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马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种real-time PCR检测方法的建立与应用
1
作者 吕厚姣 李欣媛 +3 位作者 白小佳 贾龙刚 耿伟涛 王艳萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第9期102-108,共7页
本研究建立了一种特异性实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法,根据模式菌株马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3的16S rDNA序列和全基因组序列设计筛选特异性引物,采用SYBR Green I荧光染料建立r... 本研究建立了一种特异性实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法,根据模式菌株马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3的16S rDNA序列和全基因组序列设计筛选特异性引物,采用SYBR Green I荧光染料建立real-time PCR方法,并对方法的特异性、灵敏度、重复性和混合体系等进行检测。结果表明,本研究所建立的方法特异性强、灵敏度高、重复性好,建立real-time PCR的标准曲线,其决定系数R2为0.965,具有良好的线性关系,且在马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种及混合体系中可以特异性检出。综上,本研究建立的real-time PCR法可以快速、准确地检测马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种,为马乳酒样乳杆菌的特异性定性定量检测提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种 实时聚合酶链式反应 特异性引物
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发酵乳杆菌CECT 5716产胞外多糖培养基成分优化及抗氧化活性研究 被引量：4
2
作者 方伟 李佳佳 +3 位作者 耿伟涛 贾龙刚 陈铁涛 王艳萍 《中国酿造》 CAS 北大核心 2022年第11期187-192,共6页
采用单因素和正交试验对发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)CECT 5716产胞外多糖(EPS)的培养基成分进行优化,并通过评价胞外多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基... 采用单因素和正交试验对发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentium)CECT 5716产胞外多糖(EPS)的培养基成分进行优化,并通过评价胞外多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基的清除活性以及其总抗氧化能力和Fe^(3+)总还原力考察胞外多糖的抗氧化活性。结果表明,发酵乳杆菌CECT 5716产胞外多糖的最优培养基配方:麦芽糖2.0%、蔗糖1.0%、酵母膏2.5%、L-半胱氨酸盐酸盐0.2%、乙酸钠0.5%、磷酸氢二钾0.2%、硫酸镁0.02%、硫酸锰0.005%、柠檬酸氢二胺0.2%、吐温800.1%。在此条件下,EPS产量为(1575±22.91)mg/L,是优化前的6.38倍。胞外多糖具有较好的抗氧化活性,并与其质量浓度成正比,当胞外多糖的质量浓度为8 mg/mL时,对DPPH自由基的清除率为(84.17±1.30)%、对ABTS自由基的清除率为(35.37±1.24)%,总抗氧化能力为0.31±0.01、Fe^(3+)总还原力为0.55±0.01。 展开更多
关键词 发酵乳杆菌 胞外多糖 培养基 优化 抗氧化活性
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马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3的毒理学安全性评价 被引量：2
3
作者 张阳 贾龙刚 +5 位作者 耿伟涛 袁媛 杨帆 张寅静 樊柏林 王艳萍 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2023年第3期32-37,共6页
为评估马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3食用安全性及健康风险,对ZW3进行系统的体外和体内毒理学实验,包括SD大鼠急性经口毒性实验、细菌回复突变实验、小鼠骨髓细胞微核实验和仓鼠卵巢细胞染色体畸变实验。急性经口毒性实验表明:ZW3的LD5... 为评估马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3食用安全性及健康风险,对ZW3进行系统的体外和体内毒理学实验,包括SD大鼠急性经口毒性实验、细菌回复突变实验、小鼠骨髓细胞微核实验和仓鼠卵巢细胞染色体畸变实验。急性经口毒性实验表明:ZW3的LD50大于10.0 g/kg体重;细菌回复突变实验结果显示:ZW3对5株测试菌株无诱变特性,在小鼠骨髓细胞微核实验中ZW3不会导致哺乳动物嗜多染红细胞含微核细胞率增加;仓鼠卵巢细胞染色体畸变实验结果表明:ZW3的不同剂量组中染色体异常细胞和染色体畸变率均与阴性对照组无明显差异。综合评价,马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3属于实际无毒级,并且不存在遗传毒性、致突变和致癌性。 展开更多
关键词 马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3 益生菌 功能食品原料 毒理学 安全性评价
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益生菌在改善阿尔茨海默病中的研究进展 被引量：2
4
作者 贾龙刚 王远望 +2 位作者 方伟 耿伟涛 王艳萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第23期287-295,共9页
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是目前世界上患者数量多、影响范围广的一种神经退行性疾病,其致病机理至今仍未完全解析。大量研究表明肠道菌群可通过肠-脑轴调节机体大脑的发育与健康。益生菌是一类对人体有益的、活的微生物,... 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是目前世界上患者数量多、影响范围广的一种神经退行性疾病,其致病机理至今仍未完全解析。大量研究表明肠道菌群可通过肠-脑轴调节机体大脑的发育与健康。益生菌是一类对人体有益的、活的微生物,对维持肠道微生态平衡具有重要的意义。近年来,益生菌及其代谢产物或益生菌发酵食品在改善AD等神经退行性疾病方面受到了极大的关注。本文综述了近5年来国内外利用单种、多种益生菌、益生菌发酵食品、益生菌与其他药物联合用于改善AD的研究进展,并阐述了相关作用机制和存在的问题,以期为益生菌用于预防和治疗AD提供新的思路。 展开更多
关键词 益生菌 阿尔茨海默病 肠-脑轴 肠道微生态 免疫调节
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假小链双歧杆菌W112对免疫检查点阻断疗法的促进作用研究
5
作者 吕梦欣 吴江涛 +3 位作者 赵婧琦 贾龙刚 王艳萍 耿伟涛 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期10-17,共8页
该研究分析了一株假小链双歧杆菌W112对PD-1抗体免疫治疗的促进作用。首先通过在小鼠背部皮下注射B16-F10黑色素瘤细胞建立黑色素瘤小鼠模型,随后对肿瘤小鼠进行PD-1抗体治疗、灌胃假小链双歧杆菌W112及两者联合处理。结果表明,灌胃假... 该研究分析了一株假小链双歧杆菌W112对PD-1抗体免疫治疗的促进作用。首先通过在小鼠背部皮下注射B16-F10黑色素瘤细胞建立黑色素瘤小鼠模型,随后对肿瘤小鼠进行PD-1抗体治疗、灌胃假小链双歧杆菌W112及两者联合处理。结果表明,灌胃假小链双歧杆菌W112提高了PD-1抗体对肿瘤的抑制率,增加了小鼠的存活率,增加了肿瘤组织的CD8+T细胞浸润,并增加了肿瘤组织白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的富集。收集小鼠粪便并进行宏基因组测序分析发现,灌胃假小链双歧杆菌W112提高了小鼠肠道菌群的多样性,促进了有益菌的富集,降低了有害菌的富集。该研究表明,假小链双歧杆菌W112在促进免疫检查点疗法中具有一定的潜力。 展开更多
关键词 假小链双歧杆菌W112 肠道菌群 黑色素瘤 免疫治疗
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雷斯青霉NADPH-细胞色素P450还原酶基因的克隆及生物信息学分析 被引量：1
6
作者 贾龙刚 姜海琪 +3 位作者 郭凯 许喆 刘晓光 路福平 《天津科技大学学报》 CAS 北大核心 2016年第1期27-30,共4页
工业上利用丝状真菌雷斯青霉(Penicillium raistrickii)转化生产高效避孕药孕二烯酮的关键中间体15α–羟基左旋乙基甾烯双酮.已知参与雷斯青霉甾体转化反应的关键酶为P450羟化酶,该羟化酶体系由细胞色素P450羟化酶和NADPH–细胞色素P45... 工业上利用丝状真菌雷斯青霉(Penicillium raistrickii)转化生产高效避孕药孕二烯酮的关键中间体15α–羟基左旋乙基甾烯双酮.已知参与雷斯青霉甾体转化反应的关键酶为P450羟化酶,该羟化酶体系由细胞色素P450羟化酶和NADPH–细胞色素P450还原酶(CPR)组成,但有关其15α–羟基化反应的分子基础尚不清楚.根据转录组测序数据库,通过RT-PCR扩增克隆了一个雷斯青霉NADPH-细胞色素P450还原酶基因.该基因的开放阅读框为2,082,bp,编码694个氨基酸的多肽链,预测的蛋白相对分子质量为7.63×104,具有CPR蛋白的典型结构域(FMN结合域、FAD和NADPH结合域).NCBI BLAST结果显示雷斯青霉CPR与意大利青霉(P.,italicum)NADPH–细胞色素P450还原酶具有较高的同源性,一致性为93%. 展开更多
关键词 15α-羟基左旋乙基甾烯双酮 细胞色素P450还原酶 雷斯青霉 RT-PCR
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循环流化床发展段物料簇团形状的冷态实验研究
7
作者 石莹莹 李海广 贾龙刚 《科学技术与工程》 北大核心 2015年第2期222-226,共5页
采用实验方法,对流化床发展段流动壁面进行图像分析,以了解颗粒簇团在壁面的流动形态。试验结果表明:颗粒簇团形状变化随风量的变化较为显著;簇团形状随风量的增大由松散、颗粒浓度小、变为密集、颗粒浓度较大;簇团数目随风量的增大而... 采用实验方法,对流化床发展段流动壁面进行图像分析,以了解颗粒簇团在壁面的流动形态。试验结果表明:颗粒簇团形状变化随风量的变化较为显著;簇团形状随风量的增大由松散、颗粒浓度小、变为密集、颗粒浓度较大;簇团数目随风量的增大而变小。同时,颗粒簇团频率随高度的变化较小,颗粒簇团频率会随着床层高度的增加而有较小的减弱趋势。 展开更多
关键词 循环流化床 图像处理 颗粒簇团 风量
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基于β-内酰胺酶构建大肠杆菌体内Aβ42聚集抑制剂筛选体系
8
作者 赵文平 贾龙刚 +1 位作者 路福平 刘夫锋 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期17-24,共8页
淀粉样β蛋白(Aβ)的错误折叠和聚集是导致阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的主要原因,开发Aβ聚集抑制剂对于缓解和治疗AD至关重要。根据TEM1-β-内酰胺酶(TEM1-β-lactamase,βlac)的结构特征及Aβ42的聚集特性,利用分子生物... 淀粉样β蛋白(Aβ)的错误折叠和聚集是导致阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的主要原因,开发Aβ聚集抑制剂对于缓解和治疗AD至关重要。根据TEM1-β-内酰胺酶(TEM1-β-lactamase,βlac)的结构特征及Aβ42的聚集特性,利用分子生物学方法将Aβ42插入到βlac 196-197氨基酸残基之间,构建了BL21-βlac-Aβ42重组菌株。利用已知Aβ42聚集抑制剂,分别通过斑点滴定实验、平板涂布实验和菌体浓度变化检测实验进行了验证。结果显示,添加已知Aβ42抑制剂后,BL21-βlac-Aβ42菌株在特定氨苄青霉素(ampicillin, Amp)浓度条件下生长状况得到改善,允许微生物细胞生长的最大细胞稀释倍数增大,证明该融合体系能应用于大肠杆菌体内筛选Aβ42聚集抑制剂。该研究实现了淀粉样蛋白聚集抑制剂在微生物体内的高通量筛选,为开发新型抗Aβ聚集药物奠定了基础。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 淀粉样β蛋白42 (Aβ42) TEM1-β-内酰胺酶(βlac) 融合蛋白表达 聚集抑制剂 大肠杆菌体内筛选系统
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α-突触核蛋白的高效表达纯化及表征
9
作者 贾龙刚 王英 +1 位作者 路福平 刘夫锋 《天津科技大学学报》 CAS 2020年第2期1-5,12,共6页
突触核蛋白的错误折叠和聚集形成不溶性的淀粉样纤维与帕金森病的发生和发展密切相关。对α-突触核蛋白结构与功能的深入研究及开发抗聚集药物成为当今研究的热点,因此需要大量的蛋白样品。本文提供了一种简便、高效的α-突触核蛋白在... 突触核蛋白的错误折叠和聚集形成不溶性的淀粉样纤维与帕金森病的发生和发展密切相关。对α-突触核蛋白结构与功能的深入研究及开发抗聚集药物成为当今研究的热点,因此需要大量的蛋白样品。本文提供了一种简便、高效的α-突触核蛋白在大肠杆菌中的表达纯化方法,并利用硫磺素T荧光检测和细胞毒理学实验进一步证明了该重组蛋白具有良好的聚集性,且形成的聚集体具有较强的细胞毒性。该重组蛋白可广泛应用于研究其聚集特性及筛选聚集抑制剂等方面。 展开更多
关键词 帕金森病 Α-突触核蛋白 大肠杆菌 表达与纯化 聚集特性 细胞毒性
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一种对HepG2细胞生长有抑制作用的玉米六肽
10
作者 王华丽 王一玮 +4 位作者 王萌 耿伟涛 王金菊 贾龙刚 王艳萍 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2021年第12期8-13,共6页
采用DEAE-FF离子交换和Sephdax G-15葡聚糖凝胶层析方法,从玉米肽中分离、纯化,获得具有抑制HepG2细胞增殖活性的短肽,采用高效液相色谱串联质谱电喷雾法(liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry,LC-E... 采用DEAE-FF离子交换和Sephdax G-15葡聚糖凝胶层析方法,从玉米肽中分离、纯化,获得具有抑制HepG2细胞增殖活性的短肽,采用高效液相色谱串联质谱电喷雾法(liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry,LC-ESI-MS/MS)对其活性片段进行结构鉴定。结果表明:其短肽的一级结构为LPPYLP[命名为玉米六肽(corn peptides-6,CPs-6)],通过四唑盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]比色法试验发现,CPs-6具有抑制HepG2细胞增殖的效果,且对L-02细胞的毒性低。 展开更多
关键词 玉米活性肽(CPs-6) HepG2抑制作用 肝癌细胞 活性肽 肽的分离纯化
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