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黄连解毒汤6种主要成分高效液相色谱检测方法的建立和应用
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作者 周芳芳 谷雪妹 +2 位作者 王微 林明 王蕾 《检验医学》 CAS 2024年第5期468-473,共6页
目的建立检测黄连解毒汤中6种主要成分的高效液相色谱(HPLC)方法。方法采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.03 mg·mL-1磷酸二氢钾-乙腈(V∶V=7∶3)为流动相,等度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测... 目的建立检测黄连解毒汤中6种主要成分的高效液相色谱(HPLC)方法。方法采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.03 mg·mL-1磷酸二氢钾-乙腈(V∶V=7∶3)为流动相,等度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为345 nm,柱温为37℃,进样量为20μL,建立检测黄连解毒汤6种主要成分(京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀)的HPLC方法。绘制HPLC检测6种成分的标准曲线,并进行方法学评价(线性、加样回收率、准确度和精密度、稳定性)。采用建立的HPLC方法检测黄连解毒汤样本。结果HPLC检测京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的线性范围分别为25.00~800.00、32.00~1024.00、20.00~640.00、20.30~650.00、13.13~420.00、25.00~800.00μg·mL-1,精密度和准确度均<2%,加样回收率分别为105.30%、102.88%、103.51%、107.76%、96.29%、99.34%。稳定性实验结果显示,室温放置24 h、反复冻融3次、2~8℃保存1周、-80℃冻存1个月,京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的峰面积相对标准偏差(RSD)均<2%,检测结果均稳定。采用HPLC检测黄连解毒汤的主要成分,浓度从高到低依次为药根碱(2799.00μg·mL-1)、小檗碱(2358.03μg·mL-1)、京尼平苷(1793.34μg·mL-1)、巴马汀(945.30μg·mL-1)、黄连碱(192.00μg·mL-1)、黄芩苷(171.00μg·mL-1)。结论建立的同时检测黄连解毒汤6种主要成分的HPLC方法快速、简便、重复性好、准确度高,可为后续黄连解毒汤的相关研究和临床应用奠定基础。 展开更多
关键词 黄连解毒汤 药根碱 小檗碱 京尼平苷 巴马汀 黄连碱 黄芩苷 高效液相色谱
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小檗碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抑菌作用
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作者 谷雪妹 周芳芳 +1 位作者 林明 王蕾 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3150-3154,共5页
目的观察小檗碱及其联合3种抗生素(庆大霉素、左氧氟沙星、阿米卡星)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抑菌效果。方法采用微量肉汤稀释法测定小檗碱、庆大霉素、左氧氟沙星、阿米卡星对26株临床分离的MRSA的MIC值;棋盘法测定小檗碱... 目的观察小檗碱及其联合3种抗生素(庆大霉素、左氧氟沙星、阿米卡星)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抑菌效果。方法采用微量肉汤稀释法测定小檗碱、庆大霉素、左氧氟沙星、阿米卡星对26株临床分离的MRSA的MIC值;棋盘法测定小檗碱联合庆大霉素、左氧氟沙星、阿米卡星对MRSA的MIC值,观察小檗碱对MRSA的抑菌效果;时间杀伤曲线研究小檗碱联合抗生素对MRSA的抑菌动力学。结果26株MRSA对苯唑西林耐药,5株对庆大霉素耐药,17株对左氧氟沙星耐药,6株对阿米卡星耐药,22株对克林霉素耐药,19株对环丙沙星耐药,21株对红霉素耐药,18株对莫西沙星耐药,1株对复方新诺明耐药,17株对四环素耐药,26株均对利福平、利奈唑胺、万古霉素均敏感。小檗碱对USA300的MIC值为128μg/mL,对26株MRSA的MIC范围为32~256μg/mL。小檗碱与庆大霉素联合后,4株(80%)呈相加作用;小檗碱与左氧氟沙星联合后,3株(17.64%)呈相加作用;小檗碱与阿米卡星联合后,4株(66.67%)呈协同作用,1株(16.67%)呈相加作用。64μg/mL小檗碱联合16μg/mL庆大霉素抑菌效果最好;64μg/mL小檗碱联合64、32μg/mL左氧氟沙星抑菌效果最好;32μg/mL小檗碱联合4μg/mL阿米卡星对MRSA02有较好的抑菌效果。结论小檗碱对MRSA有较理想的抑菌效果;小檗碱联合庆大霉素、阿米卡星对MRSA均有明显的抑菌作用。 展开更多
关键词 小檗碱 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 联合用药 抗生素 抑菌效果
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心肌肌钙蛋白Ⅰ自身抗体对心肌肌钙蛋白Ⅰ检测的影响及临床意义 被引量：2
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作者 谷雪妹 刘路遥 +1 位作者 任书文 何成山 《标记免疫分析与临床》 CAS 2023年第4期573-577,共5页
目的 探讨心肌肌钙蛋白Ⅰ自身抗体(cTnIAAb)对心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)检测的干扰程度及其临床意义。方法 采用cTnI-TnC亲和层析柱纯化血清中的cTnIAAb,进行特异性鉴定;选取15例cTnI阳性样本(cTnI>0.026ng/mL),分别加入不同蛋白量的cTnI... 目的 探讨心肌肌钙蛋白Ⅰ自身抗体(cTnIAAb)对心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)检测的干扰程度及其临床意义。方法 采用cTnI-TnC亲和层析柱纯化血清中的cTnIAAb,进行特异性鉴定;选取15例cTnI阳性样本(cTnI>0.026ng/mL),分别加入不同蛋白量的cTnIAAb,经cTnI检测系统测定cTnI原始浓度和回收浓度,计算cTnI下降率。结果 自身抗体阳性血清经亲和层析柱纯化得cTnIAAb 3.5mg,稀释后得cTnIAAb浓度为1ng/mL;cTnIAAb特异性实验中,随着加入cTnIAAb蛋白量增大,cTnI下降率逐渐升高,呈良好的多项式线性相关(R2=0.992);15例cTnI阳性样本,加入2μL cTnIAAb组出现cTnI低、中度降低血清分别为11份和4份;加入5μL cTnIAAb后出现cTnI低、中、高度降低的血清分别为2份、12份、1份;加入10μL cTnIAAb后出现cTnI中、高度降低的血清分别7份和8份;加入2μL、5μL、10μL cTnIAAb组lg(cTnI理论浓度)和cTnI下降率之间的相关系数r分别为-0.63(P<0.05)、-0.74(P<0.01)、-0.75(P<0.01),呈中等和强负相关关系。结论cTnIAAb可对cTnI检测产生明显的负性干扰,造成cTnI检测结果偏低,影响临床对心肌损伤类疾病的诊断。 展开更多
关键词 心肌肌钙蛋白I自身抗体 心肌肌钙蛋白I 检测 负性干扰
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小檗碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抑菌机制的研究 被引量：1
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作者 周芳芳 谷雪妹 +1 位作者 王蕾 林明 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1217-1221,共5页
目的探讨中药单体小檗碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)细胞膜完整性、通透性的影响以及细菌细胞壁结构的改变,为中药单体成分小檗碱在抗菌中的临床应用奠定基础。方法本研究采用非随机同期对照试验。收集上海市第八人民医院检验科2... 目的探讨中药单体小檗碱对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)细胞膜完整性、通透性的影响以及细菌细胞壁结构的改变,为中药单体成分小檗碱在抗菌中的临床应用奠定基础。方法本研究采用非随机同期对照试验。收集上海市第八人民医院检验科2019—2020年老年科患者下呼吸道样本分离培养的MRSA菌株3株。采用梅里埃VETEK MS全自动快速微生物质谱检测系统及VETEK 2 Compact全自动微生物鉴定仪鉴定细菌药敏实验检测细菌菌种及药敏;采用微量肉汤稀释法测定小檗碱对MRSA的最低抑菌浓度(MIC);采用培养基电导率实验观察不同浓度小檗碱对MRSA细胞膜通透性的改变;透射电子显微镜观察不同浓度小檗碱作用后MRSA细胞壁结构的变化。通过GraphPad Prism5统计软件,对电导率实验结果进行差异性分析。结果小檗碱对MRSA的MIC为64μg/ml;8μg/ml(1/8 MIC)、16μg/ml(1/4 MIC)、32μg/ml(1/2 MIC)、64μg/ml(1 MIC)、128μg/ml(2 MIC)小檗碱作用菌体4 h后,电导率分别增加了24.49%、34.59%、208.92%、196.40%及208.68%。透射电子显微镜观察发现低浓度(8μg/ml;1/8 MIC)小檗碱对细菌无明显破坏作用,MRSA菌体结构完整;中浓度(64μg/ml,1 MIC)小檗碱作用于MRSA后发现MRSA的细胞壁变薄;高浓度(512μg/ml;8 MIC)小檗碱诱导MRSA的细胞壁结构大量破坏溶解,菌体内容物大量外泄,导致细菌裂解死亡。结论小檗碱通过改变MRSA细胞膜通透性及破坏和溶解细胞壁的结构,达到杀灭细菌的作用。 展开更多
关键词 小檗碱 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 抑菌机制
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隐匿性乙型肝炎病毒感染者病毒基因跨膜结构变异性分析
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作者 何成山 谷雪妹 +1 位作者 刘洋 陆志成 《中国医药》 2023年第9期1324-1328,共5页
目的分析隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)感染(OBI)者血清样本中HBV S区基因跨膜结构(TM)突变导致的氨基酸替换现象,探讨造成HBV表面抗原(HBsAg)漏检的原因和临床意义。方法选取上海中医药大学附属第七人民医院检验科采集的28例OBI患者血清样本... 目的分析隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)感染(OBI)者血清样本中HBV S区基因跨膜结构(TM)突变导致的氨基酸替换现象,探讨造成HBV表面抗原(HBsAg)漏检的原因和临床意义。方法选取上海中医药大学附属第七人民医院检验科采集的28例OBI患者血清样本(OBI组)和10例慢性HBV感染(CHB)患者血清样本(CHB组)。采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增OBI组和CHB组HBV S区基因,扩增产物分别进行克隆测序和直接测序,进而进行核苷酸序列比对分析。结果OBI组TM1~TM4共26个位点发生185次突变,突变率为3.1%(185/6052),TM1、TM2、TM3、TM4突变率分别为1.6%(16/1020)、2.2%(28/1292)、4.2%(97/2312)、3.1%(44/1428)。CHB组TM发生4次突变,突变率为0.4%(4/890),TM1、TM2、TM3均未发生突变,TM4突变率为1.9%(4/210)。OBI组TM突变率、TM4突变率均高于CHB组,差异均有统计学意义(χ^(2)=19.92,P<0.01;χ^(2)=0.89,P=0.03)。OBI组TM1、TM2、TM3、TM4亲水性突变率分别为62.5%(10/16)、71.4%(20/28)、38.1%(37/97)、20.5%(9/44),4者比较差异有统计学意义(P<0.01)。OBI组共发现7种精氨酸替换突变,分别为C85R、L162R、W163R、W172R、L186R、W191R、C211R。结论HBV S区基因TM突变导致疏水性氨基酸替换为亲水性氨基酸,会导致临床上HBsAg的漏检,产生OBI现象。 展开更多
关键词 隐匿性乙型肝炎病毒感染 S区基因 跨膜结构 乙型肝炎病毒表面抗原
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YAP甲基化修饰促进肥胖发生的机制研究
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作者 谷雪妹 李智强 +6 位作者 高仁元 余海红 张陈 曹文悦 张雯 牛文豪 王平 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2021年第6期1193-1201,共9页
肥胖引起的并发症日益增多,严重影响人们的生理心理健康。该研究发现,YAP甲基化可以调节脂肪酸合成氧化促进肥胖的发生。使用Yap K327M(YAP第327位赖氨酸发生单甲基化修饰)转基因小鼠证明YAP甲基化修饰与肥胖表型的关系;采用qRT-PCR检... 肥胖引起的并发症日益增多,严重影响人们的生理心理健康。该研究发现,YAP甲基化可以调节脂肪酸合成氧化促进肥胖的发生。使用Yap K327M(YAP第327位赖氨酸发生单甲基化修饰)转基因小鼠证明YAP甲基化修饰与肥胖表型的关系;采用qRT-PCR检测方法分析YAP甲基化对脂肪酸合成和氧化过程中关键基因表达水平的影响;运用小鼠在体葡萄糖和生长因子耐受实验对Yap K327M转基因肥胖小鼠在体葡萄糖及生长因子水平进行检测以及对临床样品进行免疫组织化学分析。结果显示,YAP甲基化通过促进脂肪酸合成和抑制脂肪酸氧化,抑制葡萄糖和生长因子耐受,进而导致小鼠肥胖发生,并且肥胖病人脂肪组织中YAP甲基化水平显著提高。以上研究提示,YAP甲基化可能是临床肥胖诊断及预防的潜在标志物。 展开更多
关键词 肥胖 YAP甲基化 脂肪酸合成 脂肪酸氧化
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