K88菌毛蛋白亚基基因克隆、表达及重组蛋白抗血清制备 被引量：8

1

作者 赵主江 黄诚 +5 位作者 黄亚红 陈建秀 周智爱 梁婉琪 潘爱虎 张大兵 《上海农业学报》 CSCD 2000年第2期38-41,共4页

利用 PCR技术 ,从仔猪黄痢的致病菌中扩增出不含信号肽序列的 K88菌毛蛋白亚基基因片段 ,将其克隆到 E.coli表达载体 p ET2 8a(+)中 ,构建了该基因的原核表达载体 p882 8,导入 E.coli BL 2 1(DE3) ,得到工程菌株。 SDS- PAGE分析结果显... 利用 PCR技术 ,从仔猪黄痢的致病菌中扩增出不含信号肽序列的 K88菌毛蛋白亚基基因片段 ,将其克隆到 E.coli表达载体 p ET2 8a(+)中 ,构建了该基因的原核表达载体 p882 8,导入 E.coli BL 2 1(DE3) ,得到工程菌株。 SDS- PAGE分析结果显示 ,经 IPTG诱导 ,该亚基基因高效表达出重组 K88菌毛蛋白 ,约占菌体总蛋白的 30 %。用含重组蛋白的凝胶作为抗原 ,免疫新西兰大白兔 ,首次制备 K88菌毛蛋白亚基的抗血清。免疫学分析表明 。 展开更多

关键词 ETEC K88菌毛蛋白 抗血清 大肠杆菌

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RNAi及DNA芯片分析肝癌细胞系中受DNMT3B调控的下游基因(英文) 被引量：8

2

作者 许军 樊红 +2 位作者 赵主江 张建琼 谢维 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1115-1127,共13页

为揭示DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)在肝癌中是否参与了肿瘤的发生,应用Westernblotting及细胞免疫化学方法分析DNMT3B蛋白在人的正常肝细胞株、肝癌癌旁细胞株及肝癌癌细胞株中的表达。构建了DN-MT3B的RNAi稳定表达的重组载体,并转染入肝... 为揭示DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)在肝癌中是否参与了肿瘤的发生,应用Westernblotting及细胞免疫化学方法分析DNMT3B蛋白在人的正常肝细胞株、肝癌癌旁细胞株及肝癌癌细胞株中的表达。构建了DN-MT3B的RNAi稳定表达的重组载体,并转染入肝癌细胞株SMMC-7721中。以半定量RT-PCR及Westernblot-ting分别鉴定DNMT3BRNAi表达载体对内源性DNMT3B的抑制效率。用高通量的cDNA基因芯片分析了SMMC-7721中DNMT3B抑制后有影响的下游基因谱。结果显示,DNMT3B在肝癌细胞株中的表达水平明显高于肝癌癌旁和正常肝细胞株。DNMT3B的RNAi稳定表达重组载体转染SMMC-7721细胞株2个月后,观察到DNMT3B明显受到抑制。cDNA基因芯片分析发现,DNMT3B抑制后诱导26条基因表达下调,115条基因表达上调,包括一些发育相关基因以及肿瘤相关基因,如SNCG、NOTCH1、MBD3、WNT11、MAOA、FACL4等。提示DNMT3B的高表达可能与肝癌的发生有关,并以调控其他相关基因的表达而起作用,包括与发育相关的重要基因。 展开更多

关键词 甲基转移酶 DNA甲基转移酶3B RNA干扰 肝癌

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产肠毒素性大肠杆菌K99菌毛蛋白抗原基因的克隆与表达 被引量：6

3

作者 黄亚红 梁婉琪 +6 位作者 潘爱虎 王阿凤 黄诚 赵主江 陈建秀 周智爱 张大兵 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期471-474,共4页

应用 PCR从产肠毒素性大肠杆菌 ( ETEC)中扩增出不含信号肽序列的 K99菌毛蛋白基因片段 ,克隆测序后 ,将该片段连接到 E.coli表达载体 p ET2 8a( + )中 ,转化 E.coli表达菌株 BL2 1 ( DE3) ,筛选得到可诱导表达 K99抗原的工程菌株。经 I... 应用 PCR从产肠毒素性大肠杆菌 ( ETEC)中扩增出不含信号肽序列的 K99菌毛蛋白基因片段 ,克隆测序后 ,将该片段连接到 E.coli表达载体 p ET2 8a( + )中 ,转化 E.coli表达菌株 BL2 1 ( DE3) ,筛选得到可诱导表达 K99抗原的工程菌株。经 IPTG诱导 ,分离纯化 K99重组蛋白 ,以其免疫新西兰大白兔 ,获得重组蛋白的兔抗血清 ;免疫印迹分析表明 ,此重组蛋白制备的抗血清能与标准的 展开更多

关键词 产肠毒素性大肠杆菌 K99 基因克隆 K99菌毛蛋白抗血清 表达

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加强医学遗传学课程建设的几点体会 被引量：7

4

作者 赵主江 樊红 +2 位作者 刘啸 张建琼 谢维 《西北医学教育》 2004年第6期523-525,共3页

医学遗传学是基础医学与临床医学之间的桥梁学科之一.在进行课程建设时,首先应在思想上给予高度重视;抓住医学遗传学课程的特点,合理安排课程教学内容;充分利用丰富的现代多媒体技术的优势,以科研为突破口,加强师资队伍建设,努力改善课... 医学遗传学是基础医学与临床医学之间的桥梁学科之一.在进行课程建设时,首先应在思想上给予高度重视;抓住医学遗传学课程的特点,合理安排课程教学内容;充分利用丰富的现代多媒体技术的优势,以科研为突破口,加强师资队伍建设,努力改善课程建设中的不足. 展开更多

关键词 医学遗传学 课程建设 教学手段

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DNMT1 siRNA稳定表达载体的构建及其沉默效率的评价 被引量：5

5

作者 樊红 许军 +3 位作者 吴守伟 赵主江 张建琼 谢维 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期142-145,共4页

目的　构建能在肝癌细胞系SMMC- 772 1中稳定表达的高效率DNMT1的RNA干扰载体。方法　合成特异性干扰DNMT1的小分子干扰RNA (small interfering RNA,si RNA )分子,并与p SUPER- GFP载体连接。脂质体转染SMMC- 772 1细胞,并以G4 18筛选... 目的　构建能在肝癌细胞系SMMC- 772 1中稳定表达的高效率DNMT1的RNA干扰载体。方法　合成特异性干扰DNMT1的小分子干扰RNA (small interfering RNA,si RNA )分子,并与p SUPER- GFP载体连接。脂质体转染SMMC- 772 1细胞,并以G4 18筛选稳定表达细胞系。应用逆转录-聚合酶链反应和Western印迹方法对细胞系中DNMT1的RNA表达水平和蛋白表达水平进行了分析。应用甲基化聚合酶链反应方法分析该细胞系中甲基化的基因E-钙粘着蛋白的甲基化状态。结果　转染DNMT1沉默载体的SMMC- 772 1细胞中DNMT1的m RNA表达量为对照载体p SU PER转染SMMC-772 1细胞的4 3% ,而前者中DNMT1蛋白表达水平小于后者的10 %。DNMT1的si RNA沉默效率大于90 % ,所构建的DNMT1的si RNA有较高的沉默效率。DNMT1的表达抑制使E-钙粘着蛋白基因启动子区出现去甲基化。结论　成功构建了能稳定表达的高效率DNMT1的RNA干扰载体,但目的基因沉默后其RNA表达水平与蛋白质表达水平表现不一致,评价si RNA干扰作用时应以目的基因相应蛋白质的表达水平为准。 展开更多

关键词 DNMT1 SIRNA 稳定表达载体 SMMC-7721细胞 Western印迹方法 逆转录-聚合酶链反应 E-钙粘着蛋白 蛋白表达水平 MRNA表达量 RNA干扰作用 基因启动子区 肝癌细胞系 脂质体转染 甲基化状态 RNA沉默 蛋白质表达 方法分析 去甲基化

原文传递

DNMT3B基因启动子C46359T多态性与食管癌易感性的关联分析 被引量：4

6

作者 刘东声 张淑红 +3 位作者 胡嘉波 张凤 赵主江 樊红 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2008年第5期319-323,共5页

目的：探讨DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性与江苏汉族人群食管癌易感性的关系。方法：提取195例食管癌患者及189例健康体检人员外周血基因组DNA，采用PCR—RFLP结合DNA测序技术检测DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性。结... 目的：探讨DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性与江苏汉族人群食管癌易感性的关系。方法：提取195例食管癌患者及189例健康体检人员外周血基因组DNA，采用PCR—RFLP结合DNA测序技术检测DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性。结果：正常对照DNMT3BC46359T等位基因TT／CT基因型频率为98．9％／1．1％，病例组为97．9％／2．1％，在对照组与病例组中均未检测到DNMT3B 46359 CC基因型。携带DNMT3B 46359 CT等位基因的个体与对照组相比，其患食管癌的易感性未见明显升高（P=0．43，OR=1．96，95％CI：0．35—10．82）。对比江苏汉族人群和英国、美国白种人群，DNMT3B C66359T单核苷酸多态性频率分布有明显差异（P〈0．01）。结论：DNMT3B基因CA6359T多态性可能不适合作为中国汉族人群食管癌易感性的一个独立风险因素，此位点多态性的分布在不同人种间有显著差异。 展开更多

关键词 DNA甲基转移酶3B 食管癌 单核苷酸多态性

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改革医学遗传学教学模式,培养综合素质医学人才 被引量：4

7

作者 樊红 赵主江 +2 位作者 刘啸 张建琼 谢维 《山西医科大学学报（基础医学教育版）》 2006年第1期11-13,共3页

为加强和优化医学遗传学教学，克服传统教学存在的不足，以素质教育为基础，采用多种教学手段，加强教学改革，提高教学内容，同时注意学生医德教育和情感的培养，从而培养高素质医学人才。

关键词 医学遗传学 教学改革 综合素质 医学人才

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DNMT3B基因异常表达与肝癌发生的相关性研究 被引量：3

8

作者 单云峰 樊红 +4 位作者 赵主江 许军 程欲超 权艳梅 谢维 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期27-30,共4页

目的探讨DNMT3B和肝癌发生的关系。方法用实时荧光定量RT-PCR方法分析正常肝细胞系、肝癌癌旁细胞系及肝癌癌细胞系中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的表达谱,以及DNMT3B表达抑制后在肝癌细胞系SMMC-7721中出现表达上调的与肿瘤发生相关的基因PD... 目的探讨DNMT3B和肝癌发生的关系。方法用实时荧光定量RT-PCR方法分析正常肝细胞系、肝癌癌旁细胞系及肝癌癌细胞系中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的表达谱,以及DNMT3B表达抑制后在肝癌细胞系SMMC-7721中出现表达上调的与肿瘤发生相关的基因PDCD4和MBD3的表达。结果DNMT1,DNMT3A,DNMT3B在肝癌细胞系中存在高表达的趋势,表达水平一致性的明显高于肝癌癌旁和正常肝细胞系,提示这些酶与肝癌的发生相关。结论DNMT3B表达抑制后肝癌细胞系SMMC-7721中与肝癌发生相关的MBD3和PDCD4基因表达水平上调,表明DNMT3B沉默后,诱导了下游肿瘤抑制基因的过表达,推测DNMT3B在肝癌发生中通过某种机制调控下游肿瘤抑制基因的表达。 展开更多

关键词 DNA甲基转移酶3B 肝癌 实时荧光定量RT-PCR

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乙肝核心抗原(HBc Ag)作为免疫载体蛋白的研究进展 被引量：1

9

作者 赵主江 梁婉琪 张大兵 《微生物学免疫学进展》 2001年第2期70-73,共4页

基因工程疫苗是微生物学免疫学研究的热点之一 ,本文从几方面综述乙肝核心抗原 (HBcAg)作为基因工程肽苗免疫载体 (Vaccinecarriermoiety)的研究进展 :①HBcAg的结构特征 ;②HBcAg独特的免疫学性质 ;③HBcAg作为异源表位递呈系统 (Epito... 基因工程疫苗是微生物学免疫学研究的热点之一 ,本文从几方面综述乙肝核心抗原 (HBcAg)作为基因工程肽苗免疫载体 (Vaccinecarriermoiety)的研究进展 :①HBcAg的结构特征 ;②HBcAg独特的免疫学性质 ;③HBcAg作为异源表位递呈系统 (Epitopedisplaysystem) 展开更多

关键词 乙肝核心抗原 免疫载体蛋白 研究进展

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结合消减杂交筛选肝癌细胞系中差异甲基化位点

10

作者 樊红 程欲超 +2 位作者 赵主江 权艳梅 成建 《生物医学工程研究》 2006年第3期154-157,共4页

为探索有效分离两样品间差异甲基化片段的方法,以DNMT1(DNAmethyltransferase1,DNMT1)表达抑制前后的肝癌细胞系7721-sMT1和7721-pMT1为研究对象,结合消减杂交和磁珠分离的方法,在两细胞系全基因组DNA范围内进行扫描差异性甲基化片段;... 为探索有效分离两样品间差异甲基化片段的方法,以DNMT1(DNAmethyltransferase1,DNMT1)表达抑制前后的肝癌细胞系7721-sMT1和7721-pMT1为研究对象,结合消减杂交和磁珠分离的方法,在两细胞系全基因组DNA范围内进行扫描差异性甲基化片段;将这些片段进行生物信息学分析,发现所获38条差异甲基化片段分布于不同的染色体上,但集中于重复序列、基因的启动子区,此特点符合DNA甲基化位点分布规律。实验结果证明消减杂交结合磁珠分离的方法,能筛选出两样品间的差异甲基化片段,该方法的建立为筛选肿瘤细胞中特异性差异甲基化片段作为肿瘤诊断的标志物提供了可能性。 展开更多

关键词 消减杂交 DNA甲基化 差异甲基化片段 表观遗传学 CPG岛 DNMT

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DNA甲基转移酶3A siRNA真核表达载体的构建和鉴定

11

作者 赵主江 樊红 +1 位作者 单云峰 张建琼 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2008年第1期1-5,共5页

目的:构建DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferases 3A,DNMT3A)siRNA重组质粒稳定表达载体,为进一步探讨DNMT3A在多种生物学过程及肿瘤发生发展中的机制提供工具。方法:依据DNMT3A基因的cDNA序列,利用siDESIGN软件获得RNAi靶位点后设计... 目的:构建DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferases 3A,DNMT3A)siRNA重组质粒稳定表达载体,为进一步探讨DNMT3A在多种生物学过程及肿瘤发生发展中的机制提供工具。方法:依据DNMT3A基因的cDNA序列,利用siDESIGN软件获得RNAi靶位点后设计出对应的siRNA寡核苷酸模板,体外合成寡核苷酸片段经退火形成短双链,克隆到真核表达载体pSUPER-EGFP1中,构建DNMT3A siRNA重组质粒载体,经酶切鉴定后转染人肝癌细胞系SMMC-7721,荧光实时定量PCR初步分析DNMT3A经RNA干涉后的沉默效应。结果:成功构建了靶向DNMT3A基因的siRNA重组稳定表达载体,此载体有效地降低了肝癌细胞系中DNMT3A基因的表达水平。结论:通过该方法初步确定了沉默DNMT3A基因的较佳靶点。 展开更多

关键词 DNA甲基转移酶3A SIRNA 载体

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