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Caspase-3融合蛋白基因的构建及其对HeLa细胞凋亡的诱导作用 被引量:22
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作者 林涛 于翠娟 +5 位作者 许彦鸣 朱峰 彭玮丹 苏成芝 王成济 杨安钢 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第12期1057-1060,共4页
目的 观察重构型 caspase- 3及其 N-端融合蛋白的表达对 He L a细胞的凋亡诱导作用 .方法 用反转录 PCR获取人 caspase- 3基因 ,用重组 PCR方法构建人重构型 caspase-3及其融合蛋白基因 ,将基因克隆入表达载体 pc DNA3,脂质体法转染 H... 目的 观察重构型 caspase- 3及其 N-端融合蛋白的表达对 He L a细胞的凋亡诱导作用 .方法 用反转录 PCR获取人 caspase- 3基因 ,用重组 PCR方法构建人重构型 caspase-3及其融合蛋白基因 ,将基因克隆入表达载体 pc DNA3,脂质体法转染 He L a细胞 ,通过细胞计数、电镜观察、MTT法等检测被转染细胞的生长及其凋亡状况 .结果 成功获得了 cas-pase- 3基因 ,构建了重构型 caspase- 3基因和重构型 caspase- 3与绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜结构域部分肽段的融合蛋白基因及其表达载体 ,与对照组相比 ,在转染后 1~ 4d内 ,两种基因的表达均导致 He L a细胞存活数减少 ,大量细胞发生凋亡 ,且二者活性相当 .结论 重构型 caspase- 3及其融合蛋白可以诱导转染的 He L 展开更多
关键词 天冬氨酸蛋白酶类 脱噬作用 肿瘤 基因疗法
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HER2分子与肿瘤靶向治疗 被引量:17
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作者 鲍炜 裘秀春 +3 位作者 林涛 张立红 王成济 杨安钢 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期129-132,共4页
HER2分子是表皮生长因子受体家族的第二位成员,对细胞的生长、分化及存活有着重要的调节作用,在乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、肾细胞癌中其过表达与否是患者预后的重要指标。研究表明它与表皮生长因子受体家族其他3位成员形成异二聚体,通过... HER2分子是表皮生长因子受体家族的第二位成员,对细胞的生长、分化及存活有着重要的调节作用,在乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、肾细胞癌中其过表达与否是患者预后的重要指标。研究表明它与表皮生长因子受体家族其他3位成员形成异二聚体,通过多种信号转导途径促进肿瘤的增殖、转移、耐药性的产生,是肿瘤基因治疗的重要靶位点。 展开更多
关键词 HER2分子 表皮生长因子受体 基因治疗
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截短型人Bid融合蛋白对HeLa细胞的促凋亡作用 被引量:8
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作者 裘秀春 于翠娟 +6 位作者 许彦鸣 林涛 曹云新 王智 王成济 范清宇 杨安钢 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第21期1963-1966,共4页
目的 :观察截短型人bid及其N端融合蛋白的表达对HeLa细胞的促凋亡作用 .方法 :通过反转录PCR方法获取人全长bid基因 ,再经PCR方法克隆得到截短型bid(trun catedbid ,tbid)基因及其N端融合蛋白基因插入pcDNA3真核表达载体 ,脂质体法转染H... 目的 :观察截短型人bid及其N端融合蛋白的表达对HeLa细胞的促凋亡作用 .方法 :通过反转录PCR方法获取人全长bid基因 ,再经PCR方法克隆得到截短型bid(trun catedbid ,tbid)基因及其N端融合蛋白基因插入pcDNA3真核表达载体 ,脂质体法转染HeLa细胞 ,通过间接免疫荧光 ,电子显微镜以及流式细胞仪等方法观察被转染细胞的生长及凋亡状况 .结果 :成功获得人bid基因 ,构建了tbid基因及tbid与绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜结构域部分肽段的融合蛋白基因的真核表达载体 (pcDNA3 tbid6 1 ,pcDNA3 PE tbid6 1 ) .与对照组相比 ,在转染后 1 2~ 4 8h内两种基因的表达均导致HeLa细胞发生凋亡 ,且两者活性相当 .结论 展开更多
关键词 截短型人Bid融合蛋白 细胞凋亡 HELA细胞 促凋亡作用 bid基因 基因表达
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生物化学与分子生物学实验课程优化效果探讨 被引量:12
4
作者 王婷 王庆怡 +3 位作者 王磊 王明星 韩骅 林涛 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2016年第3期254-256,共3页
目的探讨生物化学与分子生物学实验课程优化后的教学效果。方法通过更新教学实验平台仪器设备器材,重组实验课程安排和改进实验课内容的方法提高生物化学与分子生物学实验课教学效果。结果解决生物化学与分子生物学实验课中出现的主要矛... 目的探讨生物化学与分子生物学实验课程优化后的教学效果。方法通过更新教学实验平台仪器设备器材,重组实验课程安排和改进实验课内容的方法提高生物化学与分子生物学实验课教学效果。结果解决生物化学与分子生物学实验课中出现的主要矛盾,均衡学员实验课授课时间,提高实验课授课质量。结论改善和优化生物化学与分子生物学实验课程实验条件及实验内容能够大大提高学员实验成功率,提升平均成绩,提高教学质量。 展开更多
关键词 生物化学 分子生物学 实验课程 教学方法 教学改革
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瞬时转染和稳定转染对RNAi抑制乙型肝炎病毒S基因表达的影响 被引量:7
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作者 刘家云 李庆霞 +7 位作者 黄红艳 马龙洋 鲍炜 林涛 薛采芳 刘军 王成济 杨安钢 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第11期961-964,共4页
目的:构建针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因的siRNA表达载体pSUPERS1和pSUPERS2,观察瞬时转染及稳定转染对RNAi抑制HBV基因表达作用的影响.方法:设计并合成针对HBVS基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表... 目的:构建针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因的siRNA表达载体pSUPERS1和pSUPERS2,观察瞬时转染及稳定转染对RNAi抑制HBV基因表达作用的影响.方法:设计并合成针对HBVS基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体分别瞬时转染和稳定转染表达HBV的2.2.15细胞,对所得细胞上清中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,RTPCR检测siRNA对靶基因mRNA的抑制效果,并比较两种转染方式对RNAi抑制HBV基因表达作用的影响.结果:在稳定转染并经潮霉素筛选所得的单克隆细胞株中,pSUPERS1和pSUPERS2均能明显抑制HBsAg及HBeAg的分泌(P<0.01),抑制率分别为83%和78%,RTPCR结果证实HBV的mRNA明显降低,而瞬时转染细胞在蛋白质水平上及mRNA水平上的结果则比稳定转染的结果逊色.结论:针对HBVS基因的siRNA能稳定、高效、特异地抑制HBV基因的表达,转染效率对于靶基因的RNA干涉作用有明显的影响. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 RNA干涉 转染
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GFP共表达检测重组型Caspase-3对HeLa细胞凋亡的诱导作用 被引量:8
6
作者 林涛 于翠娟 +5 位作者 许彦鸣 赵晶 高下 张淼丽 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期218-221,共4页
目的探讨由野生型人caspase-3大小亚基颠倒构建的重组型caspase-3的促细胞凋亡活性。方法用RT-PCR法获得人caspase-3基因。通过重组PCR进行改造,构建小亚基位于大亚基之前的两种重组型caspase-3基因,它们所对应的蛋白质的N端,分别带有... 目的探讨由野生型人caspase-3大小亚基颠倒构建的重组型caspase-3的促细胞凋亡活性。方法用RT-PCR法获得人caspase-3基因。通过重组PCR进行改造,构建小亚基位于大亚基之前的两种重组型caspase-3基因,它们所对应的蛋白质的N端,分别带有或没有其自身识别的四肽序列。将上述基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pIRES2-EGFP中,转染人HeLa细胞,在荧光显微镜和电镜下观察转染细胞的形态和结构。结果成功地获得了野生型caspase-3基因及两种重组型caspase-3基因。构建了重组型caspase-3基因的表达载体。转染HeLa细胞后,重组型caspase-3基因在细胞中得到表达,随后引起细胞荧光强度下降,生长状况变差甚至死亡。电镜观察显示,许多细胞呈现凋亡的典型特征。结论重组型caspase-3可促进HeLa细胞的凋亡。 展开更多
关键词 半胱天冬酶-3 细胞凋亡 绿色荧光蛋白
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RNAi-dsRNA介导的基因沉默 被引量:8
7
作者 刘家云 林涛 +1 位作者 王成济 杨安钢 《国外医学(遗传学分册)》 2004年第1期4-10,共7页
RNA干涉(RNA interference,RNAi)是双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)介导的、序列特异的转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing,PTGS)现象,广泛存在于线虫、果蝇、植物、真菌及哺乳动物等多种生物体中。作为生物体中存在... RNA干涉(RNA interference,RNAi)是双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)介导的、序列特异的转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing,PTGS)现象,广泛存在于线虫、果蝇、植物、真菌及哺乳动物等多种生物体中。作为生物体中存在的一种普遍现象,RNAi是基因组水平的免疫现象,代表了进化过程中原始的基因组对抗来自外来基因表达的保护机制,它介导生物体对内源寄生性核酸及外源性病原核酸的防御,并调控蛋白编码基因的表达,具有十分诱人的应用前景。本文介绍了RNAi的特征、作用机制、生物学功能及其应用等方面的研究进展。 展开更多
关键词 RNAI DSRNA 基因沉默 基因转录 RNA干涉 双链RNA
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蛋白激酶AKT不同亚型影响乳腺癌恶性表型的研究进展 被引量:9
8
作者 邹远康 李天 +3 位作者 温博 李国印 林涛 王磊 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第21期4165-4169,共5页
细胞的增殖、转移、存活等细胞生物学过程的异常对人类众多疾病尤其是恶性肿瘤的发生发展至关重要。大量研究表明,PI3K/AKT信号通路的异常激活在肿瘤的恶性转化过程中发挥重要作用并具有普遍意义。但是,目前的研究多集中于探讨AKT总的... 细胞的增殖、转移、存活等细胞生物学过程的异常对人类众多疾病尤其是恶性肿瘤的发生发展至关重要。大量研究表明,PI3K/AKT信号通路的异常激活在肿瘤的恶性转化过程中发挥重要作用并具有普遍意义。但是,目前的研究多集中于探讨AKT总的激酶活性,而往往忽视了AKT不同亚型的特异性功能。近年来在乳腺癌中的研究发现,AKT家族不同亚型的激酶分子在调控肿瘤细胞的存活、生长、增殖、代谢、转移等众多恶性表型方面发挥独特而关键的作用:与Akt1促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞转移的作用相反,Akt2在促进肿瘤细胞转移、抑制肿瘤细胞增殖方面发挥重要功能;此外,随着对AKT家族研究的深入,人们对Akt3的特异性生物学功能也有了新的认识。本文在此对AKT不同亚型与乳腺癌恶性表型之间关系的研究进展做一总结。 展开更多
关键词 AKT不同亚型 乳腺癌 增殖 转移
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讨论课教学模式在生物化学教学中的优化 被引量:8
9
作者 李霞 王立锋 +4 位作者 赵晶 张健 沈岚 林涛 药立波 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第19期3755-3758,共4页
讨论课是在教师指导下以学生活动为主的教学形式,是第四军医大学生物化学与分子生物学教学的重要组成部分。近年来,适应我校的模块式教学改革需求,我们在以往的实践基础上,对生物化学讨论课的组织实施进行了系统优化,建立了科学合理的... 讨论课是在教师指导下以学生活动为主的教学形式,是第四军医大学生物化学与分子生物学教学的重要组成部分。近年来,适应我校的模块式教学改革需求,我们在以往的实践基础上,对生物化学讨论课的组织实施进行了系统优化,建立了科学合理的衡量标准和考核方式,实行及时有效的教学效果评估与反馈,实现了全面培养与提高学员的综合素质与能力,并充分促进了教学相长。因此,讨论课作为一种课堂教学新模式,是培养学员思维能力和综合素质、提高教学效果的有效方法和手段,值得进一步完善和推广。 展开更多
关键词 生物化学 讨论课 教学模式 综合素质 优化
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hsstr2基因转染肿瘤细胞的受体显像研究 被引量:3
10
作者 王喆 汪静 +4 位作者 林涛 李国权 程时武 王喜青 杨安钢 《中华核医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期275-278,i0005,共5页
目的将人生长抑素受体2亚型(hsstr2)基因转染至该受体表达阴性的肿瘤细胞,并进行该受体介导的肿瘤显像。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hsstr2基因并构建真核表达载体,将hsstr2基因转染至肺腺癌A549细胞系(hsstr2表达阴... 目的将人生长抑素受体2亚型(hsstr2)基因转染至该受体表达阴性的肿瘤细胞,并进行该受体介导的肿瘤显像。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hsstr2基因并构建真核表达载体,将hsstr2基因转染至肺腺癌A549细胞系(hsstr2表达阴性),用RT—PCR及流式细胞术检测受体表达情况;采用高表达细胞株进行该受体体外结合特性研究,建立裸鼠肿瘤模型,探讨该受体介导的肿瘤显像方法。结果获得经测序完全正确的hsstr2基因,RT-PCR及流式细胞术鉴定选取高表达的细胞株,体外结合实验测得平衡解离常数Kd=5.65×10-10mol/L,最大结合容量Bmax=2.01×104结合位点/细胞,半数抑制浓度IC50=1.88×10-9mol/L。裸鼠肿瘤模型显像示,静脉注射显像剂99Tcm-RC-160后0.5-1 h肿瘤显影明显,24 h后肿瘤部位第2次显影。结论将hsstr2转染至该受体表达阴性的肿瘤细胞并进行受体介导的肿瘤显像是可行的,适宜显像时间为0.5-1 h。 展开更多
关键词 受体 生长抑素 肿瘤细胞 培养的 转染 聚合酶链反应 放射性核素显像 肿瘤细胞 基因转染 受体表达 显像研究 ^99Tc^m-RC-160
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医学生物化学与分子生物学实验教学体会 被引量:7
11
作者 王涛 林涛 《基础医学教育》 2013年第1期45-47,共3页
为进一步改进医学生物化学与分子生物学实验课教学方法,探索新的教学模式,深化教学改革,对实验课教学各环节进行了调整,力求在教与学双方面都有所进步,从而促进学生学习积极性的提高和综合能力的培养,取得了良好的教学效果。
关键词 医学生物化学与分子生物学 实验教学 教学方法
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化学气相沉积法从MTS-H2-N2前驱体制备碳化硅涂层 被引量:8
12
作者 林涛 王梦千 +2 位作者 朱界 李爱军 彭雨晴 《陶瓷学报》 CAS 北大核心 2020年第2期257-263,共7页
以三氯甲基硅烷-氢气-氮气(MTS-H2-N2)为前驱体系统,在垂直放置的热壁反应器中利用化学气相沉积工艺制备碳化硅涂层,分析了工艺参数对碳化硅沉积速率的影响,通过扫描电子显微镜(SEM)和X射线衍射技术(XRD)分析了碳化硅纤维表面碳化硅涂... 以三氯甲基硅烷-氢气-氮气(MTS-H2-N2)为前驱体系统,在垂直放置的热壁反应器中利用化学气相沉积工艺制备碳化硅涂层,分析了工艺参数对碳化硅沉积速率的影响,通过扫描电子显微镜(SEM)和X射线衍射技术(XRD)分析了碳化硅纤维表面碳化硅涂层的微观形貌和晶型结构,并分析了MTS热解和沉积碳化硅过程中主要气相组分的变化。在850-1050℃的范围内,随着沉积温度的提高,碳化硅沉积速率先增大后减小,温度为1000℃时,碳化硅沉积过程由表面反应控制转变为质量传输控制;随着反应物分压逐渐升高至30 kPa,碳化硅沉积速率逐渐增加,沉积由表面活性位吸附过程转变为形核长大过程;随着滞留时间的延长,SiC沉积速率逐渐下降。SEM图显示碳化硅纤维表面碳化硅涂层光滑致密,XRD结果表明850-1050℃沉积的碳化硅为β-SiC。MTS热解过程中主要的气相组分为是CH4、C2H2、SiHCl3、SiCl2和SiCl4。 展开更多
关键词 化学气相沉积 碳化硅 沉积速率 气相组分
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人granzyme B基因在HeLa细胞中的表达 被引量:6
13
作者 赵晶 许彦鸣 +5 位作者 林涛 于翠娟 陈蕾 黄威权 王成济 杨安钢 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第5期394-397,共4页
目的 构建携带人 granzym e B基因的真核表达载体 ,并将其在 He L a细胞中表达 .方法 用反转录 PCR获取人 granzyme B全长 c DNA序列 ,将其活性型序列克隆进 pc D-NA3重组表达质粒 .脂质体法转染 He L a细胞 ,间接免疫荧光检测目的蛋... 目的 构建携带人 granzym e B基因的真核表达载体 ,并将其在 He L a细胞中表达 .方法 用反转录 PCR获取人 granzyme B全长 c DNA序列 ,将其活性型序列克隆进 pc D-NA3重组表达质粒 .脂质体法转染 He L a细胞 ,间接免疫荧光检测目的蛋白表达 ,HE染色观察其对转染 He L a细胞形态的影响 .结果 成功获得了野生型 granzym e B c DNA,构建了编码活性型 granzyme B的真核表达载体 pc DNA3- G.转染He L a细胞后观察到目的蛋白表达 ,转染细胞形态发生变化 ,出现多核大细胞及固缩小细胞 .结论 活性型 granzyme B哺乳动物表达系统的建立 ,为进一步研究 granzym e 展开更多
关键词 granzymeB 基因表达 HELA细胞 细胞凋亡
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培养医学基础课学习兴趣的探讨 被引量:6
14
作者 林涛 《山西医科大学学报(基础医学教育版)》 2010年第8期783-785,共3页
医学基础课是医学生培养的基本内容,通过联系临床疾病以突出课程的重要性和实用性,增加课堂和课下的互动以提高教学的生动性和趣味性,追踪科研进展以调动学员的主观能动性和改革考试制度以建立合理的教学评价体系等途径都有助于增强学... 医学基础课是医学生培养的基本内容,通过联系临床疾病以突出课程的重要性和实用性,增加课堂和课下的互动以提高教学的生动性和趣味性,追踪科研进展以调动学员的主观能动性和改革考试制度以建立合理的教学评价体系等途径都有助于增强学员的学习兴趣,提高课程教学质量。 展开更多
关键词 医学基础课 学习兴趣 教学质量
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AD7C-NTP基因的染色体定位及其产物的跨膜区预测 被引量:4
15
作者 桂俊豪 刘家云 +3 位作者 林涛 仇东辉 余伍忠 何江 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期604-607,共4页
目的 :对AD7C NTP基因进行染色体定位 ,预测其编码产物的跨膜区。方法 :用Blat服务器进行AD7C NTPmRNA序列与基因组DNA序列的比对。借助PHDhtm、TMHMM2 .0、HMM TOP2 .0、SMART和PSORT等服务器 ,预测AD7C NTP基因编码产物的跨膜特征及... 目的 :对AD7C NTP基因进行染色体定位 ,预测其编码产物的跨膜区。方法 :用Blat服务器进行AD7C NTPmRNA序列与基因组DNA序列的比对。借助PHDhtm、TMHMM2 .0、HMM TOP2 .0、SMART和PSORT等服务器 ,预测AD7C NTP基因编码产物的跨膜特征及其亚细胞定位。结果 :AD7C NTP基因定位于 1p36 .11负链 ,无内含子序列。AD7C NTP基因编码产物具有 3个跨膜区 ,可能定位于过氧化物酶体。结论 :对AD7C 展开更多
关键词 生物信息学 AD7C-NTP基因 蛋白质 定位 跨膜区 预测
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survivin基因的RNA干涉抑制人乳腺癌SKBr-3细胞体外增殖的作用 被引量:5
16
作者 李庆霞 黄红艳 +6 位作者 刘家云 许彦鸣 林涛 赵晶 张勇 王成济 杨安钢 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2005年第2期101-104,共4页
目的:研究RNA干涉(RNAinterference,RNAi)抑制survivin基因表达后对人乳腺癌SKBr3细胞体外增殖能力的影响。方法:通过RTPCR和间接免疫荧光检测转染survivin靶向的小干涉RNA表达载体pSUPERS1后SKBr3细胞中survivin基因的表达;集落形成实... 目的:研究RNA干涉(RNAinterference,RNAi)抑制survivin基因表达后对人乳腺癌SKBr3细胞体外增殖能力的影响。方法:通过RTPCR和间接免疫荧光检测转染survivin靶向的小干涉RNA表达载体pSUPERS1后SKBr3细胞中survivin基因的表达;集落形成实验、MTT比色法检测细胞体外增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期。结果:转染pSUPERS1后,SKBr3细胞中survivin的mRNA和蛋白表达水平明显降低;克隆形成率(38±16.70)%比对照组(90.3±4.04)%显著降低;细胞增殖减慢,主要阻滞于G1期(74.03±8.91)%。结论:RNA干涉沉寂survivin基因表达后明显抑制了人乳腺癌SKBr3细胞的体外增殖能力。 展开更多
关键词 survivin RNA干涉 乳腺癌细胞
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重构型Caspase-6对HeLa细胞凋亡的诱导作用 被引量:6
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作者 许彦鸣 于翠娟 +6 位作者 林涛 张淼丽 彭玮丹 金明 赵晶 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期231-234,共4页
目的 将人Caspase 6基因大小亚基顺序颠倒 ,表达为重构型Caspase 6分子 ,探讨其对细胞凋亡的促进作用。方法 RT PCR获取人Caspase 6基因 ,测序判断正确后 ,通过重组PCR的方法构建大小亚基顺序颠倒的重构型Cas pase 6 (RevCasp6 )基因... 目的 将人Caspase 6基因大小亚基顺序颠倒 ,表达为重构型Caspase 6分子 ,探讨其对细胞凋亡的促进作用。方法 RT PCR获取人Caspase 6基因 ,测序判断正确后 ,通过重组PCR的方法构建大小亚基顺序颠倒的重构型Cas pase 6 (RevCasp6 )基因。将其克隆入含绿色荧光蛋白 (GFP)基因的真核表达载体 pIRES2 EGFP中 ,转染人宫颈癌细胞系HeLa ,在荧光显微镜下观察细胞形态的变化 ,用电子显微镜进一步观察细胞的凋亡特征。结果 获得了人Caspase 6基因 ,并成功地构建了大小亚基顺序颠倒的RevCasp6基因。以构建的RevCasp6真核表达载体 ,转染HeLa细胞后 ,荧光显微镜观察到细胞生长不良、细胞核结构破坏和细胞死亡。电子显微镜观察显示 ,转染了RevCasp6基因的细胞呈凋亡的典型特征。 展开更多
关键词 CASPASE-6 GFP 细胞凋亡
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人颗粒酶B融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用 被引量:6
18
作者 赵晶 林涛 +5 位作者 许彦鸣 金明 张淼丽 李继硕 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期113-116,共4页
目的  观察颗粒酶B(granzyme B)融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用。 方法用RT-PCR法获取人granzyme B全长cDNA,经重组PCR将活性型序列的5′端与一段 PE转膜肽序列融合。将所获重组基因... 目的  观察颗粒酶B(granzyme B)融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用。 方法用RT-PCR法获取人granzyme B全长cDNA,经重组PCR将活性型序列的5′端与一段 PE转膜肽序列融合。将所获重组基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)共表达载体pIRES2-EGFP,转染HeLa细胞。用免疫组化染色法检测目的蛋白的表达,荧光显微镜和电镜观察转染细胞的形态和结构。 结果成功地获得了野生型granzyme B cDNA及其融合蛋白基因,并构建了融合蛋白基因与GFP基因共表达的真核载体。转染HeLa细胞后,检测到目的蛋白的表达。荧光显微镜观察转染细胞有两种变化:一种表现为体积增大并常伴随多核现象;另一种出现细胞质和细胞核的固缩。电镜观察显示,多核巨细胞生长状态良好,固缩的小细胞则呈现凋亡的典型特征。结论granzyme B融合蛋白在HeLa细胞中异位表达,可使转染细胞的形态发生变化,出现多核的大细胞和核固缩的小细胞。 展开更多
关键词 granzymeB 融合蛋白 HELA细胞 基因表达
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精准医疗时代背景下医学分子生物学实验设计的探讨 被引量:6
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作者 王磊 张阔 +3 位作者 王婷 药立波 杨安钢 林涛 《中华医学教育探索杂志》 2016年第7期649-653,共5页
目的:通过设计综合实验,将精准医疗理念融入医学分子生物学实验教学,并探讨其效果。方法选择第四军医大学2012级和2013级八年制临床医学专业66名学生为教学对象;2013级36名学生为实验组,采用精准医疗相关的综合实验设计,将传统实... 目的:通过设计综合实验,将精准医疗理念融入医学分子生物学实验教学,并探讨其效果。方法选择第四军医大学2012级和2013级八年制临床医学专业66名学生为教学对象;2013级36名学生为实验组,采用精准医疗相关的综合实验设计,将传统实验教学内容融会贯通;2012级30名学生为对照组,采用传统实验教学。教学结束后对两组学生实施实验理论和技能考核;通过问卷调查,让学生评估自身所受教学方法的效果;并统计两组学生课后提问次数≥1次的人数,以评估其学习积极性。采用SPSS 15.0,对两组学生各项数据行t检验或卡方检验。结果考核结果表明,实验组学生的理论与技能平均成绩均优于对照组;尤其在综合实验设计的考核部分,两组学生成绩分别为(16.7±2.04)分和(13.9±2.87)分,差异有统计学意义(P=0.000)。问卷结果显示,实验组学生对自身所受教学在提高学习兴趣、对精准医疗的认识、对临床科研的认识、创新能力、知识掌握程度等方面的满意度高于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。而学习积极性方面,实验组学生提问人数与比例高于对照组(P=0.000)。结论以精准医疗为切入点开展医学分子生物学综合性实验教学,可使各知识点不再孤立、碎片化;从而激发学生的学习兴趣,有利于学生形成与精准医疗时代特征相适应的临床思维,提高科研素养,培养创新意识。 展开更多
关键词 精准医疗 医学分子生物学 实验教学 综合性实验设计
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生物化学“TCA”特色课程思政模式的构建与应用 被引量:3
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作者 赵晶 梁亮 +6 位作者 魏仁吉 王秦豪 张翔 林涛 阴继凯 高彬 林燕 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期896-902,共7页
高等教育“四新”建设(新工科、新医科、新农科、新文科)背景下,生物化学课程思政建设质量直接关乎育人成效。本校经过6年生物化学课程思政教学实践,以学科重要名词三羧酸循环中的“TCA”(三羧酸)类比育人的“一心三力”(T-思考力与合... 高等教育“四新”建设(新工科、新医科、新农科、新文科)背景下,生物化学课程思政建设质量直接关乎育人成效。本校经过6年生物化学课程思政教学实践,以学科重要名词三羧酸循环中的“TCA”(三羧酸)类比育人的“一心三力”(T-思考力与合作力、C-鉴别力、A-敬畏心),由此提出生物化学大学科通用的“TCA”特色思政理念,分别引导学生建立正确的认知观、科学观和生命观。同时构建了实现该理念、具有可操作性的实践创新体系,包括“一课三融”教的理念、“成长三思”学的理念、“创学三境”深度学习环境序贯创设,能够满足不同学校学情进而灵活设计高阶教学活动的基本需求。本校应用该模式,构建了突显军医大学特色的“TCA白兰鸽”生物化学思政体系,“白”代表医学,“兰”代表空军,“鸽”代表和平和谐。运用上述教与学的理念、学习环境序贯创设方法,个性化设计瞄准高阶育人目标的三大教学活动,包括“魔力生化圈”共学平台,注重主动建构与个性输出的思维训练;“基础-临床双师大班互动”启学课堂,侧重深度思考与讨论迭代的思辨表达;“虚拟仿真(VR)沉浸式任务”乐学应用,关注应对复杂与纠错担当的思感升华。上述“TCA白兰鸽”育人效果较满意,学生的整合思维、深度学习、反思迭代等高阶能力得到切实锻炼,但同时在实施过程中也遇到一些问题,尚待提出有效的解决思路。 展开更多
关键词 生物化学 TCA思政模式 思考力 合作力 鉴别力 敬畏心
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