湖南省4株伪狂犬病病毒的分离鉴定及其免疫与毒力相关基因的序列分析 被引量：14

1

作者 杨涛涛 赵墩 +2 位作者 刘崇灵 屈泰龙 余兴龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第1期50-57,共8页

为了解湖南省近年来伪狂犬病病毒（PRV）的分子流行病学情况,更好地控制伪狂犬病,2012—2014年从湖南平江、汨罗、浏阳、长沙4地的4个规模化猪场送检的病料（脑组织）中检测到PRV野毒。将脑组织接种PK-15细胞,经PCR和动物接种鉴定为PRV... 为了解湖南省近年来伪狂犬病病毒（PRV）的分子流行病学情况,更好地控制伪狂犬病,2012—2014年从湖南平江、汨罗、浏阳、长沙4地的4个规模化猪场送检的病料（脑组织）中检测到PRV野毒。将脑组织接种PK-15细胞,经PCR和动物接种鉴定为PRV。4个毒株分别命名为PRV-XiangA、PRV-GA、PRV-YY和PRV-LY。对这4株PRV的免疫（gB、gG、gH、gI、gL、gM）与毒力（gE、PK、TK）相关基因进行序列分析,结果显示这4株PRV的免疫与毒力相关基因核苷酸同源性为99.8%~100.0%,说明分离得到的4株PRV变异极小;将这4株PRV与国内外的主要毒株进行序列比对,结果表明这4株PRV与国内的分离毒株同源性很高,与BJ-YT株和TJ株的亲缘关系最近,核苷酸同源性为99.8%~100.0%,说明当前国内流行的PRV毒株变异较小。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 分离鉴定 同源性 免疫与毒力相关基因 序列分析

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生猪伪狂犬病毒gB抗体与中和抗体的相关性分析 被引量：8

2

作者 杨涛涛 刘崇灵 +2 位作者 刘晓波 赵墩 余兴龙 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期303-306,共4页

为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物... 为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物统计学分析,gE抗体阴性血清的g B抗体平均S/P值和中和抗体效价(SN效价)倒数平均值的相关系数为0.926,说明g B免疫抗体S/P值与其中和抗体效价有很好的相关性。中和抗体水平的高低一般与免疫保护力呈正相关,研究结果表明gB–ELISA抗体水平可以用来评估生猪对当前流行PRV毒株的相对免疫保护力。 展开更多

关键词 猪 伪狂犬病毒 gB抗体 中和抗体 酶联免疫吸附测定

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一株猪丹毒杆菌的分离鉴定及其致病性实验 被引量：7

3

作者 赵墩 魏榕 +5 位作者 刘晓波 胡玉立 吴海超 屈泰龙 李润成 余兴龙 《湖南畜牧兽医》 2015年第1期18-21,共4页

从湖南邵阳某猪场的急性发病育肥猪体内分离到一株革兰氏阳性小杆菌,通过对其形态特征、PCR检测、生化反应、动物回归等试验,确定其为猪丹毒杆菌.通过对小鼠和猪的攻毒试验表明：该菌对ICR小鼠的LD50为1.75CFU,11×10^7CFU能使8～1... 从湖南邵阳某猪场的急性发病育肥猪体内分离到一株革兰氏阳性小杆菌,通过对其形态特征、PCR检测、生化反应、动物回归等试验,确定其为猪丹毒杆菌.通过对小鼠和猪的攻毒试验表明：该菌对ICR小鼠的LD50为1.75CFU,11×10^7CFU能使8～10周龄的阴性猪致死,且攻毒死亡猪呈典型的猪丹毒临床症状.说明所分离到的猪丹毒杆菌对小鼠和猪致病性极高,为强毒株. 展开更多

关键词 猪丹毒杆菌 小鼠 猪 致病性

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猪多杀性巴氏杆菌PlpP基因的原核表达及其免疫保护性的研究 被引量：6

4

作者 郝杰 赵墩 +2 位作者 刘崇灵 黄婕峰 余兴龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期584-588,共5页

为研究猪多杀性巴氏杆菌PlpP基因的免疫保护性,根据GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌全基因组中的PlpP基因序列,对目的基因进行PCR扩增,并将PCR片段克隆至载体pET-28a(+)中,再将重组表达质粒pETPlpP转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行... 为研究猪多杀性巴氏杆菌PlpP基因的免疫保护性,根据GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌全基因组中的PlpP基因序列,对目的基因进行PCR扩增,并将PCR片段克隆至载体pET-28a(+)中,再将重组表达质粒pETPlpP转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导。序列分析表明,得到了1条大小为945bp的基因片段,与预期大小相符。SDS-PAGE检测结果证实,该基因可以在BL21(DE3)中表达,表达产物为分子质量约45ku的融合蛋白。将纯化的重组蛋白pETPlpP制备成亚单位疫苗,并经皮下途径免疫小鼠,二免后第2周均以5LD50的A、B和D这3种荚膜抗原血清型的多杀性巴氏杆菌分别对小鼠进行攻毒,结果显示,A、B和D这3种血清型的保护率分别是16.67%、33.33%和66.67%。上述结果说明PlpP蛋白具有一定的免疫保护性。 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌 PlpP基因 原核表达 抗原性

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猪多杀性巴氏杆菌重组抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白诱导的免疫保护研究 被引量：5

5

作者 伍小松 罗艳辉 +2 位作者 余兴龙 贺建华 赵墩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期746-749,共4页

为研究猪多杀性巴氏杆菌(Pm)重组抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白的免疫保护性,本研究采用PCR方法扩增该蛋白基因,并将其克隆于pET-28a(+)中构建重组质粒pET-ABP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达。分析表明,猪Pm抗菌肽ABC转运体... 为研究猪多杀性巴氏杆菌(Pm)重组抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白的免疫保护性,本研究采用PCR方法扩增该蛋白基因,并将其克隆于pET-28a(+)中构建重组质粒pET-ABP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达。分析表明,猪Pm抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白基因为696 bp,编码231 aa,不同血清型的该蛋白基因推导氨基酸序列同源性达99%以上。表达的蛋白分子量约为27 ku。动物实验表明,实验组小鼠三免后第14 d其血清IgG抗体水平显著升高,明显高于对照组。对照组攻毒后3 d存活率为20%,7 d全部死亡;免疫组小鼠攻毒后3 d存活率为80%,7 d存活率为40%。该研究为进一步研制Pm的混合疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌 重组抗菌肽ABC转运体ATP结合蛋白 免疫保护力 小鼠

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适合猪圆环病毒2生长的PK15均质细胞株的构建 被引量：5

6

作者 罗维 赵墩 +1 位作者 蒋大良 余兴龙 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期404-408,共5页

为筛选出PCV2培养滴度最高的PK15细胞克隆株,采用稀释法从PK15混合细胞中分离单细胞克隆株,获得的细胞克隆用于接毒试验,即用同步接种法将猪圆环病毒2(PCV2)病毒细胞混合液以1∶100的比例接种单克隆细胞,接毒后经PCR与定量PCR检测得出A1... 为筛选出PCV2培养滴度最高的PK15细胞克隆株,采用稀释法从PK15混合细胞中分离单细胞克隆株,获得的细胞克隆用于接毒试验,即用同步接种法将猪圆环病毒2(PCV2)病毒细胞混合液以1∶100的比例接种单克隆细胞,接毒后经PCR与定量PCR检测得出A10细胞克隆培养PCV2,获得的病毒含量最高。将A10细胞进行第2轮细胞克隆,之后用同步接种法和异步接种法将PCV2感染A10细胞,并检测A10细胞接毒后的PCV2 DNA含量,2种接毒方法获得的最高PCV2基因组的拷贝数分别为3.0×109、6.2×109/mL,高于用PK15混合细胞培养PCV2所获得的最高PCV2基因组拷贝数(107/mL)。综合以上结果,构建的PK15均质细胞克隆株比PK15混合细胞更适合PCV2的培养。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2(PCV2) PK15细胞 细胞克隆 定量PCR 同步接毒 异步接毒

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2019—2022年我国部分地区规模化猪场猪丹毒丝菌血清学检测结果分析

7

作者 黄婕峰 袁智 +1 位作者 王文梅 赵墩 《湖南畜牧兽医》 2024年第4期21-23,共3页

为更好地了解我国规模化猪场猪丹毒丝菌(也称猪丹毒杆菌)的感染状态,试验通过克隆表达1a型猪红斑丹毒丝菌ML101的SpaA基因,建立了猪红斑丹毒丝菌的ELISA诊断方法,并利用此诊断方法对2019—2022年我国15个省份22个规模化猪场的851份猪血... 为更好地了解我国规模化猪场猪丹毒丝菌(也称猪丹毒杆菌)的感染状态,试验通过克隆表达1a型猪红斑丹毒丝菌ML101的SpaA基因,建立了猪红斑丹毒丝菌的ELISA诊断方法,并利用此诊断方法对2019—2022年我国15个省份22个规模化猪场的851份猪血清样品进行抗体检测。结果显示:22个猪场中有15个阳性猪场,占比68.2%,样品中检出104份阳性,阳性率为12.2%;上述猪场均未接种疫苗,也未曾暴发过猪丹毒。结果表明:不同猪场检测结果差异较大,我国部分规模猪场猪丹毒丝菌感染率高,这些猪场存在弱毒力的猪丹毒丝菌感染。 展开更多

关键词 猪丹毒丝菌 抗体检测 猪场阳性比例 感染

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屠宰猪猪肺炎支原体P36、P46、P97 R1、P146氨基酸序列的差异分析 被引量：4

8

作者 李润成 方超 +4 位作者 卿任科 葛猛 赵墩 胡玉立 余兴龙 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期212-220,共9页

为了解猪肺炎支原体流行菌株遗传变异情况,选取2014-2017年不同时间、地点收集的17头猪肺炎支原体阳性屠宰猪肺脏灌洗液DNA为模板,进行猪肺炎支原体P36(编码具有强免疫原性的胞浆蛋白)、P46(编码具有强免疫原性的表面蛋白)、P97 R1区、P... 为了解猪肺炎支原体流行菌株遗传变异情况,选取2014-2017年不同时间、地点收集的17头猪肺炎支原体阳性屠宰猪肺脏灌洗液DNA为模板,进行猪肺炎支原体P36(编码具有强免疫原性的胞浆蛋白)、P46(编码具有强免疫原性的表面蛋白)、P97 R1区、P146高变区(猪肺炎支原体黏附气管纤毛细胞的重要功能区域)基因的PCR扩增、测序。结合GenBank登录的猪肺炎支原体相关序列进行氨基酸序列的比对分析。结果表明,比对的序列之间,P36、P46蛋白氨基酸序列同源性均在98.9%以上,但P97功能区R1区、P146多变区在菌株间存在较大差异。11个屠宰猪样本和5个GenBank登录菌株P97 R1区重复氨基酸序列数量达到14个以上,而GenBank登录的3个疫苗相关菌株(168株、168-L株、J株)及另外4个菌株、4个屠宰猪样本重复序列为9～11个不等;P146高变区氨基酸序列的差异主要集中在2个重复氨基酸序列区(R1、R2),GenBank登录的168株、168-L株、J株以及另外2个菌株,1个屠宰猪样本在R1区出现较多氨基酸缺失。168株、168-L株,6个屠宰猪样本及另外3个GenBank登录菌株在R2区出现了3～9个不等的氨基酸缺失。利用DNAStar进行抗原表位预测发现,菌株间P97 R1、P146 R1、P146 R2区氨基酸序列的差异,导致了抗原表位出现明显的变化。提示开展P97、P146等黏附因子的筛选和研究或许能进一步提升疫苗阻止猪肺炎支原体黏附气管纤毛细胞的作用,从而进一步改善疫苗的免疫效果。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 P36 P46 P97 P146 PCR 差异分析

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立显蛋白染色液在SDS-PAGE中检测微量蛋白的应用 被引量：3

9

作者 王世东 赵墩 +2 位作者 胡玉立 周小飞 余兴龙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第7期803-805,共3页

目的探讨立显蛋白染色液在SDS-PAGE中检测微量蛋白的应用效果。方法制备SDS-PAGE胶,采用立显蛋白染色液及普通考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue,CBB)染色液,检测定量的牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的敏感度及猪细小病毒... 目的探讨立显蛋白染色液在SDS-PAGE中检测微量蛋白的应用效果。方法制备SDS-PAGE胶,采用立显蛋白染色液及普通考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue,CBB)染色液,检测定量的牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的敏感度及猪细小病毒VP2蛋白、猪蓝耳病病毒N蛋白、猪丹毒杆菌Fe蛋白和猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因工程纯化样品的纯度。结果采用立显蛋白染色液染色可识别蛋白质含量为2.5ng的蛋白条带,敏感性高于普通CBB染色40倍。4种蛋白纯化样品经CBB染色后检测纯度均较高,但经立显蛋白染色液染色后,4种纯化蛋白样品均检测出杂蛋白,测定的纯度均有所下降,其中VP2及gB蛋白的纯度有较大幅度下降(分别由83.33%、100%降至51.8%、85.6%)。结论立显蛋白染色液染色SDS-PAGE胶中的蛋白条带敏感性高,快速简便,适用于微量蛋白质的检测。 展开更多

关键词 立显蛋白染色液 考马斯亮蓝染色液 SDS-PAGE 微量蛋白

原文传递

一起引起母猪流产死亡猪丹毒疫情的诊断 被引量：3

10

作者 刘洋 胡辉灿 +2 位作者 姚清 赵墩 余兴龙 《中国动物检疫》 CAS 2018年第11期79-80,91,共3页

2017年9月,湖南省郴州市某猪场的怀孕母猪突然发生流产、死亡。为确诊病因,对该猪场病死猪脏器进行了细菌分离和PCR检测,结合临床症状最终确诊病原为猪丹毒丝菌。为了解整个猪场猪群的感染情况,随机抽取流产母猪和同栏舍健康母猪进行猪... 2017年9月,湖南省郴州市某猪场的怀孕母猪突然发生流产、死亡。为确诊病因,对该猪场病死猪脏器进行了细菌分离和PCR检测,结合临床症状最终确诊病原为猪丹毒丝菌。为了解整个猪场猪群的感染情况,随机抽取流产母猪和同栏舍健康母猪进行猪丹毒丝菌IgG抗体ELISA检测,发现流产母猪阳性率为90%,远高于同栏舍健康母猪(10%)。本次疫情共导致该猪场104头母猪死亡和94头母猪流产。本案例表明,猪丹毒不仅可以引起母猪死亡,也可引起母猪流产,应引起养殖场高度重视,建议把猪丹毒列入免疫计划。 展开更多

关键词 母猪流产 猪丹毒丝菌 IGG ELISA

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猪圆环病毒3型抗体ELISA检测方法建立及其应用 被引量：2

11

作者 谢怡灵 李润成 +6 位作者 赵墩 杜丽飞 熊梦霞 宁柯铭 李双寅 黎满香 葛猛 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第3期34-41,共8页

本研究将猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白截去核定位序列(NLS)后对应的dCap基因克隆至pET28a(+)并转入大肠杆菌BL21(DE3),得到重组菌后进行蛋白表达。采用镍离子亲和层析纯化dCap蛋白。将纯化的dCap蛋白作为抗原进行包被,建立检测PCV3抗体... 本研究将猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白截去核定位序列(NLS)后对应的dCap基因克隆至pET28a(+)并转入大肠杆菌BL21(DE3),得到重组菌后进行蛋白表达。采用镍离子亲和层析纯化dCap蛋白。将纯化的dCap蛋白作为抗原进行包被,建立检测PCV3抗体的间接ELISA方法,并对湖南省1175份临床血清进行检测。结果显示:dCap蛋白主要以包涵体形式表达,当以pH为10.83的碳酸盐缓冲液将纯化的dCap蛋白稀释到0.2μg/mL并进行包被,且血清50倍稀释,酶标二抗1∶8000稀释时,ELISA的反应条件最佳,确定S/P临界值为0.270,批内及批间差异均小于10%,本方法与PCV2、CSFV、PRV和PRRSV阳性血清无交叉反应。对湖南省11个地级市的29个猪场的血清流行病学调查结果表明:PCV3抗体猪场阳性率为100%(29/29),样品总阳性率为58.64%(689/1175),但阳性样品主要集中在肥猪和母猪,且阳性率在肥猪阶段明显上升,说明猪群感染PCV3主要是在育肥阶段。 展开更多

关键词 猪圆环病毒3 CAP蛋白 间接ELISA

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湖南地区猪源多杀性巴氏杆菌部分保护性抗原基因分子流行病学调查 被引量：3

12

作者 马攀 方超 +3 位作者 李润成 胡玉立 赵墩 余兴龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期152-155,共4页

为探索多杀性巴氏杆菌(Pm)的保护性抗原基因在A与D血清型之间分布规律及其保守性,本研究通过对湖南地区分离的92株(A型:50株;D型:42株)猪源Pm的ompA、ompH、omp87、plpE、plpP、ptfA、fhab2、vacJ和tbpA等9种保护性抗原基因进行PCR检测... 为探索多杀性巴氏杆菌(Pm)的保护性抗原基因在A与D血清型之间分布规律及其保守性,本研究通过对湖南地区分离的92株(A型:50株;D型:42株)猪源Pm的ompA、ompH、omp87、plpE、plpP、ptfA、fhab2、vacJ和tbpA等9种保护性抗原基因进行PCR检测。结果显示:在以上9种基因中ompA、ompH、omp87以及ptfA的检出率最高,均为100%;vacJ和plpP基因的检出率分别为91%和66%。而fhab2和plpE基因仅在A型菌株中检出,检出率分别为42%和40%。选取部分菌株,对其4种检出率为100%的基因进行测序显示,omp87的同源性介于99.1%~100%;ptfA的同源性介于97.2%~100%;ompA的同源性介于91.2%~100%;ompH的同源性介于84.6%~100%。此外,经抗原表位预测,omp A和ompH基因在部分抗原表位区域存在明显差异。本研究发现omp87和ptfA两个基因存在于本研究分离的92株猪源Pm,并且相当保守,该结果为巴氏杆菌基因工程亚单位疫苗开发过程中保护性抗原的选择提供了依据。 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌 保护性抗原 分子流行病学 亚单位疫苗

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转移因子对猪丹毒杆菌SpaA抗原免疫效果的影响 被引量：1

13

作者 胡辉灿 刘洋 +2 位作者 姚清 赵墩 余兴龙 《河南农业科学》 北大核心 2019年第4期135-138,共4页

为了探寻转移因子(Transfer factor,TF)对猪丹毒杆菌SpaA(Surface protective antigen A)蛋白抗原免疫效果的影响,将重组SpaA蛋白与双相佐剂乳化后(称SpaA抗原)免疫小鼠,取免疫小鼠和未免疫小鼠脾脏,以超滤法分别制备特异性TF和普通TF,... 为了探寻转移因子(Transfer factor,TF)对猪丹毒杆菌SpaA(Surface protective antigen A)蛋白抗原免疫效果的影响,将重组SpaA蛋白与双相佐剂乳化后(称SpaA抗原)免疫小鼠,取免疫小鼠和未免疫小鼠脾脏,以超滤法分别制备特异性TF和普通TF,并利用BCA法测定所得TF的质量分数,经过无菌及安全性检测后,将2种TF分别腹腔接种至小鼠体内,24 h后,对2组TF处理后的小鼠均免疫SpaA抗原,并以未接种TF的免疫小鼠作为对照(仅免疫组)。分别于免疫后12 d、21 d和30 d对小鼠进行采血,用间接ELISA法对小鼠血清进行抗体检测。结果表明,利用原核表达系统表达的重组SpaA蛋白分子质量60 ku且具有可溶性;以超滤法制备的特异性TF质量浓度为2.56 mg/mL,普通TF质量浓度为2.40 mg/mL,且2种TF安全无毒;抗体检测数据显示,2种TF处理组在免疫后21、30 d的抗体水平均高于仅免疫组,且差异显著,而2种TF处理组之间抗体水平差异不显著。因此,TF能诱导SpaA抗原快速产生抗体,提高SpaA抗原的免疫效果,但与TF的特异性关系不大,表明TF可作为猪丹毒杆菌基因工程亚单位疫苗的免疫增效剂,提高免疫动物的抗体水平。 展开更多

关键词 转移因子 特异性 猪丹毒杆菌 SpaA抗原 抗体水平

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多杀性巴氏杆菌IbeB重组蛋白诱导小鼠抗攻击感染的免疫保护力 被引量：1

14

作者 伍小松 余兴龙 +1 位作者 贺建华 赵墩 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期630-635,共6页

为了研究猪多杀性巴氏杆菌IbeB重组蛋白(rIbeB)的免疫保护性,根据GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌ibeB基因序列设计1对引物扩增ibeB基因,并重组至pET-28a(+)构建重组表达质粒pET-ibeB,转化到大肠杆菌BL21(D E3),经IPTG诱导获得rIbeB。生... 为了研究猪多杀性巴氏杆菌IbeB重组蛋白(rIbeB)的免疫保护性,根据GenBank中登录的多杀性巴氏杆菌ibeB基因序列设计1对引物扩增ibeB基因,并重组至pET-28a(+)构建重组表达质粒pET-ibeB,转化到大肠杆菌BL21(D E3),经IPTG诱导获得rIbeB。生物信息学分析表明,猪多杀性巴氏杆菌ibeB基因长1 392 bp,编码蛋白质含463个氨基酸。该蛋白质的理论分子质量为51.98 ku,具有2个外排蛋白结构域,属外膜外排蛋白超家族。蛋白序列比对发现,不同血清型的多杀性巴氏杆菌IbeB的同源性达99%以上。rIbeB诱导小鼠的免疫保护结果表明,第3次免疫后第14天小鼠血清中IgG抗体水平显著升高,明显高于佐剂对照组。攻毒后,对照组小鼠第3天的存活率为20%,7 d后全部死亡;免疫组第3天的存活率达70%,第7天的存活率为40%。结果表明,rIbeB蛋白具有很好的免疫原性,可诱导小鼠产生部分免疫保护力。 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌 ibeB基因 免疫原性 免疫保护力 小鼠

原文传递

病料中猪圆环病毒(PCV)的分型检测及PCV2型不同毒株的培养 被引量：1

15

作者 罗维 赵墩 +3 位作者 王湘 吴海超 蒋大良 余兴龙 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期626-630,共5页

对湖南各地区送检猪病料进行了猪圆环病毒(PCV)的PCR检测,并对PCV阳性病料的DNA进行了猪圆环病毒1(PCV1)与PCV2的PCR分型检测。结果表明:送检的192份样品中,有117份为PCV阳性;117份PCV阳性样品全部含有PCV2的DNA,其中2份既有PCV2也有PCV... 对湖南各地区送检猪病料进行了猪圆环病毒(PCV)的PCR检测,并对PCV阳性病料的DNA进行了猪圆环病毒1(PCV1)与PCV2的PCR分型检测。结果表明:送检的192份样品中,有117份为PCV阳性;117份PCV阳性样品全部含有PCV2的DNA,其中2份既有PCV2也有PCV1的DNA;对病料中的PCV2进行克隆,获得的序列均为PCV2–1基因组,对其中2株毒株的序列进行感染性克隆病毒的构建,拯救的病毒命名为PCV2(2–1)和PCV2(4–1);对PCV2(2–1)和PCV2(4–1)进行培养,结果 2株病毒均可以在换液维持的细胞中有效的复制。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2 分型 感染性克隆 毒株 复制

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猪圆环病毒2型基因1群B亚簇的体外培养特征 被引量：1

16

作者 罗维 赵墩 +2 位作者 吴海超 蒋大良 余兴龙 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期534-538,共5页

为探寻猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中的复制特征,将PCV2基因1群B亚簇(PCV2–1B)病毒感染PK15均质细胞A10,待感染细胞层长满,对其进行连续传代;对第5、6代细胞进行维持培养,即在细胞长满后隔天更换培养基,以维持细胞良好的生长;用第1... 为探寻猪圆环病毒2型(PCV2)在PK15细胞中的复制特征,将PCV2基因1群B亚簇(PCV2–1B)病毒感染PK15均质细胞A10,待感染细胞层长满,对其进行连续传代;对第5、6代细胞进行维持培养,即在细胞长满后隔天更换培养基,以维持细胞良好的生长;用第10代带毒细胞的培养液接种A10细胞,并进行换液维持培养。PCR与定量PCR检测结果表明,PCV2–1B病毒感染A10细胞后,其病毒基因组的含量在感染细胞长满之前(约96 h)随着细胞的增多而上升,同时也随着传代次数的增多而上升;换液维持培养的细胞,在维持10 d后PCV2–1B病毒基因组的含量能维持在107～108拷贝/mL,而第10代带毒细胞的培养液接毒A10之后,病毒基因组含量随细胞增多而上升,在达到约108拷贝/mL后,病毒基因组含量维持在107～108拷贝/mL。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 复制动态 PK15细胞 毒株

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鹅出血性多瘤病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

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作者 罗灵芝 杨鹏江 +4 位作者 丁彦彬 勾明郗 赵墩 余兴龙 杨磊 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期278-284,共7页

为了建立一种能快速、灵敏且准确检测鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)的诊断方法,将GHPV的VP1基因构建到载体pClone007 Blunt Simple Vector上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,以建立GHPV VP1基因的SYBR Gree... 为了建立一种能快速、灵敏且准确检测鹅出血性多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV)的诊断方法,将GHPV的VP1基因构建到载体pClone007 Blunt Simple Vector上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,以建立GHPV VP1基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性和在临床检测中的应用进行验证。结果显示,所建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的标准曲线呈良好的线性关系,其线性相关系数R^(2)=0.975,其扩增效率E=86.731%,熔解曲线呈现单峰;检测鹅细小病毒、鹅圆环病毒、鹅副黏病毒、鸭坦布苏病毒、鹅星状病毒时呈阴性,具有较好的特异性;最低检出浓度为(1.16×10^(1)copies/μL),比普通PCR方法灵敏100倍;其中组内变异系数在0.10%~1.48%之间,组间变异系数在1.07%~2.24%之间,具有较好的重复性和稳定性;对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20%,其中阳性符合率为100%,总符合率为80%。上述结果表明,本研究建立的检测GHPV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,对GHPV的快速诊断和监测具有重要意义。 展开更多

关键词 鹅出血性多瘤病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR

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依据CLIA′88更新规则评价VITROS 5.1FS临床化学系统性能 被引量：1

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作者 钟凌 赵墩 +1 位作者 李顺君 黄文芳 《检验医学与临床》 CAS 2011年第19期2311-2314,共4页

目的对VITROS 5.1FS临床化学系统进行性能评价。方法依据临床实验室修正法规1998(CLIA′88)的更新规则,采用美国临床实验室标准化协会颁布的EP15-A、C28-A2指南文件的推荐方法,对VITROS 5.1FS临床化学系统在实验室开展的尿素、肌酐、血... 目的对VITROS 5.1FS临床化学系统进行性能评价。方法依据临床实验室修正法规1998(CLIA′88)的更新规则,采用美国临床实验室标准化协会颁布的EP15-A、C28-A2指南文件的推荐方法,对VITROS 5.1FS临床化学系统在实验室开展的尿素、肌酐、血糖等27个项目的精密度、准确度、可报告范围、参考区间(R)进行评价。结果 27个项目的精密度指数PIwithin<1,PItotal<1;准确度的确认以校准品(CalKit)为样品,其各个水平校准品的检测值与靶值间的差异均在厂商提供的允许范围内。因全部采用了3个水平的校准品,已经包含了可报告范围的低限和高限,所以可报告范围也同时被确认。钠、磷、乳酸脱氢酶、脂肪酶、血氨等5个项目的R为95%,碱性磷酸酶的R为90%,其余项目的R为100%。结论 VITROS 5.1FS临床化学系统的性能指标可满足CLIA′88更新规则的要求。 展开更多

关键词 血液化学分析 自动化 参考值 质量控制

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生猪肺脏及肛门拭子中血清4型猪腺病毒的PCR检测与分析

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作者 丁彦彬 李润成 +3 位作者 李海锦 赵墩 余兴龙 胡仕凤 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期179-180,共2页

猪腺病毒感染极其普遍，猪场感染率很高，研究表明，英国西南部地区26％一53％的猪群具有种群特异性抗体，加拿大魁北克市猪腺病毒血清4型感染率高达18．3％。在自然条件下，猪腺病毒主要通过粪口途径或者气溶胶暴露进行水平传播，对于... 猪腺病毒感染极其普遍，猪场感染率很高，研究表明，英国西南部地区26％一53％的猪群具有种群特异性抗体，加拿大魁北克市猪腺病毒血清4型感染率高达18．3％。在自然条件下，猪腺病毒主要通过粪口途径或者气溶胶暴露进行水平传播，对于猪腺病毒来说猪是目前已知的唯一易感动物。 展开更多

关键词 腺病毒感染 血清4型 PCR检测 生猪 肛门 肺脏 特异性抗体 西南部地区

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基于猪流行性腹泻病毒S1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用 被引量：3

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作者 罗烨 罗灵芝 +6 位作者 丁彦彬 赵墩 周小飞 郑金 李润成 葛猛 余兴龙 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1341-1347,共7页

根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)HuN株S1蛋白的基因序列(GenBank:JQ517274)构建哺乳动物细胞重组表达质粒pIRES-S1。利用电转法将pIRES-S1转染至ST细胞,经过G418加压筛选、Western-blot检测、悬浮驯化后,得到能表达S1蛋白的ST稳转细胞池。We... 根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)HuN株S1蛋白的基因序列(GenBank:JQ517274)构建哺乳动物细胞重组表达质粒pIRES-S1。利用电转法将pIRES-S1转染至ST细胞,经过G418加压筛选、Western-blot检测、悬浮驯化后,得到能表达S1蛋白的ST稳转细胞池。Western-blot结果显示,S1蛋白具有良好的反应原性。以S1蛋白作为包被抗原初步建立间接ELISA方法,并对PEDV临床血清和进口种猪PEDV阴性血清进行检测,以血清中和试验为标准,结果显示,该ELISA方法敏感性为96.3%,特异性为97.7%,与血清中和试验具有很高的一致性(kappa值=0.882,P<0.05)。应用ELISA方法对PEDV返饲猪跟踪血清检测,结果显示,该方法能准确地评估感染猪体内PEDV IgG抗体水平消长规律。上述结果表明,本研究建立的基于S1蛋白的ELISA方法具有高敏感性和高特异性,可用于临床猪血清中PEDV抗体的检测,为猪群PEDV的免疫评估提供有效依据。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 S1蛋白 ST细胞 间接ELISA

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