宿主GAPDH对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响 被引量：5

1

作者 王璐 朱顺海 +6 位作者 赵其平 黄兵 韩红玉 刘桂玲 李志行 赵焕之 董辉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2088-2096,共9页

目前,关于宿主细胞应对球虫感染机制的研究极其有限。在前期研究中,我们利用相对和绝对定量同位素标记技术结合液相色谱串联质谱技术分析了感染柔嫩艾美耳球虫子孢子72 h后鸡胚成纤维(CEF)细胞的蛋白质组表达变化,作者拟进一步研究其中... 目前,关于宿主细胞应对球虫感染机制的研究极其有限。在前期研究中,我们利用相对和绝对定量同位素标记技术结合液相色谱串联质谱技术分析了感染柔嫩艾美耳球虫子孢子72 h后鸡胚成纤维(CEF)细胞的蛋白质组表达变化,作者拟进一步研究其中一个上调蛋白——甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响。克隆鸡GAPDH基因并构建原核重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,表达重组GAPDH蛋白,用Western blot对表达进行验证。使用q-PCR、Western blot和免疫组织化学的方法检测感染柔嫩艾美耳球虫子孢子后DF-1细胞中GAPDH的表达量,并使用抗体抑制试验检测GAPDH多克隆抗体对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响。结果显示:成功克隆1 123 bp的GAPDH基因,并获得61.7 ku的重组GAPDH蛋白。q-PCR和免疫组织化学检测均显示,GAPDH在柔嫩艾美耳球虫子孢子感染的DF-1细胞中的表达显著升高。抗体抑制试验表明,与相同浓度的正常兔IgG相比,50、100、200、300和400μg·mL-1的抗GAPDH抗体均能明显抑制子孢子的入侵。以上结果表明,子孢子感染会引起宿主细胞GAPDH蛋白的上调,并且宿主GAPDH蛋白在子孢子入侵过程中起正调控作用。 展开更多

关键词 球虫病 艾美耳球虫 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 入侵

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柔嫩艾美耳球虫NADP特异性谷氨酸脱氢酶特性分析 被引量：5

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作者 刘桂玲 朱顺海 +6 位作者 赵其平 董辉 黄兵 赵焕之 李志行 王璐 韩红玉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1315-1323,共9页

为了研究柔嫩艾美耳球虫NADP特异性谷氨酸脱氢酶(EtNADP-GDH)的分子特性,对该基因进行了克隆和生物信息学分析,利用间接免疫荧光定位、体外入侵抑制、实时荧光定量PCR、Western-blot和体外酶活性检测等方法分析其生物学特性。结果显示,... 为了研究柔嫩艾美耳球虫NADP特异性谷氨酸脱氢酶(EtNADP-GDH)的分子特性,对该基因进行了克隆和生物信息学分析,利用间接免疫荧光定位、体外入侵抑制、实时荧光定量PCR、Western-blot和体外酶活性检测等方法分析其生物学特性。结果显示,成功获得了EtNADP-GDH基因,该基因编码的蛋白富含包括NAD结合位点在内的多种功能位点。该蛋白主要分布在虫体的表面和细胞质中,抗rENADP-GDH多克隆抗体能抑制子孢子入侵DF-1细胞,抑制率约为45%,表明其参与了虫体入侵宿主细胞。荧光定量PCR结果显示,该基因在未孢子化卵囊阶段的转录水平最高;转录、翻译水平分析发现,与敏感株相比,2个耐药株(地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株)中EtNADP-GDH的转录水平显著提高,而翻译水平无明显差异;酶活性分析结果显示,耐药株和敏感株差异不明显。结果表明,该蛋白可能对虫体在宿主细胞内的生长发育起作用并参与了子孢子入侵宿主细胞的过程。 展开更多

关键词 柔嫩艾美耳球虫 NADP特异性谷氨酸脱氢酶 差异表达 耐药性

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柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白EtRON2_(L2)特性与功能初步分析 被引量：1

3

作者 刘曼玉 朱顺海 +7 位作者 赵其平 贾刘数 肖克 赵焕之 于钰 黄兵 韩红玉 董辉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期1-10,共10页

利用RT-PCR、间接免疫荧光实验、免疫印迹实验、抗体中和实验以及BiFC等方法对柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2同源分子—Et RON2_(L2)的特性和功能进行研究。结果发现Et RON2_(L2)氨基酸序列与常规的Et RON2仅有26.63%的同源性,mRNA水... 利用RT-PCR、间接免疫荧光实验、免疫印迹实验、抗体中和实验以及BiFC等方法对柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2同源分子—Et RON2_(L2)的特性和功能进行研究。结果发现Et RON2_(L2)氨基酸序列与常规的Et RON2仅有26.63%的同源性,mRNA水平在第二代裂殖子中最高,而蛋白水平在第二代裂殖子和子孢子阶段最高;Et RON2_(L2)在游离的第二代裂殖子和子孢子阶段主要分布于胞质,而在入侵后子孢子中主要分布于虫体表面;抗rEt RON2_(L2)多克隆血清处理组明显抑制子孢子入侵细胞;Et RON2_(L2)与EtAMA3之间存在互作关系。本研究为探究Et RON2_(L2)在球虫入侵过程中的作用机制奠定基础。 展开更多

关键词 柔嫩艾美耳球虫 棒状体颈部蛋白2 相互作用

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世界牛球虫种类与地理分布 被引量：5

4

作者 黄兵 董辉 +3 位作者 朱顺海 赵其平 韩红玉 赵焕之 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第6期1-18,共18页

为全面了解牛球虫的种类及在世界各地的分布状况,本文收集整理了世界上有关牛球虫报道的文献,依虫种学名的字母为序,介绍了27种牛球虫,其中25种艾美耳球虫(Eimeria)、2种等孢球虫(Isospora),每种球虫包括中文名称与学名、宿主名称、寄... 为全面了解牛球虫的种类及在世界各地的分布状况,本文收集整理了世界上有关牛球虫报道的文献,依虫种学名的字母为序,介绍了27种牛球虫,其中25种艾美耳球虫(Eimeria)、2种等孢球虫(Isospora),每种球虫包括中文名称与学名、宿主名称、寄生部位、致病性和地理分布,部分种类有同物异名,地理分布则按国家或地区的英文或拼音字母为序。在收录的60个国家中,分布最广的球虫为椭圆艾美耳球虫(52个国家),其次为奥博艾美耳球虫(50个国家),第三为牛艾美耳球虫和邱氏艾美耳球虫(均为48个国家),分布少于10个国家的种类占51.85%。报道球虫种类最多的国家为印度(20种),其次为中国(19种),第三为巴西(16种),报道少于10种球虫的国家占51.67%。本文能反映出牛球虫在世界范围内的基本分布状况,为全面了解牛球虫的种类与地理分布提供了一份较为完整的基础资料。 展开更多

关键词 牛 球虫 种类 世界分布

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免疫共沉淀联合质谱技术筛选柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3互作蛋白 被引量：3

5

作者 赵焕之 赵其平 +6 位作者 朱顺海 王璐 刘桂玲 李志行 董辉 黄兵 韩红玉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第5期1-7,共7页

为探究柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(EtCDPK3)在钙离子信号通路中是如何将信号传递给下游效应分子,进一步促进虫体入侵宿主细胞的机制,以柔嫩艾美耳球虫子孢子蛋白及其单克隆抗体和多克隆抗体为实验材料,利用免疫共沉淀技术筛选EtCDPK... 为探究柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3(EtCDPK3)在钙离子信号通路中是如何将信号传递给下游效应分子,进一步促进虫体入侵宿主细胞的机制,以柔嫩艾美耳球虫子孢子蛋白及其单克隆抗体和多克隆抗体为实验材料,利用免疫共沉淀技术筛选EtCDPK3的互作蛋白并进行质谱鉴定分析,使用Maxquant软件对获得的原始数据进行分析。SDS-PAGE结果显示,与阴性对照组相比,2个样品组出现差异条带;免疫共沉淀洗脱液质谱鉴定分析结果显示,获得6个可能与EtCDPK3相互作用的相关蛋白。以上实验结果为进一步深入研究EtCDPK3在柔嫩艾美耳球虫入侵宿主细胞过程中的作用奠定基础。 展开更多

关键词 柔嫩艾美耳球虫 钙依赖蛋白激酶3 免疫共沉淀 质谱 互作蛋白

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基于iTRAQ技术分析柔嫩艾美耳球虫感染后CEF细胞的差异表达蛋白 被引量：2

6

作者 王璐 朱顺海 +6 位作者 赵其平 黄兵 韩红玉 刘桂玲 李志行 赵焕之 董辉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第5期8-16,共9页

柔嫩艾美耳球虫是一种严格的细胞内专性寄生虫,可主动入侵鸡的盲肠上皮细胞。当受到柔嫩艾美耳球虫感染时,宿主细胞会发生相应的变化以应对感染引起的损伤。迄今为止,对宿主细胞应对球虫感染机制的研究极其有限。本研究利用相对和绝对... 柔嫩艾美耳球虫是一种严格的细胞内专性寄生虫,可主动入侵鸡的盲肠上皮细胞。当受到柔嫩艾美耳球虫感染时,宿主细胞会发生相应的变化以应对感染引起的损伤。迄今为止,对宿主细胞应对球虫感染机制的研究极其有限。本研究利用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)技术结合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术分析了感染柔嫩艾美耳球虫子孢子72 h后原代鸡胚成纤维(CEF)细胞的蛋白质组表达变化,结果共鉴定出3967个非冗余蛋白质,与不感染组相比,感染组有259个蛋白质的表达量发生了明显变化,其中上调蛋白质145个和下调蛋白质114个;GO和KEGG通路分析结果发现,这些差异表达蛋白具有结合活性、催化活性、转运子活性等分子功能,主要参与细胞外基质受体互作、糖酵解/糖异生、粘着斑、氨基酸的生物合成、半胱氨酸和蛋氨酸代谢等通路;qPCR结果发现,8个基因的mRNA转录水平变化与iTRAQ结果一致,2个基因的不一致;Western blot结果发现感染组细胞的FABP4蛋白表达量显著降低,与iTRAQ结果中蛋白表达水平变化相一致。本研究结果为柔嫩艾美耳球虫与宿主之间互作关系的深入研究提供了重要的基础数据。 展开更多

关键词 ITRAQ 球虫 CEF细胞 差异表达蛋白

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马属(Equus)动物球虫种类与世界分布

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作者 黄兵 董辉 +4 位作者 赵其平 韩红玉 朱顺海 赵焕之 于珏 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第2期229-236,共8页

为了解马属(Equus)动物球虫的种类及在世界各地的分布状况,本文收集整理了世界上有关马属动物球虫报道的相关文献,按虫种学名的字母为序,介绍了已报道的4种马属动物球虫,其中艾美耳属(Eimeria)3种、克氏孢子虫属(Klossiella)1种,每种球... 为了解马属(Equus)动物球虫的种类及在世界各地的分布状况,本文收集整理了世界上有关马属动物球虫报道的相关文献,按虫种学名的字母为序,介绍了已报道的4种马属动物球虫,其中艾美耳属(Eimeria)3种、克氏孢子虫属(Klossiella)1种,每种球虫包括中文名称与学名、宿主名称、寄生部位、地理分布,地理分布按照国家和地区的英文或拼音字母为序。在收录的45个国家记录马属动物球虫中,土耳其记录4种,俄罗斯记录3种,澳大利亚等14个国家记录2种,阿尔巴尼亚等29个国家记录1种;有40个国家记录了鲁氏艾美耳球虫(E.leuckarti),16个国家记录了马克氏孢子虫(K.equi),5个国家记录了单蹄兽艾美耳球虫(E.uniungulati),3个国家记录了奇蹄兽艾美耳球虫(E.solipedum)。另外,在秘鲁、伊拉克、斯里兰卡、马其顿、莱索托的马粪便中均检出艾美耳球虫未定种,其感染率为1.63%~54.54%。本文基本能反映出马属动物球虫在世界范围的分布状况,为全面了解马属动物球虫的种类与地理分布提供了一份较为完整的基础资料。 展开更多

关键词 马属 球虫 艾美耳球虫 克氏孢子虫 种类 分布

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柔嫩艾美耳球虫泛素蛋白功能初步研究

8

作者 李志行 朱顺海 +6 位作者 赵其平 韩红玉 王璐 刘桂玲 赵焕之 黄兵 董辉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第1期6-14,共9页

泛素是真核生物中普遍存在的一种小分子蛋白,广泛参与细胞内蛋白质的平衡代谢过程,对维持细胞内环境的稳态具有重要作用。为研究泛素在柔嫩艾美耳球虫中的功能,本研究利用PCR方法克隆了柔嫩艾美耳球虫泛素(Et Ub)基因,将其亚克隆至原核... 泛素是真核生物中普遍存在的一种小分子蛋白,广泛参与细胞内蛋白质的平衡代谢过程,对维持细胞内环境的稳态具有重要作用。为研究泛素在柔嫩艾美耳球虫中的功能,本研究利用PCR方法克隆了柔嫩艾美耳球虫泛素(Et Ub)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET28a(+),转入大肠杆菌BL21,诱导表达制备rEt Ub蛋白,用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔获得多克隆抗体。用qPCR和Western blot方法检测柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段EtUb基因的转录和蛋白质翻译水平。结果显示:EtUb基因在柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中的转录和翻译水平均高于未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子阶段;间接免疫荧光实验显示该蛋白主要分布于子孢子和第二代裂殖子的顶端表面;抗体入侵抑制实验显示兔抗rEt Ub-IgG能明显抑制子孢子入侵BHK细胞,浓度为300μg/mL时,抑制率达到36%;免疫共沉淀实验共筛选出10个与Et Ub潜在互作的虫体蛋白,包括Myosin A、Microneme protein 3等。研究结果为深入研究EtUb基因在球虫中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 柔嫩艾美耳球虫 泛素 入侵 互作蛋白

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狠抓两个转变 确保全县经济适度增长

9

作者 赵焕之 《河南省人民政府公报》 1999年第3期46-47,共2页

１９９９年，经济工作面临的形势并不乐观，受亚洲金融危机影响，外贸出口压力更大、招商引资难度增加，企业经营仍然困难，加上去秋以来持续半年的干旱，直接影响到粮食产量和农民增收。在这样严峻的形势下，必须把工作的着力点放在推... １９９９年，经济工作面临的形势并不乐观，受亚洲金融危机影响，外贸出口压力更大、招商引资难度增加，企业经营仍然困难，加上去秋以来持续半年的干旱，直接影响到粮食产量和农民增收。在这样严峻的形势下，必须把工作的着力点放在推进两个根本性转变上，放在深化改革和... 展开更多

关键词 两个转变 两个根本性转变 县域经济 经济增长方式的转变 农民负担 农业结构调整 乡镇企业 个体私营经济 农副产品加工 财政收入

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治本堵源解矛盾 釜底抽薪抓稳定

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作者 王清华 赵焕之 《河南省人民政府公报》 1999年第6期43-45,共3页

当前，改革进入攻坚阶段，各种利益矛盾和群体性矛盾不断增多，群众信访已成为影响社会政治稳定的一个突出问题。从近年来我们所接触和解决的一些信访事件看，群众上访尤其是越级上访、集体上访，很多是由于我们的一些基层组织、职能部... 当前，改革进入攻坚阶段，各种利益矛盾和群体性矛盾不断增多，群众信访已成为影响社会政治稳定的一个突出问题。从近年来我们所接触和解决的一些信访事件看，群众上访尤其是越级上访、集体上访，很多是由于我们的一些基层组织、职能部门在组织经济建设和发展社会事业等方... 展开更多

关键词 龙头企业 村民自治 堵源 主要问题 厂务公开 政务公开 先进县 村务公开 支柱产业 新形势

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加强“三讲”教育 杜绝干部任用上的不正之风

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作者 赵焕之 王世卿 《学习论坛》 1999年第7期16-62,共2页

近年来,跑官要官买官现象时有曝光,一些人为达到升迁的目的,或想方设法和领导套近乎,拉关系;或托人为自己跑门子,吹热风;或公开向组织、向领导要官职、要待遇;或以官论价,不惜重金投入。凡此种种,向我们警示:干部任用上的腐败不可小视。... 近年来,跑官要官买官现象时有曝光,一些人为达到升迁的目的,或想方设法和领导套近乎,拉关系;或托人为自己跑门子,吹热风;或公开向组织、向领导要官职、要待遇;或以官论价,不惜重金投入。凡此种种,向我们警示:干部任用上的腐败不可小视。 江泽民在党的十五大报告中明确指出:“选拔干部,必须全面贯彻德才兼备的原则,坚持任人唯贤,反对任人唯亲,防止和纠正用人上的不正之风”,“那些背离党的路线的人,那些贪图私利、弄虚作假、跑官要官的人,决不能进入领导班子”。 展开更多

关键词 干部任用 领导干部素质 德才兼备 腐败现象 竞争上岗制度 提高干部素质 十五大报告 防止和纠正 社会主义市场经济体制 选拔干部

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城乡工业协调发展的对策

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作者 赵焕之 《农村工作通讯》 1999年第6期22-22,共1页

城乡工业协调发展,是城乡一体化的必然要求。近年来,新野县委、县政府切实把城乡一体化纳入县城经济社会发展整体规划,适时提出:"科学规划,合理布局,依托小区,规模发展"的指导思想,极大地调动了各乡镇加快小城镇建设的积极性... 城乡工业协调发展,是城乡一体化的必然要求。近年来,新野县委、县政府切实把城乡一体化纳入县城经济社会发展整体规划,适时提出:"科学规划,合理布局,依托小区,规模发展"的指导思想,极大地调动了各乡镇加快小城镇建设的积极性。目前,一批在原工业(贸)小区基础上建立起来的小城镇已渐成"气候",初步显露出现代化气息和城镇文明的曙光。城乡工业协调发展。 展开更多

关键词 协调发展 城乡一体化 加快小城镇建设 合理布局 必然要求 城市工业 工业企业 对策 农村工业化 经济社会发展

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