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基于SHH/GLI-1信号通路探讨齐墩果酸抑制结直肠癌小鼠移植瘤生长与炎症反应的作用机制
1
作者 贾沛芝 王敬婷 +2 位作者 陈洋佚 刘锦洪 林久茂 《福建中医药》 2024年第8期12-18,23,共8页
目的基于SHH/GLI-1信号通路探讨齐墩果酸(OA)对结直肠癌小鼠移植瘤生长与炎症反应的影响。方法选择SPF级6周龄雄性BALB/c裸鼠12只,采用皮下注射HT-29细胞构建结直肠癌移植瘤小鼠模型,随机分为对照组与干预组各6只。干预组按12.5 mg/(kg&... 目的基于SHH/GLI-1信号通路探讨齐墩果酸(OA)对结直肠癌小鼠移植瘤生长与炎症反应的影响。方法选择SPF级6周龄雄性BALB/c裸鼠12只,采用皮下注射HT-29细胞构建结直肠癌移植瘤小鼠模型,随机分为对照组与干预组各6只。干预组按12.5 mg/(kg·d)予腹腔注射OA溶液,对照组按500μL/(kg·d)予腹腔注射生理盐水,给药6 d停止1 d,共干预16 d。干预期间每2 d测量小鼠体质量和肿瘤体积,干预结束后测量肿瘤重量;免疫组化法检测肿瘤组织增殖标志物Ki67、细胞周期相关蛋白[细胞周期素依赖性激酶抑制因子(p21)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)]、细胞凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)、磷酸化-B淋巴细胞瘤-2死亡拮抗蛋白(p-Bad)、死亡因子(Fas)、死亡因子配体(FasL)]、炎症相关蛋白[环氧化酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)]以及SHH/GLI-1信号通路相关蛋白[音猬因子(SHH)、补丁受体(PTCH)、光滑蛋白(SMO)、胶质瘤相关癌基因同源物1(GLI-1)]的表达;TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况;Bio plex检测2组小鼠血清炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果2组不同时间段体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,干预组干预7、9、11、13、15、17、19 d小鼠肿瘤体积均明显减小(P<0.05),干预后肿瘤重量明显降低(P<0.05)。与对照组比较,干预组肿瘤组织Ki67、CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、COX-2、iNOS、SHH、PTCH、SMO、GLI-1和血清IL-1β、IL-6、TNF-α表达均明显降低(P<0.05),p21、Bax、p-Bad、Fas、FasL表达均明显升高(P<0.05);凋亡细胞比例明显增加(P<0.05)。结论OA可以抑制结直肠癌小鼠移植瘤的生长和炎症反应,可能与调控SHH/GLI-1信号通路相关。 展开更多
关键词 结直肠癌 齐墩果酸 SHH/GLI-1信号通路 增殖 凋亡 炎症
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基于TGF-β1/Smad2/3信号通路研究莲心碱对高血压小鼠肾间质纤维化的保护作用 被引量：2
2
作者 王美玲 陈达鑫 +4 位作者 贾沛芝 赵春雨 许瑶瑶 姚琳 林珊 《福建中医药》 2023年第8期50-53,共4页
目的 探究莲心碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压小鼠肾间质纤维化的影响和作用机制。方法 将18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和莲心碱组各6只。模型组和莲心碱组使用AngⅡ微量缓释泵持续28 d构建高血压小鼠模型,出现收缩压(S... 目的 探究莲心碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压小鼠肾间质纤维化的影响和作用机制。方法 将18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和莲心碱组各6只。模型组和莲心碱组使用AngⅡ微量缓释泵持续28 d构建高血压小鼠模型,出现收缩压(SBP)>120 mm Hg提示建模成功;对照组使用等体积PBS灌注微量缓释泵。造模后第2天开始干预,莲心碱组按5 mg/(kg·d)腹腔注射150μL莲心碱溶液,对照组、模型组腹腔注射同等体积生理盐水,均连续干预4周。每周应用无创鼠尾血压仪对小鼠进行血压测量。观察3组小鼠肾脏大小;天狼星红染色观察肾组织胶原纤维分布;Western blot检测肾组织中TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、CollagenⅠ和CollagenⅢ蛋白表达量。结果 与对照组比较,模型组造模第7、14、21、28天SBP、DBP及MAP均明显提高(P<0.05);与模型组比较,莲心碱组造模第14、21、28天SBP、DBP及MAP均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组肾脏重量明显提高(P<0.05);天狼星红染色示肾间质可见大面积呈红色或黄色的Ⅰ型胶原纤维,并伴有部分绿色Ⅲ型胶原纤维;肾脏组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达量和p-Smad2/3/Smad2/3比值均明显提高(P均<0.05);与模型组比较,莲心碱组肾脏重量明显降低(P<0.05);天狼星红染色示肾间质纤维化程度较模型组明显下降;肾脏组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达量和p-Smad2/3/Smad2/3比值均明显降低(P均<0.05)。结论 莲心碱能抑制高血压所致的肾脏组织纤维化,减轻肾脏胶原沉积,其可能通过TGF-β1/Smad2/3信号通路发挥作用。 展开更多
关键词 高血压 莲心碱 莲子心 肾损害 纤维化 TGF-β1/Smad2/3
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基于TLR4/NF-κB信号通路探讨葛根黄连黄芩汤治疗溃疡性结肠炎的作用机制 被引量：1
3
作者 许瑶瑶 蔡巧燕 +4 位作者 赵春雨 贾沛芝 王美玲 林炜 张铃 《福建中医药》 2023年第9期27-33,共7页
目的基于TLR4/NF-κB信号通路探讨葛根黄连黄芩汤改善葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎小鼠炎症反应的作用机制。方法20只雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为空白组、中药组、模型组、模型+中药组。模型组和模型+中药组采用2.5%DSS... 目的基于TLR4/NF-κB信号通路探讨葛根黄连黄芩汤改善葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎小鼠炎症反应的作用机制。方法20只雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为空白组、中药组、模型组、模型+中药组。模型组和模型+中药组采用2.5%DSS溶液连续饮用7 d,再换纯水饮用4 d构建急性溃疡性结肠炎小鼠模型。中药组及模型+中药组小鼠按体质量2 g/(kg·d)给予葛根黄连黄芩汤连续灌胃11 d,空白组及模型组小鼠给予等体积的生理盐水灌胃。每天记录小鼠体质量变化,同时采用疾病活动指数(DAI)评分法观察4组小鼠体质量、粪便黏稠度、粪便潜血的变化;观察4组小鼠结肠组织整体性状,测量结肠长度;HE染色法观察4组小鼠结肠组织病理变化;Western blot检测4组小鼠结肠组织中TLR4、p-P65/P65的蛋白表达量;免疫组化(IHC)法检测4组小鼠结肠组织中p-P65蛋白定位及阳性表达;qPCR法检测4组小鼠结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平;采用眼球取血法将血液离心收集血清,酶联免疫(ELISA)法检测4组小鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α含量。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量下降,DAI评分显著升高(P<0.05);结肠长度缩短(P<0.05);结肠黏膜糜烂充血严重,炎症细胞浸润明显,TLR4、p-P65/P65的蛋白表达量显著升高(P<0.05);结肠中p-P65的阳性表达率显著增加,且入核数量增加(P<0.05);结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平显著升高(P<0.05);血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著升高(P<0.05)。与模型组比较,模型+中药组小鼠体质量下降幅度有所缓解,DAI评分低于模型组(P<0.05),结肠长度延长(P<0.05);结肠黏膜轻度糜烂,炎症细胞浸润减少;TLR4、p-P65/P65的蛋白表达量显著降低(P<0.05);结肠中p-P65的阳性表达率显著降低(P<0.05),且入核数量减少;IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平显著降低(P<0.05);血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.0 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 葛根黄连黄芩汤 TLR4/NF-κB信号通路
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莲心碱体外吸收对AngⅡ诱导血管平滑肌细胞表型转化的影响 被引量：1
4
作者 贾沛芝 林珊 +5 位作者 曾建伟 熊晓满 刘菲 王美玲 林炜 陈达鑫 《福建中医药》 2022年第5期20-23,共4页
目的通过检测血管平滑肌A7R5细胞内莲心碱的含量,同时测定不同浓度莲心碱对A7R5细胞活力的影响及莲心碱的药效作用,探究莲心碱进入细胞作用的效率与对A7R5细胞表型转换的影响。方法体外培育大鼠血管平滑肌细胞A7R5细胞株,将其随机分为6... 目的通过检测血管平滑肌A7R5细胞内莲心碱的含量,同时测定不同浓度莲心碱对A7R5细胞活力的影响及莲心碱的药效作用,探究莲心碱进入细胞作用的效率与对A7R5细胞表型转换的影响。方法体外培育大鼠血管平滑肌细胞A7R5细胞株,将其随机分为6组,分别用不同剂量莲心碱干预(0、5、25、50、100、200μg/mL),采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)检测不同浓度的莲心碱干预15 min时A7R5细胞质中莲心碱浓度;采用MTT法筛选莲心碱药物浓度后,选择对细胞无伤害的药物浓度,采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导建立A7R5细胞表型转换模型,将其分为空白对照组(完全培养基)、AngⅡ组(1×10^(-6) mol/L AngⅡ)、莲心碱组(1×10^(-6) mol/L AngⅡ+10μg/mL莲心碱),干预24 h后,双转盘活细胞共聚焦实时成像分析系统观察A7R5细胞中表型转换标志物α-SMA的蛋白表达情况。结果通过液质联用可检测到破碎细胞中莲心碱的含量,与干预浓度呈剂量依赖,空白对照和末次清洗细胞的PBS中未检测到莲心碱色谱峰,提示莲心碱可透过细胞膜进入细胞,且莲心碱进细胞效率为15.56%;AngⅡ诱导A7R5细胞由收缩型向合成型转换,其标志蛋白α-SMA表达减少,莲心碱干预后可抑制α-SMA表达量的降低。结论莲心碱可透过A7R5细胞膜进入细胞,且抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞表型转换,该结果可能是莲心碱抑制高血压血管重构的作用机制之一。 展开更多
关键词 莲心碱 血管平滑肌细胞 超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱 表型转化
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清达颗粒对血管紧张素Ⅱ诱导的高血压小鼠心脏损伤的保护作用
5
作者 赵春雨 张铃 +4 位作者 贾沛芝 王美玲 许瑶瑶 林浩伟 蔡巧燕 《福建中医药》 2023年第11期25-29,共5页
目的探讨清达颗粒(QDG)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压小鼠心脏损伤的保护作用。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组、高剂量组和阳性组,模型组、低剂量组、高剂量组和阳性组采用皮下微量泵持续灌注AngⅡ溶液2... 目的探讨清达颗粒(QDG)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压小鼠心脏损伤的保护作用。方法将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组、高剂量组和阳性组,模型组、低剂量组、高剂量组和阳性组采用皮下微量泵持续灌注AngⅡ溶液28 d构建高血压小鼠模型,对照组给予皮下微量泵持续灌注生理盐水。于造模第2天开始灌胃给药,低、高剂量组分别按1.3、2.6 mg/(kg·d)给予QDG药液灌胃;阳性组按10.4 mg/(kg·d)给予缬沙坦药液灌胃,对照组和模型组按12 mL/(kg·d)给予生理盐水灌胃,每日1次,连续灌胃28 d。应用鼠尾无创血压仪检测每周小鼠尾动脉收缩压(SBP)和舒张压(DBP)。灌胃28 d后取材,观察小鼠心脏形态,称量小鼠体质量和心脏质量,测量胫骨长度,计算小鼠心重指数及心胫比;qPCR检测心脏组织心钠肽(ANP)和脑钠肽(BNP)mRNA相对表达水平;ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和BNP的含量;天狼星红法检测心脏组织胶原纤维的表达情况。结果与对照组比较,模型组造模第7、14、21、28天SBP和DBP均明显升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组造模后第14、21、28天SBP和DBP均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组心脏组织明显肥大,心重指数和心胫比均明显增加(P<0.05),心脏组织ANP、BNP mRNA相对表达水平均明显升高(P<0.05),血清CK-MB、BNP含量均明显升高(P<0.05),天狼星红染色显示心脏组织的红色或黄色Ⅰ型胶原纤维以及绿色Ⅲ型胶原纤维明显增多(P<0.05)。与模型组比较,各给药组心脏组织肥大情况明显减轻,心重指数与心胫比均明显降低(P<0.05),心脏组织ANP、BNP mRNA相对表达水平均明显降低(P<0.05),血清CK-MB、BNP含量均明显降低(P<0.05),心脏组织胶原纤维表达量明显降低(P<0.05)。结论QDG能明显改善AngⅡ诱导的高血压小鼠心肌肥大和纤维化,减轻心脏损伤。 展开更多
关键词 高血压 清达颗粒 血管紧张素Ⅱ 心肌肥大 心肌纤维化 心脏损伤 小鼠
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清达颗粒对AngⅡ诱导高血压小鼠肝脏炎症损伤的保护作用
6
作者 熊晓满 张铃 +4 位作者 刘菲 蔡巧燕 贾沛芝 陈达鑫 林炜 《福建中医药》 2022年第5期56-59,共4页
目的探讨清达颗粒(QDG)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压小鼠血压及肝脏炎症的影响。方法将小鼠按1∶2随机分为对照组和造模组,造模组用皮下微量泵连续灌注AngⅡ构建高血压小鼠模型,持续灌注28 d,造模后再将造模成功的小鼠分为模型组... 目的探讨清达颗粒(QDG)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压小鼠血压及肝脏炎症的影响。方法将小鼠按1∶2随机分为对照组和造模组,造模组用皮下微量泵连续灌注AngⅡ构建高血压小鼠模型,持续灌注28 d,造模后再将造模成功的小鼠分为模型组和给药组。于造模后第2天开始给药,给药组予QDG灌胃,对照组和模型组予生理盐水灌胃,每日1次,连续灌胃4周。每周用无创血压测量系统测量各组血压。4周后,ELISA法检测3组血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;HE染色法观察3组肝脏组织病理形态学改变;免疫组化法检测3组肝脏组织中巨噬细胞表面标志物F4/80的表达。结果HE染色结果显示,与对照组比较,模型组肝组织炎症浸润明显,而给药组肝组织炎症浸润较模型组减少。与对照组比较,模型组第14、21、28天收缩压和舒张压明显升高(P<0.05),血清AST、IL-6、TNF-α含量及AST/ALT比值均明显升高(P<0.05),F4/80阳性率明显升高(P<0.05)。与模型组比较,给药组第14、21、28天收缩压、舒张压明显降低(P<0.05),血清AST、IL-6、TNF-α含量及AST/ALT比值均明显降低(P<0.05),F4/80阳性率明显降低(P<0.05)。结论QDG能显著降低AngⅡ诱导的高血压小鼠的血压及肝脏炎症反应。 展开更多
关键词 高血压 清达颗粒 AngⅡ 肝脏炎症
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基于TLR4信号通路研究小檗碱对血管紧张素Ⅱ诱导ANA-1细胞炎性应答的影响
7
作者 高德兴 贾沛芝 +1 位作者 彭军 林炜 《康复学报》 CSCD 2022年第2期140-148,共9页
目的:研究小檗碱(BBR)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导ANA-1细胞炎性应答的影响及潜在的作用机制。方法:对数增长期的ANA-1细胞按照随机数字表法平均分为对照组、荧光抗体组、模型组、低剂量BBR组、中剂量BBR组、高剂量BBR组、抑制剂组。对... 目的:研究小檗碱(BBR)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导ANA-1细胞炎性应答的影响及潜在的作用机制。方法:对数增长期的ANA-1细胞按照随机数字表法平均分为对照组、荧光抗体组、模型组、低剂量BBR组、中剂量BBR组、高剂量BBR组、抑制剂组。对照组、荧光抗体组均加入2.5μL二甲基亚砜(DMSO);模型组加入浓度为1μmol/L AngⅡ工作液;低、中、高剂量BBR组分别加入浓度为1、5、10μmol/L BBR工作液;抑制剂组加入浓度为10μmol/L TAK242工作液。采用细胞增殖与毒性检测实验(CCK-8)方法检测不同浓度的BBR对细胞活力的影响;采用流式细胞术检测细胞膜表面TLR4的平均荧光强度(MFI);采用ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用实时定量PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平;采用Western blot检测p-ERK/ERK、p-p38/p38、pJNK/JNK、p-p65/p65、p-IRF3/IRF3的磷酸化及TLR4、MyD88、AP-1的表达情况;采用生化法检测丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:(1)CCK-8法检测结果:与对照组比较,低、中、高剂量BBR组细胞活性均无明显区别,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)流式细胞术检测结果:与荧光抗体组比,模型组MFI明显减弱;与模型组比较,模型+高剂量BBR组MFI明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)ELISA检测结果:与对照组比较,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量明显升高;与模型组比较,模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1β、IL-6、TNF-α含量均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)实时定量PCR法检测结果:与对照组比较,模型组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平明显升高;与模型组比较,模型组+低、中、高剂量BBR组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)Western blot结果:与对照组比较,模型组处理45 min后p65、IRF-3蛋白的磷酸化表达明显升高,模型+低、中、高剂量 展开更多
关键词 小檗碱 TLR4信号通路 血管紧张素Ⅱ 炎性应答
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