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新疆乌鲁木齐地区马疱疹病毒1型、马动脉炎病毒、马流感病毒感染的血清学调查 被引量：5
1
作者 王雪竹 加尔肯 +8 位作者 刘建华 胡月 孙佳琪 王旭蕾 车传忠 郑学功 贾钦瑞 祖力亚江·阿不都热合曼 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期998-1002,共5页
为了解新疆乌鲁木齐地区马疱疹病毒1型(EHV-1)、马动脉炎病毒(EAV)、马流感病毒(EIV)的感染现状和特点,本研究采集该地区676份马血清样品,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和血凝抑制试验(HI)进行上述病毒的血清抗体的检测,采用统计学... 为了解新疆乌鲁木齐地区马疱疹病毒1型(EHV-1)、马动脉炎病毒(EAV)、马流感病毒(EIV)的感染现状和特点,本研究采集该地区676份马血清样品,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和血凝抑制试验(HI)进行上述病毒的血清抗体的检测,采用统计学方法分析不同地区、年龄、性别及品种马的EHV-1、EAV、EIV的抗体阳性率。结果显示,新疆乌鲁木齐地区马群EHV-1、EAV、EIV及EHV-1+EIV抗体阳性率分别为39.35%(266/676)、0(0/676)、40.53%(274/676)、24.85%(168/676)。其中,南山景区、乌鲁木齐县、达坂城区马群感染EHV-1的抗体阳性率分别为44.44%(72/162)、57.89%(88/152)、66.67%(52/78),显著高于新市区16.00%(32/200)和米东区26.19%(22/84)(p<0.05);米东区、南山景区、乌鲁木齐县、达坂城区马群感染EIV的抗体阳性率分别为58.00%(58/84)、57.00%(57/162)、47.37%(95/152)、41.03%(32/78),显著高于新市区16.00%(32/200)(p<0.05);1岁以内马驹EHV-1、EIV及EHV-1+EIV抗体阳性率最高,分别为50.00%(20/40)、77.50%(31/40)、32.50%(13/40),显著高于其它年龄的马(p<0.05)。10岁以上马EHV-1、EIV及EHV-1+EIV抗体阳性率最低,分别为26.05%(31/119)、33.61%(40/119)、14.29%(17/119);母马感染EHV-1、EIV的抗体阳性率分别为54.21%(58/107)、67.29%(72/107),显著高于公马36.56%(208/569)、35.50%(202/569)(p<0.05);本地品种哈萨克马EHV-1、EIV及EHV-1+EIV抗体阳性率最高,分别为54.95%(200/364)、54.67%(199/364)、35.71%(130/364),显著高于其他品种的马(p<0.05)。除混血马外,其它品种的马均存在不同程度的EIV感染;伊犁马EIV和EHV-1+EIV抗体阳性率最低,均为9.09%(2/22),显著低于其它品种的马(p<0.05);不同地区、年龄、性别及品种的马EHV-1、EIV感染率差异显著(p<0.05)。本研究为该地区这3种马传染病的研究和防控提供数据参考。 展开更多
关键词 马疱疹病毒 马流感病毒 马动脉炎病毒 酶联免疫吸附试验
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马疱疹病毒1型主要毒力基因分析及TK基因缺失载体的构建 被引量：4
2
作者 范斌 陈卓 +5 位作者 刘建华 鲍子磊 胡月 贾钦瑞 王雪竹 冉多良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第10期2681-2690,共10页
为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)主要毒力基因遗传进化情况并构建TK基因缺失株,本研究以EHV-1XJ2015株DNA为模板,对其主要毒力基因TK、gI和gE全长进行克隆、测序及生物信息学分析,并扩增TK基因左右重组臂TKL和TKR,构建质粒pUC-TKLR,将... 为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)主要毒力基因遗传进化情况并构建TK基因缺失株,本研究以EHV-1XJ2015株DNA为模板,对其主要毒力基因TK、gI和gE全长进行克隆、测序及生物信息学分析,并扩增TK基因左右重组臂TKL和TKR,构建质粒pUC-TKLR,将扩增后的增强绿色荧光蛋白(EGFP,含有CMV+polyA)插入pUC-TKLR质粒,构建TK基因缺失打靶质粒。TK、gI和gE基因同源性分析结果显示,XJ2015株与国外EHV-1分离株TK、gI和gE基因同源性均较高,分别为99.8%~100.0%、99.6%~100.0%和99.9%~100.0%;与EHV-3分离株同源性均最低,分别为72.9%、59.4%和62.1%;遗传进化分析显示,3个基因均与国外EHV-1同属于一个遗传进化分支,与EHV-9和EHV-4进化关系较近,但与EHV-3进化关系较远,表明XJ2015毒株与国外EHV-1毒株TK、gI、gE基因核苷酸上差异不明显,没有明显的地域性特征,功能基因保守且进化缓慢,同源基因功能相同或相近;经PCR扩增、酶切、测序及转染鉴定,本试验成功构建了用于TK基因缺失的打靶质粒pUC-TKLR-EGFP。通过对EHV-1主要毒力基因的分析及TK基因缺失打靶载体的构建,为新疆地区马鼻肺炎流行病学调查分析、TK基因缺失株的构建提供理论依据。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型(EHV-1) 序列分析 基因缺失载体
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含EGFP基因的马疱疹病毒1型新疆株gE基因缺失株的构建 被引量：3
3
作者 范斌 鲍子磊 +3 位作者 贾钦瑞 刘建华 贺笋 冉多良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第8期2652-2659,共8页
为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CM... 为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CMV+EGFP+polyA)为标记基因,酶切后依次连接至载体pUC-19,成功构建重组质粒pUC-gEH1H2-EGFP。将XJ2015基因组与质粒pUC-gEH1H2-EGFP共转染至RK-13细胞进行同源重组,以EGFP为标记进行gE基因缺失毒株的筛选及纯化,并测定重组毒株效价。结果显示:经5轮荧光噬斑纯化、PCR及测序鉴定,成功获取一株携带EGFP基因的重组毒株XJ2015-△gE-EGFP,且重组毒株效价(107.1TCID50/0.1 mL)较原毒株(108.8TCID50/0.1 mL)下降约101.7TCID50/0.1 mL。采用同源重组技术成功构建了1株马疱疹病毒1型流行株gE基因缺失突变株,为未来筛选马鼻肺炎基因缺失弱毒疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 马鼻肺炎 马疱疹病毒1型(EHV-1) gE基因缺失
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马疱疹病毒1型gp2基因分子特征
4
作者 刘建华 吴桂灵 +6 位作者 胡月 加尔肯 贾钦瑞 孙文程 撒瑞雪 张嗣玉 冉多良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第6期19-24,28,共7页
为了探索α疱疹病毒亚科的马疱疹病毒特有基因gp2的功能及分子结构,本试验以EHV-1 XJ2015株为研究对象,扩增其gp2基因并测序,继而进行遗传进化分析、氨基酸序列差异性分析和蛋白质性质分析。结果显示,30株EHV-1病毒gp2蛋白氨基酸序列相... 为了探索α疱疹病毒亚科的马疱疹病毒特有基因gp2的功能及分子结构,本试验以EHV-1 XJ2015株为研究对象,扩增其gp2基因并测序,继而进行遗传进化分析、氨基酸序列差异性分析和蛋白质性质分析。结果显示,30株EHV-1病毒gp2蛋白氨基酸序列相似性达90.38%;gp2蛋白预测包括1个信号肽、1个螺旋跨膜结构域和1个核外运信号;gp2蛋白二级结构以无规卷曲为主,高达88%,极性分子居多,亲水性氨基酸占52.02%,第25~130位和第273~565位氨基酸亲水性和抗原性较强,易形成潜在的抗原表位。由此可见,gp2基因属于EHV-1较保守的基因,gp2蛋白是分泌型蛋白,且具有良好的抗原性。本试验为进一步解析EHV-1 gp2基因及其编码蛋白功能、制作基因工程疫苗和诊断试剂提供了生物信息学依据。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型 gp2基因 分子结构 功能 生物信息学分析
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牛蛙皮肤显微及超微结构研究 被引量：1
5
作者 翟少华 贾钦瑞 +1 位作者 李淑娴 姚刚 《野生动物学报》 北大核心 2018年第1期105-109,共5页
依次采用了苏木紫-伊红(HE)染色法、Masson氏三色法,Mallory磷钨酸苏木紫染色法对牛蛙的皮肤组织结构进行研究;并通过透射电镜技术,观察不同部位皮肤的超微结构差异。通过研究结果显示,牛蛙皮肤的表皮结构从内到外依次为基底层、棘细胞... 依次采用了苏木紫-伊红(HE)染色法、Masson氏三色法,Mallory磷钨酸苏木紫染色法对牛蛙的皮肤组织结构进行研究;并通过透射电镜技术,观察不同部位皮肤的超微结构差异。通过研究结果显示,牛蛙皮肤的表皮结构从内到外依次为基底层、棘细胞层、颗粒层、角质层。牛蛙的真皮层有大量的腺体,主要为黏液腺和颗粒腺,此外还有大量的黑色素散布于真皮层中。通过牛蛙皮肤各部位测量数据分析显示,牛蛙皮肤不同部位间存在显著差异。通过对牛蛙的皮肤组织形态学研究,可以为皮肤及皮下组织细胞间形态学的研究提供研究基础。 展开更多
关键词 牛蛙 皮肤 组织形态学染色
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马疱疹病毒1型gp2基因缺失株的构建及生长特性分析 被引量：1
6
作者 胡月 贾钦瑞 +4 位作者 吴桂灵 车传忠 刘建华 加尔肯 冉多良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1242-1246,1263,共6页
构建针对马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1,EHV-1)XJ2015株的转移载体pUC-gp2^(-)LR和pUC-gp2^(-)LR-EGFP;将EHV-1 XJ2015基因组与pUC-gp2^(-)LR-EGFP共转染至RK-13细胞,利用EGFP基因筛选获得EHV-1 XJ2015-gp2^(-)/EGFP+毒株,以此毒... 构建针对马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1,EHV-1)XJ2015株的转移载体pUC-gp2^(-)LR和pUC-gp2^(-)LR-EGFP;将EHV-1 XJ2015基因组与pUC-gp2^(-)LR-EGFP共转染至RK-13细胞,利用EGFP基因筛选获得EHV-1 XJ2015-gp2^(-)/EGFP+毒株,以此毒株基因组与pUC-gp2^(-)LR共转染至RK-13细胞,筛选去除EGFP基因的EHV-1 XJ2015-gp2^(-)毒株并通过生长曲线、蚀斑形态、易感细胞连续传代评价其增殖能力和遗传稳定性。结合荧光观察、空斑纯化和PCR检测,获得能稳定遗传的EHV-1 XJ2015-gp2^(-),该毒株的生长曲线与亲本株存在差异,增殖能力下降约2个病毒滴度;两者的空斑面积平均值分别为0.378 mm^(2)和1.698 mm^(2),差异极显著(P<0.01)。结果表明,成功获得EHV-1 gp2基因缺失株,该毒株的体外生长动力学较亲本毒弱,为研制EHV-1减毒活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型 gp2基因 基因缺失 生物学特性
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马疱疹病毒1型XJ2015株的增殖、纯化及鉴定
7
作者 贾钦瑞 鲍子磊 +3 位作者 车传忠 郑学功 翟少华 冉多良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期282-285,共4页
目的评价蔗糖密度梯度离心法对马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1,EHV-1)XJ2015株的纯化效果。方法病毒增殖后,收获病毒液,经硫酸铵浓缩、蔗糖密度梯度离心法纯化EHV-1,电镜下观察病毒形态,SDS-PAGE、Western blot、BCA及马体致病性... 目的评价蔗糖密度梯度离心法对马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1,EHV-1)XJ2015株的纯化效果。方法病毒增殖后,收获病毒液,经硫酸铵浓缩、蔗糖密度梯度离心法纯化EHV-1,电镜下观察病毒形态,SDS-PAGE、Western blot、BCA及马体致病性试验鉴定病毒纯化效果。结果纯化后的EHV-1电镜下可见完整的病毒颗粒且形态典型,直径约120 nm,效价可达10^(10.02) TCID_(50)/0.1 mL,回收率为61.7%;SDS-PAGE及Western blot分析显示,纯化病毒杂蛋白显著减少且具有良好的反应原性;纯化后病毒感染马匹出现原发性感染临床症状并出现排毒现象。结论利用蔗糖密度梯度离心法可获得高纯度的纯化病毒株EHV-1-XJ-2015,为进一步研究EHV-1的致病机理及减毒、灭活疫苗的研发提供了参考。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型 蔗糖密度梯度离心 纯化 鉴定
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EHV-1-XJ2015株在不同细胞系中增殖规律研究
8
作者 鲍子磊 刘建华 +3 位作者 王雪竹 车传忠 贾钦瑞 冉多良 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第1期84-86,155,共4页
为了研究马疱疹病毒1型(Equine herpesvirus 1,EHV-1)在不同细胞系中的增殖规律,试验将该病毒分别接种至Vero细胞、BHK-21细胞和MDBK细胞中进行连续传代培养,观察细胞病变(CPE)情况;对第3代收获的病毒gE基因进行PCR检测及同源性比对;按... 为了研究马疱疹病毒1型(Equine herpesvirus 1,EHV-1)在不同细胞系中的增殖规律,试验将该病毒分别接种至Vero细胞、BHK-21细胞和MDBK细胞中进行连续传代培养,观察细胞病变(CPE)情况;对第3代收获的病毒gE基因进行PCR检测及同源性比对;按照Reed-Meunch方法分别测量3种细胞7个时间点的TCID_(50),并绘制一步生长曲线。结果表明:EHV-1对3种细胞有很好的亲嗜性,产生明显CPE;3种细胞都扩增出大小为438 bp的片段,与所选的参考株同源性在99.99%以上;EHV-1在感染3种细胞后0~12 h进入静止期,12~48 h进入快速增长期;感染BHK-21细胞后在36小时时达到最高病毒毒价,TCID_(50)为1×10^(-8.40)/0.1 mL,感染MDBK细胞及Vero细胞后在48小时时达到最高病毒毒价,TCID_(50)分别为1×10^(-7.35)/0.1 mL和1×10^(-5.80)/0.1 mL。说明BHK-21细胞适合作为EHV-1-XJ2015株体外研究的细胞系。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型 细胞病变 细胞系 病毒毒价 一步生长曲线
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