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基于人肾类器官构建顺铂诱导急性肾损伤模型 被引量：1
1
作者 马瑞麟 岳亮 +7 位作者 贠志敏 楼张蓉 刘琦 崔宏图 钟鹏飞 高卓 檀英霞 吴成君 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期279-285,共7页
目的基于人肾类器官建立顺铂诱导急性肾损伤(AKI)模型。方法①基于人多能干细胞(hiPSC)诱导技术设计并构建含有多种细胞类型的肾类器官,利用HE染色法和免疫荧光技术鉴定组织结构和细胞类型。②基于构建的人肾类器官模型,将顺铂20,50和75... 目的基于人肾类器官建立顺铂诱导急性肾损伤(AKI)模型。方法①基于人多能干细胞(hiPSC)诱导技术设计并构建含有多种细胞类型的肾类器官,利用HE染色法和免疫荧光技术鉴定组织结构和细胞类型。②基于构建的人肾类器官模型,将顺铂20,50和75μmol·L^(-1)分别作用于人肾类器官模型48 h,观察肾类器官形态变化,Live/Dead染色法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肾损伤因子1(Kim-1)和炎症细胞因子白细胞介素8(IL-8)mRNA表达水平。结果①组织学和免疫荧光实验结果表明,hiPSC诱导分化后可产生成熟的人肾类器官,该类器官具有原始肾小管样结构,并包含近端肾小管、远端肾小管、足细胞、肾间质内皮细胞和肾小管上皮细胞在内的多种细胞类型。②单次给顺铂20,50和75μmol·L^(-1)均造成细胞形态结构的破坏,管状结构大量消失;Live/Dead染色结果表明,顺铂可引起肾类器官细胞凋亡,20μmol·L^(-1)组细胞存活率<50%,75μmol·L^(-1)组存活率接近0。与正常对照组比较,Kim-1和IL-8 mRNA水平在不同浓度顺铂致AKI模型中均显著升高(P<0.01)。结论成功构建人肾类器官模型,验证了使用人肾类器官体外模拟化疗药物致AKI的可行性,Kim-1联合IL-8有望为临床预测药物引发AKI的可能性和不良反应的应对措施提供科学依据和判断标准。 展开更多
关键词 急性肾损伤 肾类器官 顺铂 药物筛选
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酶解法清除猪皮α-Gal抗原的研究 被引量：2
2
作者 贠志敏 李素波 +4 位作者 张雪 檀英霞 季守平 高红伟 宫锋 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期938-940,共3页
目的利用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪皮细胞及基质的异种抗原(α-Gal抗原),降低猪皮基质敷料的免疫原性。方法 2月龄健康无皮肤疾患的猪皮皮片,经剖层裁切成不同的规格后,分别经碘酊和75%乙醇溶液浸泡消毒,随后用PBS... 目的利用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪皮细胞及基质的异种抗原(α-Gal抗原),降低猪皮基质敷料的免疫原性。方法 2月龄健康无皮肤疾患的猪皮皮片,经剖层裁切成不同的规格后,分别经碘酊和75%乙醇溶液浸泡消毒,随后用PBS清洗后进行酶解条件的摸索;采用免疫荧光法检测猪皮的α-Gal抗原,双抗夹心ELISA法检测残留酶,通过对酶解猪皮的残留酶和α-Gal抗原的检测进而优化、改进酶解条件和洗涤条件,以确立最佳酶解工艺。结果建立了有效的酶解方法和洗涤方法,酶解后猪皮的α-Gal抗原清除率>90%,残留酶不能检出(间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng/ml)。结论所建立的酶解工艺和洗涤工艺可有效清除猪皮细胞及基质的α-Gal抗原,建立了制备低免疫原性猪皮敷料的方法。 展开更多
关键词 猪皮 免疫原性 Α-半乳糖苷酶 α-Gal抗原 残留酶
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野生型和酶活缺失型人乙酰肝素酶慢病毒表达载体的构建及其验证 被引量：1
3
作者 万禄明 李素波 +4 位作者 贠志敏 张雪 高红伟 宫锋 檀英霞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期1050-1056,共7页
目的为构建野生型和酶活缺失型人乙酰肝素酶(HPA)的慢病毒表达载体,以探讨HPA的酶活性作用和非酶活性作用。方法根据GV358慢病毒质粒载体序列和HPA基因序列设计用于无缝克隆的引物,HPA的PCR扩增产物与线性化的GV358质粒载体连接,获得重... 目的为构建野生型和酶活缺失型人乙酰肝素酶(HPA)的慢病毒表达载体,以探讨HPA的酶活性作用和非酶活性作用。方法根据GV358慢病毒质粒载体序列和HPA基因序列设计用于无缝克隆的引物,HPA的PCR扩增产物与线性化的GV358质粒载体连接,获得重组慢病毒质粒。将经测序验证的重组慢病毒质粒与包装质粒共转染HEK-293T细胞,收取病毒感染液并感染HEL细胞,利用Western印迹法鉴定HPA过表达效果;利用流式细胞术检测细胞表面硫酸乙酰肝素(HS)的表达量;利用ELISA检测多配体蛋白聚糖1(syndecan-1)的释放量,以验证野生型和酶活缺失型HPA慢病毒表达载体的生物学效应。结果重组慢病毒质粒测序结果符合预期;Western印迹法检测结果表明,过表达HPA的HEL细胞有明显的HPA蛋白表达;流式细胞术结果显示,过表达野生型HPA的HEL细胞表面HS表达量的几何平均荧光强度(160.0±8.0)明显低于空载体对照细胞(345.0±15.2)(P<0.01);ELISA结果显示,过表达野生型HPA的HEL细胞培养基中多配体蛋白聚糖1的释放量(59.0±3.8)ng·L-1较空载体对照细胞(32.2±3.9)ng·L-1明显增多(P<0.01);而过表达酶活缺失型HPA的HEL细胞系细胞表面HS的表达量(353.0±14.0)和培养上清中多配体蛋白聚糖1的释放量(30.9±2.9)ng·L-1则与空载体对照细胞相当。结论成功构建了野生型和酶活缺失型的HPA慢病毒表达载体,并利用HEL细胞系对野生型和酶活缺失型HPA的生物学效应进行了验证,为研究HPA在机体病理生理过程中的作用机制提供了新的工具。 展开更多
关键词 乙酰肝素酶 酶活性 慢病毒 硫酸乙酰肝素 多配体蛋白聚糖1
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非培养皮肤细胞喷雾移植技术用于小型猪创伤修复的研究
4
作者 岳亮 贠志敏 +8 位作者 李素波 余群芳 任延玲 马瑞麟 崔宏图 钟鹏飞 张雪 宫锋 檀英霞 《军事医学》 CAS CSCD 2023年第2期104-110,共7页
目的 探讨非培养皮肤细胞结合喷雾移植技术用于小型猪全层皮肤损伤的修复治疗效果。方法 巴马小型猪背部两侧创建6个直径3 cm的全层皮肤切除创面,分生理盐水组、脱细胞猪真皮基质粉组(ADM组)、多点注射细胞治疗组(细胞注射组)和喷洒细... 目的 探讨非培养皮肤细胞结合喷雾移植技术用于小型猪全层皮肤损伤的修复治疗效果。方法 巴马小型猪背部两侧创建6个直径3 cm的全层皮肤切除创面,分生理盐水组、脱细胞猪真皮基质粉组(ADM组)、多点注射细胞治疗组(细胞注射组)和喷洒细胞治疗组(细胞喷洒组)进行治疗。术后连续监测实验动物的生理状况及创面愈合情况,切取创面组织进行HE染色和细胞角蛋白-10(CK10)、CK14及血管性血友病因子(VWF)免疫组织化学染色,评估创面皮肤损伤修复效果。结果 术后14 d开始,细胞喷洒组的愈合速度更快;21 d时,细胞喷洒组创面的新生皮肤和毛发等皮肤附属器产生。HE染色结果证明,细胞治疗促进皮肤再生,且细胞喷洒组修复效率更高、新生皮肤更薄、更均一。免疫组化结果证明,术后7 d开始,细胞喷洒组中CK10阳性新生皮肤组织更长,修复速度更快;修复后期,细胞喷洒组CK10/CK14阳性新生皮肤更平整光滑,实现了美学修复。另外,细胞喷洒组VWF阳性细胞出现的时间更早,数量更多,排列更规律整齐,证明其新生皮肤富含更多的血管和毛囊,实现了功能修复。结论 非培养皮肤细胞结合喷雾移植技术的应用显著提高了小型猪全层皮肤损伤的愈合效率,更重要的是实现了创面的功能及美学修复,为后续临床转化奠定了理论和技术基础。该技术为平、战时创面的早期救治开辟了一条新的有效途径,有望成为未来烧伤治疗的新模式。 展开更多
关键词 非培养皮肤细胞 细胞喷雾移植 全层皮肤损伤 创面修复 毛囊再生
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制备脆弱拟杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶单抗用于检测通用型红细胞中的微量残留酶 被引量：1
5
作者 李素波 贠志敏 +5 位作者 高红伟 张雪 檀英霞 张士坤 季守平 宫锋 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期302-305,共4页
目的建立一种检测微量脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)来源的α-半乳糖苷酶的方法用于测定酶解转变的通用型红细胞上的残留酶。方法用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶(纯度大于90%)免疫BALB/c小鼠,制备单抗;用稳定分泌抗体的... 目的建立一种检测微量脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)来源的α-半乳糖苷酶的方法用于测定酶解转变的通用型红细胞上的残留酶。方法用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶(纯度大于90%)免疫BALB/c小鼠,制备单抗;用稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株制备腹水单抗,再经HiT rap rP rotein A柱纯化获得高纯度的抗体;间接ELISA法测定单抗效价,Western印迹法评价单抗特异性。联合纯化后的单抗和兔多抗采用间接ELISA法检测酶解法制备的通用型红细胞和洗涤液中的残留酶量。结果获得了高效价高纯度的单抗,Western印迹实验显示该抗体可特异性地与新型α-半乳糖苷酶结合;间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1 ng/ml,红细胞按1∶4的体积比经4次洗涤后,其残留酶量<10 ng/ml。结论所建立的在血型转变过程中检测微量残留α-半乳糖苷酶的方法,可用于酶解法制备的通用型红细胞的安全性评价。 展开更多
关键词 Α-半乳糖苷酶 单克隆抗体 血型转变 通用型红细胞 残留酶检测
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灵芝孢子油抑制小鼠乳腺癌细胞生长作用研究 被引量：1
6
作者 孟飞 李素波 +8 位作者 张伟伟 张雪 贠志敏 杨媛媛 高红伟 檀英霞 季守平 梁磊 宫锋 《广州医药》 2016年第5期4-7,共4页
目的研究灵芝孢子油抑制肿瘤细胞增生的作用。方法通过"预防性"和"治疗性"喂食方法,观察并检测喂食过程中小鼠乳腺癌细胞生长速度及处死后的瘤重量。结果灵芝孢子油喂食组肿瘤生长速度较对照组慢,且预防性喂食组抑... 目的研究灵芝孢子油抑制肿瘤细胞增生的作用。方法通过"预防性"和"治疗性"喂食方法,观察并检测喂食过程中小鼠乳腺癌细胞生长速度及处死后的瘤重量。结果灵芝孢子油喂食组肿瘤生长速度较对照组慢,且预防性喂食组抑瘤效果好于"治疗性"喂食组。结论灵芝孢子油具有抑制小鼠乳腺癌生长的作用。 展开更多
关键词 灵芝孢子油 肿瘤细胞接种 瘤重 抗肿瘤活性
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α-半乳糖苷酶清除猪细胞表面的α-Gal抗原 被引量：1
7
作者 贠志敏 张雪 +5 位作者 李素波 檀英霞 冷泠 季守平 高红伟 宫锋 《生物技术通讯》 CAS 2014年第6期849-851,共3页
目的:探讨脆弱类杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪细胞表面α-Gal抗原的作用。方法:用不同浓度的α-半乳糖苷酶酶解猪红细胞、猪胚肾细胞PK15、猪睾丸细胞ST和原代培养的猪成纤维细胞上的α-Gal抗原,酶解温度为26℃,作用时间为2 h... 目的:探讨脆弱类杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪细胞表面α-Gal抗原的作用。方法:用不同浓度的α-半乳糖苷酶酶解猪红细胞、猪胚肾细胞PK15、猪睾丸细胞ST和原代培养的猪成纤维细胞上的α-Gal抗原,酶解温度为26℃,作用时间为2 h;用25μg/m L的FITC-IB4凝集素标记酶解前后的细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面α-Gal抗原的清除率。结果:流式细胞检测结果表明,不同组织来源的猪细胞表面的α-Gal抗原的表达量明显不同,所需酶的剂量也不同,但其表面的α-Gal抗原均能被α-半乳糖苷酶清除。结论:脆弱类杆菌来源的α-半乳糖苷酶可以清除猪细胞表面的α-Gal抗原,提示该酶对降低异种移植引起的超急性排斥反应有重要意义。 展开更多
关键词 异种抗原 α-Gal抗原 超急性排斥反应 Α-半乳糖苷酶
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政策性银行的资产风险应重视
8
作者 贠志敏 《甘肃金融》 1998年第5期54-49,共2页
近几年来,防范和化解金融风险受到党和政府的高度重视,也引起金融界、社会各界的极大关注,已摆在了商业银行和其他金融机构各项工作的中心位置,将有效防范和化解金融风险,提高经营管理水平同建立现代金融体系,金融制度和良好的金融秩序... 近几年来,防范和化解金融风险受到党和政府的高度重视,也引起金融界、社会各界的极大关注,已摆在了商业银行和其他金融机构各项工作的中心位置,将有效防范和化解金融风险,提高经营管理水平同建立现代金融体系,金融制度和良好的金融秩序,提高到深化金融体制改革的高度来认识,但农发行的资产风险同样存在,却没有受到应有的重视,就西和整个金融资产而言,农发行的资产占有一定的比例,按新的五级分类的办法划分,它的资产应划入第五级的占有相当高的比例,化解这部分资金风险困难很大,必须高度重视。 展开更多
关键词 政策性银行 资产风险 农发行 商业银行 农村信用社 化解金融风险 防范和化解 现代金融体系 扶贫贷款 贷款手续
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