基于SemlikiForest病毒RNA复制子的猪瘟RNA疫苗的初步研究 被引量：11

1

作者 李娜 仇华吉 +4 位作者 李国新 朱庆虎 罗玉子 贾洪林 童光志 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期53-58,共6页

将猪瘟病毒E2基因克隆于我们此前构建的衍生于Semliki Forest病毒(semliki forest virus,SFV)RNA复制子的新型真核表达载体pSFV1CS中,获得重组质粒pSFV1CS-E2。用纯化的pSFV1CS-E2分别转染BHK-21细胞和293T细胞,经间接免疫荧光试验检测... 将猪瘟病毒E2基因克隆于我们此前构建的衍生于Semliki Forest病毒(semliki forest virus,SFV)RNA复制子的新型真核表达载体pSFV1CS中,获得重组质粒pSFV1CS-E2。用纯化的pSFV1CS-E2分别转染BHK-21细胞和293T细胞,经间接免疫荧光试验检测显示,CSFV E2基因在转染细胞中得到表达。小鼠接种试验结果表明,10μg或100μg pSFV1CS-E2可诱导小鼠产生猪瘟特异性抗体。 展开更多

关键词 Semliki Forest病毒 RNA复制子 猪瘟 RNA疫苗 猪瘟病毒 真核表达载体

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猪瘟研究近况(上) 被引量：5

2

作者 仇华吉 李赞 +1 位作者 贾洪林 朱庆虎 《畜牧兽医科技信息》 2004年第12期54-55,共2页

关键词 猪瘟病毒 CSFV OIE 黄病毒科 烈性传染病 中国 流行 研究近况 HCV 甲类传染病

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基于重组E^(rns)蛋白的猪瘟E^(rns)-ELISA的建立和优化 被引量：2

3

作者 贾洪林 仇华吉 +6 位作者 朱庆虎 李国新 李娜 罗玉子 刘永刚 李艳 童光志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1028-1032,共5页

将大肠杆菌表达的猪瘟病毒重组Erns蛋白经纯化后作为包被抗原,建立了检测猪瘟抗体的Erns-ELISA方法。经优化试验,确定了最适抗原包被量为0.15μg;血清最适稀释度为1∶100。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验证明,建立的Erns-ELISA... 将大肠杆菌表达的猪瘟病毒重组Erns蛋白经纯化后作为包被抗原,建立了检测猪瘟抗体的Erns-ELISA方法。经优化试验,确定了最适抗原包被量为0.15μg;血清最适稀释度为1∶100。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验证明,建立的Erns-ELISA简便、特异、稳定,与基于重组E2蛋白的E2-ELISA的符合率高达96.7%,与基于全病毒抗原的Dot-ELISA符合率为77.5%。可以用于猪瘟抗体的血清学监测以及用作基于E2蛋白的标记疫苗配套的鉴别诊断。 展开更多

关键词 猪瘟 E^rns-ELISA 鉴别诊断

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体外弓形虫感染小鼠巨噬细胞对其极化的影响 被引量：6

4

作者 祝瑶 胡守萍 +4 位作者 张交儿 张卓 郑君 贾洪林 何希君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期475-478,共4页

为探索体外弓形虫感染小鼠巨噬细胞对其极化的影响,本研究采用M-CSF诱导分离的小鼠骨髓细胞分化为巨噬细胞,在体外以弓形虫感染骨髓来源的巨噬细胞,分别于感染后0 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h收集细胞和细胞培养液,利用Griess法和Ar... 为探索体外弓形虫感染小鼠巨噬细胞对其极化的影响,本研究采用M-CSF诱导分离的小鼠骨髓细胞分化为巨噬细胞,在体外以弓形虫感染骨髓来源的巨噬细胞,分别于感染后0 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h收集细胞和细胞培养液,利用Griess法和Arginase活性试验对i NOS和Arginase-1的酶活性进行检测。通过荧光定量PCR和western blot方法分别从m RNA水平和蛋白水平测定巨噬细胞中i NOS和Arginase-1的表达量。结果显示,弓形虫感染巨噬细胞后细胞中的Arginase-1的m RNA和蛋白含量均显著上调表达,i NOS的m RNA虽有短暂小幅度上调,但蛋白的含量无明显变化。本研究表明弓形虫感染巨噬细胞后能够明显诱导静息状态的巨噬细胞朝向M2型的方向极化,从而改变巨噬细胞的表型和功能。本研究为进一步阐明弓形虫与机体免疫系统相互作用提供了实验依据。 展开更多

关键词 弓形虫 巨噬细胞 极化

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新型猪瘟疫苗研究现状 被引量：4

5

作者 贾洪林 仇华吉 +2 位作者 李娜 张守发 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期312-316,共5页

关键词 研究现状 猪瘟疫苗 20世纪70年代 virus 烈性传染病 动物传染病 国际兽疫局 非典型猪瘟 养猪业 猪瘟病毒 主要特征 根除措施 产品贸易 CSFV 新型疫苗 死亡率 全球化 持久性 集约化 散发性 流行 生猪 猪群

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弓形虫SAG1和GRA4基因的原核表达及其重组猫疱疹病毒Ⅰ型转移载体的构建 被引量：5

6

作者 高洋 程子英 +3 位作者 王铭 郑君 贾洪林 鲁承 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期886-890,共5页

为构建表达弓形虫抗原的重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移载体,本研究以pBluesciptⅡ-SK(-)为骨架载体,分别插入FHV-1 TK基因的5'(2 000 bp)和3'(1 700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒以及弓形虫RH株SAG1或... 为构建表达弓形虫抗原的重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移载体,本研究以pBluesciptⅡ-SK(-)为骨架载体,分别插入FHV-1 TK基因的5'(2 000 bp)和3'(1 700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒以及弓形虫RH株SAG1或GRA4基因,构建重组FHV-1的转移载体pBS-TK-SAG1和pBS-TK-GRA4。将其分别转染于293T细胞,通过原核细胞表达的截短SAG1和GRA4重组蛋白制备的鼠多克隆抗体进行western blot鉴定。结果显示,制备的弓形虫SAG1和GRA4多克隆抗体能够特异性识别重组表达和虫体表达的天然的SAG1和GRA4两种弓形虫蛋白,分子量一致,分别为35 ku和45 ku。本研究为表达弓形虫RH株SAG1和GRA4基因的猫重组疱疹病毒Ⅰ型载体疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 SAG1 GRA4 猫疱疹病毒I型 转移载体

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猪瘟E^(rns)基因在大肠杆菌中的高效表达 被引量：4

7

作者 贾洪林 仇华吉 +3 位作者 李娜 朱庆虎 罗玉子 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期161-163,共3页

提取猪瘟病毒石门系强毒株的基因组RNA,用RT_PCR扩增其Erns基因的cDNA,将其克隆到原核表达载体pPROEXTMHTc中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,Erns基因获得高效表达。SDS_PAGE分析显示,表达的重组融合蛋白表现分子量约为31ku。Wester... 提取猪瘟病毒石门系强毒株的基因组RNA,用RT_PCR扩增其Erns基因的cDNA,将其克隆到原核表达载体pPROEXTMHTc中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,Erns基因获得高效表达。SDS_PAGE分析显示,表达的重组融合蛋白表现分子量约为31ku。Westernblot分析表明,重组蛋白具有良好的免疫原性。重组蛋白可用于制备诊断抗原,用于标记疫苗接种和野毒感染的鉴别诊断。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 RT-PCR 原核表达 E^rns基因 大肠杆菌 鉴别诊断

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弓形虫Rop46基因敲除虫株的构建及其生长复制能力评价 被引量：3

8

作者 王成双 马秀英 +2 位作者 郑君 贾洪林 王新 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期312-315,共4页

棒状体蛋白(Rops)是弓形虫的一类与侵入、复制相关的重要分泌蛋白。Rop46蛋白在弓形虫急性感染阶段和慢性感染阶段的表达存在显著差异。为探究Rop46的生物学功能,本研究采用CRISPR/Cas9技术构建了Rop46基因敲除重组质粒,制备了Rop46基... 棒状体蛋白(Rops)是弓形虫的一类与侵入、复制相关的重要分泌蛋白。Rop46蛋白在弓形虫急性感染阶段和慢性感染阶段的表达存在显著差异。为探究Rop46的生物学功能,本研究采用CRISPR/Cas9技术构建了Rop46基因敲除重组质粒,制备了Rop46基因缺失虫株。序列分析表明,基因缺失虫株中的Rop46基因的编码序列缺失了82个碱基,证明本研究构建的基因敲除重组质粒能够有效的在弓形虫PLK虫株中敲除目的基因。利用流式细胞术对Rop46基因缺失虫株的生长特性进行检测和分析,结果显示Rop46基因缺失虫株的侵入和复制效率显著降低,表明缺失Rop46基因可能对PLK虫株的侵入及复制能力具有显著影响。 展开更多

关键词 弓形虫 Rop46 CRISPR/Cas9

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弓形虫酵母双杂交cDNA文库构建及与AMA1羧基端相互作用蛋白的筛选 被引量：3

9

作者 程子英 高洋 +3 位作者 王铭 郑君 贾洪林 赵权 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期201-204,共4页

为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107cfu/mL。以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化... 为筛选弓形虫AMA1基因羧基端(AMA1c)在弓形虫中的相互作用分子,本研究采用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了弓形虫RH株酵母双杂交cDNA文库,文库滴度达到4.26×107cfu/mL。以构建的pGBKT7-AMA1c诱饵质粒,使用PEG/LiAc法转化酵母菌株Y2H,利用表型筛选法检测AMA1c的自激活作用并进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆,根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证。结果表明,诱饵蛋白在酵母双杂交系统中具有无毒性和自激活作用,而且通过酵母双杂交筛选共得到13个与AMA1c蛋白相互作用的虫体蛋白。本研究结果为进一步研究AMA1c的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 AMA1羧基端 酵母双杂交 自激活

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小球隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P15基因的克隆和表达 被引量：1

10

作者 张守发 鞠玉琳 贾洪林 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期175-177,共3页

通过 PCR扩增出小球隐孢子虫 (Cryptosporidium parvum) P1 5基因片段。将该片段连接到克隆质粒载体 p U C1 9的 Bam H 酶切位点上 ,并对其序列进行了测定。结果表明 ,该基因长度为 4 79bp,编码的表面蛋白由 1 4 8个氨基酸残基组成。再... 通过 PCR扩增出小球隐孢子虫 (Cryptosporidium parvum) P1 5基因片段。将该片段连接到克隆质粒载体 p U C1 9的 Bam H 酶切位点上 ,并对其序列进行了测定。结果表明 ,该基因长度为 4 79bp,编码的表面蛋白由 1 4 8个氨基酸残基组成。再将 P1 5蛋白基因片段分别在大肠杆菌和哺乳动物细胞中表达 ,经 SDS- PAGE分析和 Western blot检测 ,结果表明 ,小球隐孢子虫 P1 5蛋白基因在大肠杆菌内获得表达的融合蛋白相对分子质量为 5 0 0 0 0 ;在哺乳动物细胞中 ,重组痘病毒表达的蛋白相对分子质量为 1 80 0 0～ 2 2 0 0 0 ,与直接从自然感染牛小球隐孢子虫分离的 P1 展开更多

关键词 小球隐孢子虫 P15基因 基因克隆 基因表达 序列分析

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基于CRISPR/Cas9技术构建犬IRGM4、IRGM5和IRGM6基因敲除的MDCK细胞系 被引量：3

11

作者 徐广军 曹世诺 +3 位作者 郑君 张险峰 贾洪林 郑永辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期45-49,共5页

由干扰素诱导细胞产生的GTP蛋白酶M(IRGMs)在抵御病原微生物中发挥着核心作用。为建立IRGMs基因缺失的MDCK细胞系,本研究利用CRISPR/Cas9技术根据MDCK中IRGM4、IRGM5和IRGM6的基因序列设计并合成正链和负链引导RNA(gRNA)的靶DNA序列,以... 由干扰素诱导细胞产生的GTP蛋白酶M(IRGMs)在抵御病原微生物中发挥着核心作用。为建立IRGMs基因缺失的MDCK细胞系,本研究利用CRISPR/Cas9技术根据MDCK中IRGM4、IRGM5和IRGM6的基因序列设计并合成正链和负链引导RNA(gRNA)的靶DNA序列,以本实验室构建的含有单链引导RNA(sgRNA)骨架转录序列的通用质粒(p Gen-sgRNA)为模板,将U6启动子与合成的相关基因gRNA靶序列经PCR融合扩增,其产物再与sgRNA的骨架转录序列进行重叠延伸PCR扩增,并将扩增产物克隆于p GEM-T载体中,分别构建了具有靶向不同目的基因ORF的gRNA重组质粒。将这些重组质粒分别与pMJ920质粒共转染于MDCK细胞中,通过G418筛选和流式细胞仪分选,并以终点稀释法纯化培养筛选出的单细胞克隆株。经gRNA靶序列片段的测序鉴定,获得了目的基因敲除的MDCK细胞系,并分别命名为MDCK-IRGM4-、MDCK-IRGM5-和MDCKIRGM6-。通过western blot检测经γ干扰素诱导条件下的这3种IRGMs基因在敲除细胞系中相应的蛋白表达均为阴性。这3种MDCK细胞IRGMs敲除的细胞系的建立,为进一步研究IRGMs基因在抗细胞内病原微生物感染中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 MDCK IRGM4 IRGM5 IRGM6

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新孢子虫cDNAT7噬菌体展示文库的构建及筛选 被引量：2

12

作者 王铭 高洋 +3 位作者 程子英 郑君 贾洪林 宋铭忻 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期277-280,共4页

为筛选犬新孢子虫相关抗原,本研究利用T7噬菌体展示技术构建犬新孢子虫cDNA文库,并利用阳性血清筛选新型犬新孢子虫抗原蛋白。所构建的新孢子虫cDNA文库的原始文库重组克隆数为6×106pfu,扩增后文库滴度为3×1010pfu/mL。分别... 为筛选犬新孢子虫相关抗原,本研究利用T7噬菌体展示技术构建犬新孢子虫cDNA文库,并利用阳性血清筛选新型犬新孢子虫抗原蛋白。所构建的新孢子虫cDNA文库的原始文库重组克隆数为6×106pfu,扩增后文库滴度为3×1010pfu/mL。分别提取犬新孢子虫免疫小鼠血清和感染小鼠血清中的IgG,并利用纯化的IgG对构建的新孢子虫cDNA文库进行筛选。经过3轮筛选,共鉴定出14个不同的犬新孢子虫基因插入片段。经过分析,有7个基因编码的是功能未知蛋白,其它为蛋白质合成相关蛋白、核苷酸代谢相关蛋白、核糖体蛋白、微线体蛋白、棒状体蛋白和致密颗粒蛋白。对这些蛋白的进一步研究将有助于开发新孢子虫病的诊断试剂和疫苗。 展开更多

关键词 新孢子虫病 T7噬菌体展示文库 抗原候选基因

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免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫脑炎中的作用研究 被引量：2

13

作者 张永莉 胡薇 +6 位作者 刘强 马泽林 胡守萍 张卓 张险峰 贾洪林 何希君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1159-1163,共5页

免疫蛋白酶体在炎症性疾病模型中发挥重要作用。为研究免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫感染引起小鼠脑部炎症过程中的作用,本研究将36只BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只:对照组小鼠腹腔注射PBS,实验组小鼠腹腔注射弓形虫RH强毒株,于人工... 免疫蛋白酶体在炎症性疾病模型中发挥重要作用。为研究免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫感染引起小鼠脑部炎症过程中的作用,本研究将36只BALB/c小鼠随机分为3组,每组12只:对照组小鼠腹腔注射PBS,实验组小鼠腹腔注射弓形虫RH强毒株,于人工感染第2 d分别对实验组小鼠腹腔注射PBS(RH+PBS组)和PR-957(RH+PR-957组,免疫蛋白酶体亚基LMP7特异性抑制剂),分别于感染后第10 d和第23 d随机迫杀6只小鼠采集脑组织,western blot结果显示,RH+PR-957组小鼠的免疫蛋白酶体亚基LMP7在感染后第23 d时未见其表达被抑制;该组小鼠LMP10和LMP2表达量与RH+PBS组对比变化不大。小鼠存活率结果显示,RH+PR-957组小鼠存活率为67.7%,高于RH+PBS组和PBS组;脑组织病理学结果显示,RH+PBS组小鼠脑组织内有明显的血管套现象,RH+PR-957组小鼠脑组织有胶质细胞浸润和轻微的血管套现象;免疫组化结果显示,RH+PBS组小鼠脑组织中小胶质细胞的数量相比于RH+PR-957组增多,细胞突起变长、变粗,呈现高分枝状;荧光定量PCR结果显示,RH+PR-957组小鼠脑组织的促炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β和IL-6的RNA转录水平明显低于RH+PBS组。上述结果表明抑制免疫蛋白酶体亚基LMP7的表达可减弱弓形虫感染引起的小鼠脑部炎症。本研究为免疫蛋白酶体亚基LMP7在弓形虫性中枢神经系统疾病致病机理的研究奠定基础。 展开更多

关键词 小鼠 弓形虫 免疫蛋白酶体亚基LMP7抑制剂PR-957 促炎性细胞因子

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组织工程血管化基因治疗的研究进展 被引量：2

14

作者 李光照 陈锐 +1 位作者 贾洪林 任利玲 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2022年第28期4569-4574,共6页

背景:在大块工程化移植物内部迅速形成功能性血管系统,是其在宿主体内成功存活的基本前提。利用基因工程技术实现工程组织血管化具有治疗效果好、费用低、安全性高等优点,开展工程组织血管化基因治疗的相关研究对实现长期有效的组织修... 背景:在大块工程化移植物内部迅速形成功能性血管系统,是其在宿主体内成功存活的基本前提。利用基因工程技术实现工程组织血管化具有治疗效果好、费用低、安全性高等优点,开展工程组织血管化基因治疗的相关研究对实现长期有效的组织修复有着重大意义。目的:综述目前组织工程血管化基因治疗的种子细胞、目的基因和基因载体的研究现状及存在的主要问题,以期进一步探讨基因治疗在组织工程血管化中的应用前景。方法:在PubMed、Web of Science、CNKI上进行了文献检索,并以“Tissue engineering;Vascularization;Gene therapy;Seed cells;Target genes;Vectors”作为英文检索词,以“组织工程;血管化;基因治疗;种子细胞;目的基因;载体”作为中文检索词,对最终纳入的61篇文献进行了归纳总结。结果与结论:间充质干细胞、血管内皮细胞及内皮祖细胞是组织工程血管化基因治疗中最具潜力的种子细胞,不仅具有良好的血管诱导性,而且有利于多种病毒和非病毒载体的导入及血管化目的基因的表达。血管内皮生长因子、血管生成素1、碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2、缺氧诱导因子1α等血管化目的基因,主要通过双/多基因联合、成骨与成血管耦合及上游基因调控等方式在工程化移植物内部构建出高效、稳定的血管网络。由于不同的病毒和非病毒载体具有各自的优缺点,因此在应用时主要根据基因转染效率、生物安全性、成本等方面来选择合适的载体。目前,尽管基因治疗在组织工程血管化中的应用研究已取得很大进展,但是要真正应用于临床实践,还需要突破众多技术瓶颈,例如如何提高目的因子的释放靶向性和降低安全风险等,这也是未来组织工程血管化基因治疗的研究方向和热点。 展开更多

关键词 组织工程 血管化 基因治疗 种子细胞 目的基因 载体 综述

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基于生长素诱导降解系统条件性敲除弓形虫ATG6蛋白的研究 被引量：1

15

作者 陈运通 陈赫明 +3 位作者 付佳雯 庞宇 郑君 贾洪林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1015-1020,共6页

为构建生长素诱导降解系统的弓形虫条件性基因缺失虫株,本研究首先利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选获得Tg Ku80基因缺失虫株,然后采用该缺失虫株,利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选,将生长素诱导降解因子(AID)插入该弓形虫Tg A... 为构建生长素诱导降解系统的弓形虫条件性基因缺失虫株,本研究首先利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选获得Tg Ku80基因缺失虫株,然后采用该缺失虫株,利用CRISPR/Cas9方法和流式细胞术筛选,将生长素诱导降解因子(AID)插入该弓形虫Tg ATG6基因序列的5’端得到TgATG6条件性敲除虫株TgATG6-i KD。PCR扩增及测序结果显示,以TgATG6-iKD虫株为模板可扩增出AID标签,而在野生型虫株中,不能有效扩增该靶序列,经测序验证也得到相符结果,表明AID标签序列能够高效定点插入到弓形虫Tg Ku80基因缺失虫株中;通过蛋白免疫印迹试验能够在TgATG6条件性敲除虫株检测到AID标签和TgATG6蛋白的融合表达;蛋白免疫印迹试验及间接免疫荧光实验结果显示,利用生长素(NAA)能够快速诱导融合表达蛋白的降解。本研究通过蛋白N端融合AID共表达,建立了高效条件性敲除弓形虫基因的方法,为进一步研究弓形虫相关基因的功能奠定基础。 展开更多

关键词 弓形虫 植物生长激素 条件性敲除 TgATG6

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弓形虫翻译控制肿瘤蛋白促进组胺释放活性的研究 被引量：1

16

作者 陈亚萍 郑君 +1 位作者 贾洪林 鲁承 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期119-122,共4页

为研究弓形虫感染后产生炎性反应的分子机制,本研究将预测的弓形虫翻译控制肿瘤蛋白(TgTCTP)基因进行原核表达,并且利用竞争性ELISA检测方法鉴定重组TgTCTP蛋白(r TgTCTP)促进小鼠腹腔细胞释放组胺的活性反应。研究结果显示,TgTCTP定位... 为研究弓形虫感染后产生炎性反应的分子机制,本研究将预测的弓形虫翻译控制肿瘤蛋白(TgTCTP)基因进行原核表达,并且利用竞争性ELISA检测方法鉴定重组TgTCTP蛋白(r TgTCTP)促进小鼠腹腔细胞释放组胺的活性反应。研究结果显示,TgTCTP定位于弓形虫速殖子的胞浆内,以多聚体的形式存在;原核表达的r TgTCTP诱导小鼠腹腔细胞释放组胺的活性(22.225±2.358 ng/m L),显著高于GST蛋白组(10.956±2.819 ng/m L),结果表明表达的r TgTCTP能够促进小鼠腹腔细胞组胺的释放(p<0.01)。本研究为TgTCTP功能进一步的鉴定和弓形虫引起炎症反应的分子机制研究奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 TCTP 重组蛋白 组胺

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弓形虫Rop32与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选 被引量：1

17

作者 马秀英 郑君 +1 位作者 王成双 贾洪林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期471-474,共4页

弓形虫棒状体蛋白32(Rop32)是由弓形虫棒状体在感染细胞中分泌于宿主细胞中的磷酸激酶,但其功能尚不清楚。为筛选与Rop32相互作用的宿主蛋白,本研究利用构建的p GBKT7-Rop32诱饵质粒转化酵母菌株Y2H,通过表型从人包皮成纤维细胞文库中... 弓形虫棒状体蛋白32(Rop32)是由弓形虫棒状体在感染细胞中分泌于宿主细胞中的磷酸激酶,但其功能尚不清楚。为筛选与Rop32相互作用的宿主蛋白,本研究利用构建的p GBKT7-Rop32诱饵质粒转化酵母菌株Y2H,通过表型从人包皮成纤维细胞文库中筛选与Rop32相互作用的宿主蛋白。结果表明p GBKT7-Rop32诱饵质粒无自激活和细胞毒性作用。通过酵母双杂交,共筛选到12个与Rop32具有相互作用的宿主细胞蛋白。将筛选的阳性克隆进行序列分析结果表明,筛选到的蛋白包括1个参与蛋白转运相关蛋白、1个凋亡相关蛋白、1个细胞骨架蛋白、1个参与能量转化的磷酸转移酶以及8个其它蛋白。利用免疫共沉淀试验进一步验证了Rop32和SEC63蛋白之间的特异性相互作用。Rop32与参与蛋白转运的SEC63的相互作用提示Rop32可能在弓形虫对营养物质和代谢物的运输过程中发挥作用。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 Rop32 酵母双杂交技术 免疫共沉淀试验

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弓形虫ATG6基因敲除虫株的构建及其生长特性鉴定 被引量：1

18

作者 李昭然 曹世诺 +2 位作者 王铭 陈运通 贾洪林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期886-890,896,共6页

酵母ATG6蛋白是磷脂酰基醇-3激酶(PI3K)复合物Ⅰ的组成成分,在自噬起始阶段促进自噬小体的形成。为研究弓形虫ATG6同源蛋白(Tg ATG6)生物学功能,本研究首先构建进化树对Tg ATG6基因进行同源性分析,并通过构建稳定表达红色荧光的(ATG6-m ... 酵母ATG6蛋白是磷脂酰基醇-3激酶(PI3K)复合物Ⅰ的组成成分,在自噬起始阶段促进自噬小体的形成。为研究弓形虫ATG6同源蛋白(Tg ATG6)生物学功能,本研究首先构建进化树对Tg ATG6基因进行同源性分析,并通过构建稳定表达红色荧光的(ATG6-m Cherry)虫株,以检测Tg ATG6的亚细胞定位情况。通过CRISPR/Cas9技术制备Tg ATG6基因缺失虫株,采用流式细胞术对该虫株的生长特性进行检测。实验结果显示,Tg ATG6基因在进化关系上与植物来源的ATG6同源关系较近。Tg ATG6在虫体内呈弥散分布,经16 h饥饿诱导后,该蛋白在弓形虫体内发生聚集。经序列分析显示,成功获得了两种Tg ATG6基因缺失虫株(ΔTg ATG6-1和ΔTg ATG6-2)。在ΔTg ATG6-2虫株中,Tg ATG6基因开放阅读框的593~612位点之间插入了226 bp外源序列,而在ΔTg ATG6-2中,不能够有效扩增靶序列,表明两种突变虫株的Tg ATG6基因均被有效插入失活。此外,该基因的缺失可能影响了虫株侵入宿主细胞的能力。Tg ATG6基因缺失株的成功制备为进一步研究Tg ATG6蛋白功能奠定了基础。 展开更多

关键词 敲除 ATG6 自噬 弓形虫

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弓形虫酵母双杂交cDNA文库构建及与Rop38相互作用蛋白的筛选 被引量：1

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作者 徐健 马秀英 +1 位作者 郑君 贾洪林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期561-563,共3页

为筛选与弓形虫棒状体蛋白38基因(Rop38)相互作用的宿主细胞蛋白,本研究利用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了人成纤维细胞(HFF)和人T细胞(CEM.NKR)的c DNA文库,以构建的p GBKT7-Rop38作为诱饵质粒,采用PEG/Li Ac法转化酵母菌株Y... 为筛选与弓形虫棒状体蛋白38基因(Rop38)相互作用的宿主细胞蛋白,本研究利用MatchmakerTM Gold酵母双杂交系统,构建了人成纤维细胞(HFF)和人T细胞(CEM.NKR)的c DNA文库,以构建的p GBKT7-Rop38作为诱饵质粒,采用PEG/Li Ac法转化酵母菌株Y2H,利用表型筛选法检测Rop38的自激活作用并进行酵母双杂交筛选。结果表明,诱饵蛋白在酵母双杂交系统中无毒性和自激活作用,而且通过酵母双杂交筛选共获得29个与Rop38蛋白相互作用的宿主蛋白,其中HFF文库筛选到20个蛋白,CEM.NKR文库筛选到11个蛋白。本实验为进一步研究Rop38调节宿主细胞基因表达的信号通路奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 Rop38 酵母双杂交 自激活

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猪瘟研究近况(下) 被引量：1

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作者 仇华吉 李赞 +1 位作者 贾洪林 朱庆虎 《畜牧兽医科技信息》 2005年第1期44-45,共2页

(上接2004年12期55页) 2猪瘟疫苗 2.1常规疫苗 猪瘟灭活苗是40～50年代曾经使用过的传统疫苗,当时该苗就表现出质量不稳定,主要是免疫期短和保护力低等.时至今日,组织培养猪瘟病毒的产量和灭活所造成的病毒有效抗原的损失仍是制造灭活... (上接2004年12期55页) 2猪瘟疫苗 2.1常规疫苗 猪瘟灭活苗是40～50年代曾经使用过的传统疫苗,当时该苗就表现出质量不稳定,主要是免疫期短和保护力低等.时至今日,组织培养猪瘟病毒的产量和灭活所造成的病毒有效抗原的损失仍是制造灭活疫苗的两大障碍.猪瘟弱毒疫苗的成功问世,改变了猪瘟防制的窘迫局面,三大品系猪瘟疫苗(中国的C-株、日本的CPE(株和法国的Thiverval株)的广泛应用(通常能提供终身免疫)对于控制猪瘟的流行起到了关键作用. 展开更多

关键词 猪瘟疫苗 C-株 免疫期 终身免疫 猪瘟弱毒疫苗 猪瘟病毒 品系 研究近况 和法 改变

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