 2006年第11期11-13,共3页
根据Genebank中I型鸭病毒性肝炎病毒的基因序列,设计合成了2对引物,以山东、江苏、广东、河南等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,均得到预期大小的目的片段,两对引物的检测结果一致。并对其中一种方法的敏感性、特异性进行了检测,结... 根据Genebank中I型鸭病毒性肝炎病毒的基因序列,设计合成了2对引物,以山东、江苏、广东、河南等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,均得到预期大小的目的片段,两对引物的检测结果一致。并对其中一种方法的敏感性、特异性进行了检测,结果表明本试验建立的用于I型鸭病毒性肝炎病毒诊断的RT-PCR方法具有较高的敏感性和特异性,最低RNA模板检出量为100pg,只能特异的检测出I型DHV,不能检出NDV、IBDV、DPV和GPV。因此,所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于鸭病毒性肝炎病毒的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 鸭病毒性肝炎病毒 Ⅰ型 RT—PCR 检测
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禽流感病毒KMI/99(H9N2)HA和NA基因的序列分析 被引量:22
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作者 郭霄峰 廖明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期486-491,共6页
研究分别以自行设计的一对简并引物和另一对普通引物 ,经RT PCR ,一次性成功地扩增禽流感病毒A/Chicken/Guangxi/KMI/99(H9N2 )HA全长基因cDNA和NA全长基因cDNA ,并将它们克隆于 pGEM TEasy的T T窗口。首次报道了该毒株的HA全基因和NA... 研究分别以自行设计的一对简并引物和另一对普通引物 ,经RT PCR ,一次性成功地扩增禽流感病毒A/Chicken/Guangxi/KMI/99(H9N2 )HA全长基因cDNA和NA全长基因cDNA ,并将它们克隆于 pGEM TEasy的T T窗口。首次报道了该毒株的HA全基因和NA全基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列。测序结果显示 ,该毒株的HA基因全长为 16 83bp ,编码 5 6 0个氨基酸。NA全长为 1398bp ,编码 46 6个氨基酸残基。研究发现其HAI羧基端的分子特征是 :R S S R。从分子水平推论 :A/Chicken/Guangxi/KMI/99(H9N2 )属于非高致病力毒株。研究还发现NA蛋白于 6 3— 6 5位缺失了T、E、I三个氨基酸。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 HA基因 NA基因 序列分析
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禽流感油乳剂灭活疫苗的研制 被引量:19
8
作者 罗开健 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第4期6-9,共4页
以禽流感病毒 ( AIV) H5 N4株、H7N3 株为抗原 ,分别研制了 H5 N4、H7N3 油乳剂灭活疫苗 ,并对其物理性状、安全性、免疫效力、保存期及抗体消长规律进行了检测。结果表明 ,3种抗原含量不同的 H5 N4疫苗在免疫后 3周~ 9个月对 AIV- H5... 以禽流感病毒 ( AIV) H5 N4株、H7N3 株为抗原 ,分别研制了 H5 N4、H7N3 油乳剂灭活疫苗 ,并对其物理性状、安全性、免疫效力、保存期及抗体消长规律进行了检测。结果表明 ,3种抗原含量不同的 H5 N4疫苗在免疫后 3周~ 9个月对 AIV- H5 N4攻击均获 8/ 8保护 ,H7N3 疫苗在免疫后 3周与 3个月时对 AIV- H5 N4攻击则分别保护 6 / 8与 3/ 7。疫苗 4℃保存 15个月 ,其免疫效力没有下降。 展开更多
关键词 禽流感病毒 AIV-H5N4 AIV-H7N3 油乳剂灭活疫苗
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H9N2亚型禽流感病毒的致病特性研究 被引量:23
9
作者 郭霄峰 廖明 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期70-72,共3页
将SS、KMI、KMIII3个禽流感病毒的感染性胚液分别接种 2周龄及 5周龄的SPF鸡 ,观察其临床症状及病理变化 .结果显示 :1.3个毒株均可引起攻毒鸡体温升高 ,部分出现水样淡黄色稀粪 ,但不能致死攻毒鸡 .表明 3个毒株均为非高致病力毒株 .2 ... 将SS、KMI、KMIII3个禽流感病毒的感染性胚液分别接种 2周龄及 5周龄的SPF鸡 ,观察其临床症状及病理变化 .结果显示 :1.3个毒株均可引起攻毒鸡体温升高 ,部分出现水样淡黄色稀粪 ,但不能致死攻毒鸡 .表明 3个毒株均为非高致病力毒株 .2 .攻毒鸡除胰腺充血出血外 ,其他器官不见明显的肉眼病理变化 ,但组织病理学的变化较为明显和一致 ,主要为 :脑及脊髓充血出血 ,神经元变性坏死 ,胶质细胞增生 ;心肌充血出血 ,组织变性坏死 ;胰腺充血出血 ,组织坏死 .3个毒株对 5周龄SPF鸡的病理变化无明显差异 ,但KMI毒株对 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 致病力 鸡病
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寒冷应激对鸡的影响(上) 被引量:21
10
作者 任涛 《养禽与禽病防治》 1997年第2期32-33,共2页
关键词 鸡病 应激 寒冷应激
原文传递
鸭肝炎的研究进展 被引量:19
11
作者 司兴奎 +2 位作者 陈建红 顾万军 张济培 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期40-41,共2页
关键词 肝炎 肝炎病毒 流行病学 症状 病理变化 诊断 防制
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鸭瘟病毒北京株UL6和UL7基因的克隆及序列测定 被引量:16
12
作者 郭霄峰 廖明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期615-618,共4页
依据文献报道的鸭瘟病毒 (DPV)的核苷酸序列 ,设计和合成了二对引物 ,分别为SP1和SP2 ,LP1和LP2。北京株鸭瘟病毒于鸭胚中增殖 ,差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化 ,按酚 氯仿法抽提DNA。然后以DPVDNA为模板进行PCR ,分别扩散增出与理论... 依据文献报道的鸭瘟病毒 (DPV)的核苷酸序列 ,设计和合成了二对引物 ,分别为SP1和SP2 ,LP1和LP2。北京株鸭瘟病毒于鸭胚中增殖 ,差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化 ,按酚 氯仿法抽提DNA。然后以DPVDNA为模板进行PCR ,分别扩散增出与理论相符的 42 1bp和 1 2 0 9bp的二个DNA片段 ,并将它们克隆于质粒pGEM TEasy中。经酶切和质粒PCR ,筛选含有目的基因的重组质粒。重组质粒以步移法从双方向测序 ,获 1 586bp的核苷酸序列。研究发现这 1 586bp的核苷酸序列与文献报道的UL6和UL7基因序列的同源性为 99% ,仅有一个碱基的差异。进一步作氨基酸分析 ,发现这个碱基所引起的变异为无意义突变 (CCT→CCC)。结果表明 。 展开更多
关键词 鸭瘟 病毒 北京株 UL6 UL7 分子克隆 基因测序
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鸭病毒性肝炎病毒VP1基因表达及其抗体检测ELISA方法的建立 被引量:21
13
作者 马秀丽 宋敏训 +2 位作者 于可响 廖明 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1110-1114,共5页
【目的】研究DHV VP1基因在大肠杆菌中的表达,并以纯化的重组蛋白为抗原建立鸭病毒性肝炎抗体检测ELISA方法。【方法】采用RT-PCR技术,扩增VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建DHV VP1基因克隆重组质粒。然后定向插入到pET-32a(+)表达载... 【目的】研究DHV VP1基因在大肠杆菌中的表达,并以纯化的重组蛋白为抗原建立鸭病毒性肝炎抗体检测ELISA方法。【方法】采用RT-PCR技术,扩增VP1基因,与pMD18-T载体进行连接,构建DHV VP1基因克隆重组质粒。然后定向插入到pET-32a(+)表达载体,筛选原核表达载体pET-32a-VP1,进行ITPG诱导表达分析。以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法并初步应用于临床。【结果】DHV VP1基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达。Western blot检测表明,表达的重组蛋白能与鸭肝炎阳性血清发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为5μg/孔,血清最佳稀释度为1∶100,临界值为OD450值≥0.302,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。通过对80份血清样品的检测表明,该方法与中和试验的符合率为97.5%,初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。【结论】以大肠杆菌表达的DHV VP1重组蛋白为抗原建立的间接ELISA方法可用于鸭病毒性肝炎抗体的检测。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 VP1基因 表达 ELISA 抗体 检测
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微量血凝抑制试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究 被引量:21
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作者 林雪 《中国兽医科技》 CAS CSCD 1995年第6期8-10,共3页
用A型产气荚膜梭菌(ClostridiumperfringensI)te菌培养液和磷酸酯酶C分别处理的4株传染性支气管炎病毒(IBV)浓缩液,经用微量血凝(HA)试验测定,IBVM,.株血义价较高,H(120)和H_... 用A型产气荚膜梭菌(ClostridiumperfringensI)te菌培养液和磷酸酯酶C分别处理的4株传染性支气管炎病毒(IBV)浓缩液,经用微量血凝(HA)试验测定,IBVM,.株血义价较高,H(120)和H_(120)株血凝价较低,D_(41)无血凝性,而以细菌培养液处理的M_(41)株,其血凝价最高。通过传染性支气管炎(IB)血凝抑制试验(HI)的研究以及对血清样品和卵黄样品的测定,表明所建立的微量HI可用于鸡m血清和卵黄抗体的测定。 展开更多
关键词 传染性 支气管炎 病毒 微量血凝试验 鸡病
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禽流感病毒血凝素(HA)基因的研究进展 被引量:6
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作者 黄庚明 《广东畜牧兽医科技》 2001年第2期3-5,共3页
关键词 禽流感 禽流感病毒 血凝素基因 全基因序列 裂解位点序列 转基因动物 DNA疫苗
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免疫程序与母源抗体对H5禽流感疫苗免疫鸭和鹅HI抗体水平的影响 被引量:21
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作者 张评浒 任涛 +6 位作者 唐应华 薛峰 仇旭升 曹永忠 刘晓文 刘秀梵 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期638-642,共5页
对不同日龄与母源抗体水平的鸭和鹅,用H5亚型禽流感疫苗免疫后,其HI抗体消长情况进行了比较和观察,结果,初生水禽3日龄首免即可对禽流感疫苗(H5亚型)产生良好的免疫应答;雏鹅母源抗体几乎以每4d下降1个HI抗体效价单位的速度消退;母源抗... 对不同日龄与母源抗体水平的鸭和鹅,用H5亚型禽流感疫苗免疫后,其HI抗体消长情况进行了比较和观察,结果,初生水禽3日龄首免即可对禽流感疫苗(H5亚型)产生良好的免疫应答;雏鹅母源抗体几乎以每4d下降1个HI抗体效价单位的速度消退;母源抗体对H5禽流感疫苗免疫后的HI抗体水平存在一定的干扰作用;加强免疫鸭和鹅所产生的H5 HI抗体水平及其维持时间与仅免疫一次的鸭和鹅所产生的抗体水平之间存在显著差异;鸭和鹅免疫H5禽流感疫苗后第25~30d H5 HI抗体水平达到高峰. 展开更多
关键词 禽流感 H5亚型 灭活疫苗 免疫 母源抗体
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鸡传染性支气管炎病毒D_(41)株S1基因序列测定及分析 被引量:17
17
作者 廖明 王林川 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期254-261,共8页
本研究首次报道了IBV广东地方分离株D41S1基因的全序列,并通过限制性内切酶鉴定分析,证明测序结果是准确可靠的。结果表明该基因全长1611bp(从ATG到S前体蛋白裂解位点),编码一条由537个氨基酸组成的多肽,分... 本研究首次报道了IBV广东地方分离株D41S1基因的全序列,并通过限制性内切酶鉴定分析,证明测序结果是准确可靠的。结果表明该基因全长1611bp(从ATG到S前体蛋白裂解位点),编码一条由537个氨基酸组成的多肽,分子量约59KD,其中包括S蛋白的信号肽。 展开更多
关键词 IBV 支气管炎病毒 S1基因 测序 病毒病
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鸭胸腺细胞自然凋亡的电镜观察 被引量:18
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作者 李玉谷 +1 位作者 李楚宣 伦璇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期571-575,共5页
应用透射电镜观察了鸭胸腺细胞自然凋亡的超微结构变化。结果表明 ,胸腺细胞发生凋亡时 ,表现为染色质凝聚、边集 ,细胞核呈现新月形、“C”形、花瓣状、圆环状或圆斑状 ;粗面内质网、线粒体、溶酶体先是大量增生 ,之后粗面内质网包裹... 应用透射电镜观察了鸭胸腺细胞自然凋亡的超微结构变化。结果表明 ,胸腺细胞发生凋亡时 ,表现为染色质凝聚、边集 ,细胞核呈现新月形、“C”形、花瓣状、圆环状或圆斑状 ;粗面内质网、线粒体、溶酶体先是大量增生 ,之后粗面内质网包裹各种细胞成分形成自噬体并与溶酶体融合 ,再逐渐演变成凋亡小体 ;线粒体在凋亡小体内发生肿胀和空泡化 ;最后 ,凋亡细胞及凋亡小体被巨噬细胞吞噬、清除。 展开更多
关键词 细胞凋亡 胸腺细胞 超微结构
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鸡胸腺肥大细胞的超微结构观察 被引量:18
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作者 李玉谷 李楚宣 《中国兽医科技》 CAS CSCD 1999年第6期33-35,共3页
肥大细胞(Mastcel,MC)是重要的免疫细胞,能分泌多种生物活性物质,在速发型变态反应和炎症反应中起重要作用,并可能与抗寄生虫感染、抗肿瘤等有关。我们曾用组化方法在鸡胸腺实质内观察到大量的MC,在此基础上,本试验... 肥大细胞(Mastcel,MC)是重要的免疫细胞,能分泌多种生物活性物质,在速发型变态反应和炎症反应中起重要作用,并可能与抗寄生虫感染、抗肿瘤等有关。我们曾用组化方法在鸡胸腺实质内观察到大量的MC,在此基础上,本试验进一步探讨了鸡胸腺(MC)的超微结... 展开更多
关键词 胸腺 肥大细胞 超微结构
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兽用抗生素对公共卫生的影响 被引量:13
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作者 徐成刚 任涛 +2 位作者 廖明 罗开健 《动物医学进展》 CSCD 2002年第6期45-48,共4页
动物滥用抗生素可以导致体内残留和细菌耐药性的产生 ,残留的抗生素和耐药菌株又可经食物链转移给人类 ,从而危害到人类的健康。本文综述了滥用兽用抗生素对动物和人类的危害并提出控制对策 。
关键词 兽用抗生素 公共卫生 影响 残留 耐药性 危害
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