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猪流感病毒的分离鉴定 被引量:61
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作者 李海燕 李雁冰 +7 位作者 于康震 毕英佐 辛晓光 秦运安 守林 冯菊艳 唐秀英 李维义 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期12-17,共6页
用SPF鸡胚从我国东北地区猪群中分离出 3株H3 N2 猪流感病毒 (SIV) ,分别命名为A/Swine/Heilongjiang/ 1/ 2 0 0 0、A/Swine/Heilogjiang/ 2 / 2 0 0 0和A/Swine/Heilogjiang/ 3/ 2 0 0 0。SIV分离株第 8代病毒液对 0 .5 %豚鼠红血球的... 用SPF鸡胚从我国东北地区猪群中分离出 3株H3 N2 猪流感病毒 (SIV) ,分别命名为A/Swine/Heilongjiang/ 1/ 2 0 0 0、A/Swine/Heilogjiang/ 2 / 2 0 0 0和A/Swine/Heilogjiang/ 3/ 2 0 0 0。SIV分离株第 8代病毒液对 0 .5 %豚鼠红血球的血凝价分别为2 0 48log2 、2 0 48log2 、40 96log2 ;将其制成琼扩 (AGP)抗原与禽流感标准阳性血清均出现清晰白色沉淀线 ;与流感病毒H3 亚型标准阳性血清的血凝抑制 (HI)价分别为 8log2 、7log2 、7log2 ,但不能被鸡新城疫阳性血清抑制。这 3株SIV都为热不稳定型 ;均能凝集驴、绵羊、鸡、兔、豚鼠、小鼠、大鼠、人O型血红血球 ,对马、牛红血球均不凝集 ;感染一个病毒最小致死量的鸡胚平均死亡时间分别为 86 .4、12 9.6和 91.2小时 ;每 0 .2ml病毒液鸡胚半数感染量分别为 4.75lg、4.5lg、和 6 .0lg ;对鸡的静脉内接种致病指数和脑内接种致病指数各为 0 .5 6、0 .32、0 .5 2和 0 .77、0 .38、0 .5 2 ;对小鼠的半数致死量分别为 2 .6lg、2 .0lg和 2 .5lg ;试验感染小鼠、豚鼠和猪均可发病并出现死亡。存活动物接种后第 6天和第 14天的血清 ,其HI价均在 8log2 以上 ,而AGP均为阴性。 展开更多
关键词 猪流感病毒 分离鉴定 生物学特性
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禽肺病毒的分离鉴定 被引量:56
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作者 沈瑞忠 曲立新 +5 位作者 于康震 李建伟 张建林 守林 徐宜为 唐桂运 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第1期76-77,共2页
禽肺病毒(APV)于1978年首次发现于南非,可引起火鸡鼻气管炎和鸡肿头综合症,至今未见其在中国存在的报道。我们从黑龙江省某肉种鸡场患肿头综合症的鸡中分离到了1株病毒。经鉴定,该病毒分离株缺乏血凝活性,具有典型的副粘... 禽肺病毒(APV)于1978年首次发现于南非,可引起火鸡鼻气管炎和鸡肿头综合症,至今未见其在中国存在的报道。我们从黑龙江省某肉种鸡场患肿头综合症的鸡中分离到了1株病毒。经鉴定,该病毒分离株缺乏血凝活性,具有典型的副粘病毒形态特征,可诱导特异性抗APV抗体的产生。因此可认定该病毒为1个APV分离株(命名为APV/Chicken/China/1/98)。 展开更多
关键词 禽肺病毒 分离 鉴定
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腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定 被引量:38
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作者 荣骏弓 康丽娟 +5 位作者 守林 吴东来 尹训南 王云峰 江国托 褚桂芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期124-127,共4页
从1997年在辽宁省大连市某鸡场发生的一种以腺胃肿大为特征的鸡的传染病病例中收集腺胃组织(D971)接种SPF鸡胚,传至13代,具有规律性死亡和典型胚胎病变特征,EID50为10-6.48/0.2ml。D971毒株感... 从1997年在辽宁省大连市某鸡场发生的一种以腺胃肿大为特征的鸡的传染病病例中收集腺胃组织(D971)接种SPF鸡胚,传至13代,具有规律性死亡和典型胚胎病变特征,EID50为10-6.48/0.2ml。D971毒株感染SPF鸡胚尿囊液经负染电镜观察,可见直径为80~120nm,有囊膜和纤突的冠状病毒粒子。D971毒株经卵磷脂酶C处理后能凝集鸡红细胞,并能特异的被D971多抗所抑制。用反转录聚合酶链反应获得了D971毒株免原(S1)基因cDNA,经1%琼脂糖凝胶电泳可见1.7kb的特征性条带。用D971毒株接种SPF鸡,能引起与自然病例相似的病理变化,并分离到病毒。用D971毒株可直接感染SPF鸡胚成纤维细胞。结果证实从腺胃病变型IB鸡群中分离的D971毒株是冠状病毒科IBV成员。 展开更多
关键词 传染性支气管炎 冠状病毒
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鸡传染性法氏囊病超强毒毒株的分离和初步鉴定 被引量:43
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作者 李德山 武志强 +4 位作者 陈冠春 王笑梅 守林 郝桂玉 尹训南 《中国畜禽传染病》 CSCD 1991年第6期3-7,共5页
从死亡率高达55%的鸡传染性法氏囊病(IBD)发病鸡群的病例中分离到一株IBD强毒。该强毒可使人工发病鸡36小时发病,发病率100%,死亡率60%。剖检可见到与野外病例相同的病理变化,如肌肉、心脏、腺胃出血,法氏囊呈“紫葡萄”样外观。免... 从死亡率高达55%的鸡传染性法氏囊病(IBD)发病鸡群的病例中分离到一株IBD强毒。该强毒可使人工发病鸡36小时发病,发病率100%,死亡率60%。剖检可见到与野外病例相同的病理变化,如肌肉、心脏、腺胃出血,法氏囊呈“紫葡萄”样外观。免疫保护性试验、血清学试验、鸡胚接种和电镜形态学观察均证明该分离物为IBD病毒。并排除了新城疫和大肠杆菌混合感染,从而表明,我国鸡群中存在不同于经典IBD病毒的超强毒变异株。 展开更多
关键词 分离 IBD 超强毒毒株
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猪繁殖与呼吸综合征病毒形态学特征 被引量:11
5
作者 李成 李六金 +5 位作者 守林 蔡虹 姜焕宏 赵世君 张海 李秦 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期563-567,共5页
应用电镜和免疫金电镜技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒的中国分离株进行了形态学研究。该病毒粒子直径约 5 5nm ,多数呈球形 ,有囊膜 ,但在其囊膜上没有发现纤突结构。在病毒粒子中央部可观察到拟核 (核衣壳 ) ,其直径约为 4 0nm。在宿主... 应用电镜和免疫金电镜技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒的中国分离株进行了形态学研究。该病毒粒子直径约 5 5nm ,多数呈球形 ,有囊膜 ,但在其囊膜上没有发现纤突结构。在病毒粒子中央部可观察到拟核 (核衣壳 ) ,其直径约为 4 0nm。在宿主细胞浆的空泡膜及滑面内质网小池膜上“出芽” ,成熟的病毒粒子多蓄积在空泡腔内。病毒增殖数量与其适应宿主细胞程度有密切关系。 展开更多
关键词 繁殖 呼吸综合征病毒 电镜技术 形态学
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鹅细小病毒HG5/82株的分离鉴定及生物学特性的研究 被引量:23
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作者 李桂霞 刘胜旺 +2 位作者 孔宪刚 守林 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期196-201,共6页
本研究通过对1982年黑龙江某鹅场发生的鹅细小病毒病疑似病例的肝病变组织病毒分离,进行回顾性研究。将肝脏加PBS研磨后,-70℃/37℃反复冻融三次,除菌过滤后接种12日龄鹅胚。发现病毒对鹅胚的致死时间为5~6d,胚体体表有轻微出血点。鹅... 本研究通过对1982年黑龙江某鹅场发生的鹅细小病毒病疑似病例的肝病变组织病毒分离,进行回顾性研究。将肝脏加PBS研磨后,-70℃/37℃反复冻融三次,除菌过滤后接种12日龄鹅胚。发现病毒对鹅胚的致死时间为5~6d,胚体体表有轻微出血点。鹅胚尿囊液经磷钨酸染色,可见具有典型特征的细小病毒粒子。将该病毒尿囊液在12日龄鹅胚中连续传16代,随着传代次数的增加,胚体多集中在3~4d死亡。病毒传至第三代时死亡胚体头、颈、背部出现较为严重的出血点,体表有水肿。第五代病毒尿囊液(命名为HG5/82)对12日龄鹅胚的ELD50为10-5.92/0.1mL。将20只12日龄雏鹅分为三个试验组和一个阴性对照组,各组分别接种鹅胚尿囊液104.92ELD50、103.92ELD50、102.92ELD50及生理盐水,发现雏鹅接种HG5/82后4d出现轻微腹泻,随后恢复正常。用套式PCR检测雏鹅肛拭子病毒的体外排放情况。发现三个试验组在接种病毒后1~20d用套式PCR均可检测到病毒。对照组及试验组接种后20~56d没有检测到病毒。将套式PCR产物进行序列测定并于参考毒株进行比较,表明该序列具有GPV相应区域的共同分子特征,与GPV参考毒株B的相应序列同源性达93.6%。本研究结果表明,该分离毒株为典型的鹅细小病毒(GooseParvovirus,GPV),对雏鹅的致病力较弱。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 分离 鉴定 生物学特性 小鹅瘟
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快速检测动物病毒电镜技术 被引量:26
7
作者 李成 守林 +4 位作者 姜绍德 蔡虹 黄金华 张坦 郝桂玉 《中国畜禽传染病》 CSCD 1997年第6期14-19,共6页
经多年研究,提出了适用于快速检出和鉴定动物病毒的系列电镜样品制备技术。该技术包括离子交换捕捉、微波幅射、高速离心、免疫金标方法。通过与常规法对比试验证实了离子交换捕捉法具有防腐保鲜作用,其浓缩样品的程度相当于超速离心... 经多年研究,提出了适用于快速检出和鉴定动物病毒的系列电镜样品制备技术。该技术包括离子交换捕捉、微波幅射、高速离心、免疫金标方法。通过与常规法对比试验证实了离子交换捕捉法具有防腐保鲜作用,其浓缩样品的程度相当于超速离心法,简便易行,适用于远距离运送样品的检测;微波幅射改进法,不但加快了包埋制样速度,而且也提高了包埋质量;高速离心沉淀法快速简便,提高了检出率;免疫金标法不但提高了检出率,而且对于非典型及形态特征性不强的病毒粒子也能作出准确的诊断。可根据不同种类、不同目的的样品采取不同的制样方法,形成了系列化技术。此技术经农牧区、边疆、兽医生药厂、高等院校、科研单位以及海关进出口检疫等送检样品的验证,完全是可行的。应用该技术可快速、准确地诊断动物病毒病。 展开更多
关键词 电镜技术 离子交换捕捉 微波幅值 动物病毒
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猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育和鉴定 被引量:26
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作者 刘长明 张超范 +3 位作者 危艳武 谭斌 陆月华 守林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期248-252,共5页
从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,采用无污染的猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞培养,... 从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)淋巴组织病料,经聚合酶链式反应(PCR)证实为猪圆环病毒2型(PCV2)感染,采用无污染的猪肾细胞系(PK15)分离培养,并连续传代培育成一株细胞培养适应毒,命名为PCV2/LG株。分离毒株经细胞培养,于第25代后毒价显著升高,于第35代毒价可达105.6TCID50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明,分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质中;病毒感染的阳性细胞呈散在分布,阳性细胞数可达50%以上;免疫电镜观察到与PCV2特异抗体结合形成的病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团,病毒粒子直径约为17nm;病毒抗原基因组由1768个核苷酸组成,与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达96.2%以上。用2mL的病毒细胞培养物(105.6TCID50/mL)接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头,可引起典型PMWS临床症状。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 病毒分离鉴定 毒株培育 细胞质
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鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达 被引量:6
9
作者 刘胜旺 孔宪刚 +3 位作者 王玮 高磊 童光志 守林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期401-403,共3页
利用反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_polymeraseChainReaction ,PT_PCR)技术扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)中国地方分离株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,结果表明该病毒株核蛋白基因长度为 12 3 0bp ,编码蛋白由... 利用反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_polymeraseChainReaction ,PT_PCR)技术扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)中国地方分离株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,结果表明该病毒株核蛋白基因长度为 12 3 0bp ,编码蛋白由4 0 9个氨基酸残基组成。与已发表的参考毒株进行核苷酸同源性比较 ,发现与澳大利亚群毒株的亲缘关系最为密切。在此基础上 ,本实验构建了杆状病毒重组转移载体pBlue_N ,将其与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9昆虫细胞 ,经过三轮蚀斑纯化和PCR鉴定 ,获得重组杆状病毒rBac_N。SDS_PAGE分析和Westernblot检测的结果表明核蛋白基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞内获得表达 ,融合蛋白表达量占细胞蛋白总量的 19.4 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 核蛋白 基因序列 重组杆状病毒 表达
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鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离与初步鉴定 被引量:12
10
作者 武志强 李德山 +1 位作者 守林 尹训南 《中国畜禽传染病》 CSCD 1992年第3期6-7,共2页
从死亡率达30%的鸡传染性支气管炎(BI)发病鸡群中分离到一株IB病毒(IBV),命名为NB_(90)株。该株可使鸡于接种后48小时80%发病,20%死亡。鸡胚接种试验和电镜形态学观测证明该分离物为IBV,血清中和试验表明,与国外肾型IBV标准株(美国的... 从死亡率达30%的鸡传染性支气管炎(BI)发病鸡群中分离到一株IB病毒(IBV),命名为NB_(90)株。该株可使鸡于接种后48小时80%发病,20%死亡。鸡胚接种试验和电镜形态学观测证明该分离物为IBV,血清中和试验表明,与国外肾型IBV标准株(美国的G株和澳大利亚的T株)抗原性相同;与IBV标准株M_(41)抗原性不同。初步鉴定分离株NB_(90)是肾型IBV株。 展开更多
关键词 传染性 支气管炎 病毒 分离
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马传染性贫血病毒弱毒疫苗株感染性分子克隆的构建 被引量:6
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作者 王柳 童光志 +3 位作者 仇华吉 守林 涂亚斌 杨志彪 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1560-1565,共6页
采用PCR方法分 3段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株 (EIAVDLA)的前病毒DNA ,这 3个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组 ,PCR产物经克隆后顺次连接 ,获得 1个含有EIAV全基因 (8.0kb)的重组质粒 ,将其命名为p8.0。将此 8.0kb... 采用PCR方法分 3段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株 (EIAVDLA)的前病毒DNA ,这 3个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组 ,PCR产物经克隆后顺次连接 ,获得 1个含有EIAV全基因 (8.0kb)的重组质粒 ,将其命名为p8.0。将此 8.0kbEIAV全基因再亚克隆到含有一完整EIAVDLA株长末端重复序列的质粒中 ,获得一含有EIAV驴白细胞弱毒前病毒全基因的重组质粒 ,将其命名为p8.2 ,经核苷酸序列分析 ,证明p8.2含有EIAV前病毒的全基因。用p8.2转染驴白细胞 ,将其作为种毒进行传代 ,于感染该克隆毒的细胞培养上清中检测出了反转录酶活性 ,说明在驴白细胞中由p8.2衍生出了EIA病毒。驴白细胞经该克隆毒感染后 ,第 4天出现病变 ,经透射电镜可观察到典型的马传染性贫血病毒粒子 ,进一步证明p8.2具有感染性 ,笔者获得了马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆 。 展开更多
关键词 传染性贫血病毒 弱毒疫苗株 感染性 分子克隆 基因构建
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禽网状内皮组织增殖病琼脂免疫扩散抗原的研制及应用 被引量:11
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作者 荣骏弓 王笑梅 +4 位作者 幸桂香 尹训南 周方红 守林 徐哮 《中国畜禽传染病》 CSCD 1997年第5期29-33,共5页
禽网状内皮组织增殖病(RE)琼脂免疫扩散抗原为淡粉红色液体,具有良好的特异性,与抗鸡马立克氏病、鸡传染性法氏囊病、禽白血病、鸡传染性贫血病、鸡新城疫病毒标准阳性血清不发生交叉反应。抗原还具有良好的敏感性,在实验室对人... 禽网状内皮组织增殖病(RE)琼脂免疫扩散抗原为淡粉红色液体,具有良好的特异性,与抗鸡马立克氏病、鸡传染性法氏囊病、禽白血病、鸡传染性贫血病、鸡新城疫病毒标准阳性血清不发生交叉反应。抗原还具有良好的敏感性,在实验室对人工感染REV的SPF鸡7天即可检出抗体,检出率为40%,14天检出率为100%。抗原在37℃保存7天,在15℃保存15天,在4℃保存30天,在-20℃至少保存180天,未见效价下降。用本抗原检查血清沉淀抗体来诊断RE,是一种特异,敏感简便的方法,适于在生产中推广应用。 展开更多
关键词 禽病 网状内皮组织 增殖病 琼脂免疫扩散 抗原
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腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒分离株(IBV-D971)对SPF鸡的致病力试验 被引量:10
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作者 荣骏弓 吴东来 +2 位作者 守林 李桂芝 褚桂芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第4期297-300,共4页
用腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒分离株 I B V D971 毒株接种1 日龄 S P F 鸡, 可引起60 % 死亡。该毒在 S P F 鸡体传2 代后, 接种1 日龄 S P F 鸡, 可引起100 % 死亡。对人工感染病例进行了系统的... 用腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒分离株 I B V D971 毒株接种1 日龄 S P F 鸡, 可引起60 % 死亡。该毒在 S P F 鸡体传2 代后, 接种1 日龄 S P F 鸡, 可引起100 % 死亡。对人工感染病例进行了系统的病理学观察, 主要的眼观病理变化为腺胃胃壁增厚、乳头消失或乳头扁平, 乳头顶部凹陷坏死, 肾肿大、尿酸盐沉积。主要的组织学变化为腺胃粘膜上皮坏死脱落、固有层水肿、有炎性细胞浸润、肌层有淋巴细胞浸润、肌细胞坏死、腺小叶腺细胞坏死、核浓缩。小肠粘膜绒毛上皮增生、呈复层结构、固有层水肿、有大量淋巴细胞浸润。肾间质水肿、细尿管和肾小球间质内有淋巴细胞浸润。肝、心等实质细胞变性, 以至局灶性坏死。脾、胸腺及法氏囊的淋巴组织萎缩等, 人工感染鸡病例和自然发病鸡的病理变化基本相同。 展开更多
关键词 腺胃病变型 传染性支气管炎 致病力 IB
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应用电镜技术对病毒混合感染的研究 被引量:7
14
作者 守林 高磊 +3 位作者 荣骏弓 吴东来 蔡虹 李成 《电子显微学报》 CAS CSCD 2000年第3期331-332,共2页
关键词 电镜 病毒混合感染
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牛外周血T、B和单核细胞的分离、鉴定及扫描电镜观察 被引量:5
15
作者 于康震 卢景良 守林 《中国兽医科技》 CSCD 1989年第12期5-7,共3页
将等密度离心技术、纤维结合素粘附技术和免疫亲和粘附技术相结合,建立了牛T、B和单核细胞的分离方法。制备了兔抗牛Ig和鼠抗牛胸腺细胞血清,并对上述3种细胞作了直接和间接免疫荧光试验及非特异性酯酶染色检查。还利用扫描电镜技术对这... 将等密度离心技术、纤维结合素粘附技术和免疫亲和粘附技术相结合,建立了牛T、B和单核细胞的分离方法。制备了兔抗牛Ig和鼠抗牛胸腺细胞血清,并对上述3种细胞作了直接和间接免疫荧光试验及非特异性酯酶染色检查。还利用扫描电镜技术对这3种细胞作了形态学观察。结果表明,所制备的牛T、B和单核细胞的纯度分别达95%、93%和89%,并证明T细胞表面较光滑,B细胞表面较粗糙,单核细胞表面具有皱膜样结构。 展开更多
关键词 T细胞 B细胞 单核细胞 分离
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腺胃型鸡传染性支气管炎病毒Hu98株的分离鉴定 被引量:8
16
作者 荣骏弓 尹训南 +5 位作者 守林 褚桂芳 王丽滨 仇波 宣大蔚 薛克云 《中国兽医科技》 CSCD 2000年第6期23-25,共3页
1998年首次从哈尔滨市某鸡场鸡腺胃肿大为特征的病例中分离到IBV Hu98毒株。将该病毒株接种SPF鸡胚并传至 5代 (F5) ,结果接种胚出现规律性死亡和典型胚胎病变特征 ,EID50 为 10 -6.4 0 / 0 . 2mL。IBV Hu 98F5感染SPF鸡胚尿囊液经负染... 1998年首次从哈尔滨市某鸡场鸡腺胃肿大为特征的病例中分离到IBV Hu98毒株。将该病毒株接种SPF鸡胚并传至 5代 (F5) ,结果接种胚出现规律性死亡和典型胚胎病变特征 ,EID50 为 10 -6.4 0 / 0 . 2mL。IBV Hu 98F5感染SPF鸡胚尿囊液经负染电镜观察 ,可见直径为 80 12 0nm、有囊膜和纤突的冠状病毒粒子。用IBV Hu98F5毒株人工感染 1日龄SPF鸡能引起与自然病例相似的病理组织学变化 ,死亡率为 80 % ( 4 / 5 ) ,用IBV Hu 98J1人工感染 1日龄SPF鸡死亡率为 10 0 % ( 5 / 5 ) ,并可从死亡鸡中分离到冠状病毒。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎 腺胃病变型 分离鉴定 病毒
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猪生殖-呼吸道综合征国内分离毒株的病毒纯化及其结构蛋白分析 被引量:4
17
作者 蔡雪晖 刘文兴 +4 位作者 郭宝清 李成 守林 柴文君 徐哮 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第4期272-274,共3页
本研究主要对猪生殖呼吸道综合征( P R R S) 国内分离毒株( C H Ia) 进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇( P E G6000) 沉淀和差速离心法粗提了经 Marc145 细胞系增殖的猪生殖呼吸... 本研究主要对猪生殖呼吸道综合征( P R R S) 国内分离毒株( C H Ia) 进行了病毒纯化及其结构蛋白的分析。选用聚乙二醇( P E G6000) 沉淀和差速离心法粗提了经 Marc145 细胞系增殖的猪生殖呼吸道综合征病毒( P R R S V) 。并采用非线性蔗糖密度梯度离心法纯化了 P R R S V, 经免疫电镜观察纯化病毒, 发现有较多的胶体金颗粒吸附在直径为42 ~78nm 的病毒粒子周围。经 Dot E L I S A 测定纯化病毒的滴度可达1 1600 以上, 并利用 S D S P A G E 和 Westernblot 两种方法对国内分离毒株( C H Ia) 与欧洲型( Lelystad) 、美洲型( V R2332) 等参考毒株的病毒结构蛋白组成和部分抗原特性进行了初步的研究。测得国内分离毒株主要结构蛋白的分子量为145 K D,192 K D 和263 K D, 并均能被 P R R S V 的高免血清识别, 这与国外的同类报道很相似。 展开更多
关键词 PRRS 生殖呼吸综合征 病毒 纯化
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我国鸡传染性支气管炎病毒LD3/01/07的分离鉴定 被引量:5
18
作者 刘胜旺 孔宪刚 +2 位作者 刘玉芬 杜恩岐 守林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期121-127,共7页
将我国黑龙江省某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的濒死病鸡肾脏组织加PBS缓冲液后研磨 ,- 70℃ / 37℃反复冻融三次 ,离心并进行无菌过滤后接种 10日龄SPF鸡胚。 72小时取尿囊液进行电镜观察并用 1%胰酶处理 ,观察对鸡红... 将我国黑龙江省某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的濒死病鸡肾脏组织加PBS缓冲液后研磨 ,- 70℃ / 37℃反复冻融三次 ,离心并进行无菌过滤后接种 10日龄SPF鸡胚。 72小时取尿囊液进行电镜观察并用 1%胰酶处理 ,观察对鸡红细胞的凝集情况。结果发现尿囊液中存在典型的冠状病毒粒子 ,而且用胰酶处理过的尿囊液能够凝集SPF鸡的红细胞 ,初步鉴定为鸡的传染性支气管炎病毒 (InfectiousBronchitisVirus ,IBV)。将该病毒尿囊液在 10日龄SPF鸡胚上连续传 8代 ,通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒在电镜下的形态特征、病毒在鸡胚中的增殖动态以及病毒凝集鸡红细胞的特性等对该毒株进行研究。结果表明 :该毒株的第一代尿囊液中病毒的滴度很高 ,可达到 8log2 ,且胚体表现轻度出血 ,但实质器官未见肉眼可见的病变 ;第二代病毒即可致胚体严重病变 ;病毒在鸡胚中随着接种病毒后时间的延长 ,其滴度逐渐增高 ;经 1%胰酶处理后的各代病毒尿囊液可凝集鸡红细胞。鸡胚的第三代病毒尿囊液 (命名为LD3/ 0 1/0 7)分别接种 1日龄和 30日龄的SPF鸡 ,发现对不同日龄的鸡表现不同的致病性 ,对 1日龄接种鸡和同笼饲养的对照鸡致病力高 ,发病率和致死率均为 10 0 % ,(接种和同居感染各 4只 ,均死亡 ) ,30日龄接种和同居感? 展开更多
关键词 鸡传染性支气管病毒 LD3/01/07 分离鉴定
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马传染性贫血强/弱毒嵌合病毒的体外构建 被引量:3
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作者 涂亚斌 王柳 +3 位作者 仇华吉 温建新 守林 童光志 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期179-181,共3页
Equine infectious anemia virus (EIAV) causes equine infectious anemia and persistent infection as well as repeated high-titer viremia in horses.The long-terminal repeat (LTR) of EIAV proviral genome contains an eukary... Equine infectious anemia virus (EIAV) causes equine infectious anemia and persistent infection as well as repeated high-titer viremia in horses.The long-terminal repeat (LTR) of EIAV proviral genome contains an eukaryotic promoter which plays an important regulation role on transcription and replication of the virus.In the study,the LTRs of an infectious molecular clone derived from EIAV donkey leukocyte-attenuated vaccine virus (DLA) were substituted with those of EIAV L strain,a virulent EIAV from which DLA strain was derived,resulting in a chimeric plasmid pOK-LTR DLA/L.The purified pOK-LTR DLA/L was used to transfect leukocyte cultures from EIAV-negative donkey.Reverse transcriptase (RT) activity was detectable by the 7th passage in cell cultures of the transfection products.The cytopathogenic effects typical for EIAV infection were developed since the 8th passage of cell cultures,and virions with cone-shaped core could be observed under electron microscope.It proved that the constructed chimeric pOK-LTR DLA/L is infective and it may be used in future for exploring of molecular mechanism of pathogenesis and immunity of EIAV. 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 嵌合病毒 长末端重复序列 分子克隆
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鸭瘟鸡胚化疫苗毒的电镜观察 被引量:4
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作者 李成 守林 +4 位作者 姜绍德 郝桂玉 张坦 蔡虹 黄金华 《中国畜禽传染病》 CSCD 1996年第1期50-51,共2页
鸭瘟鸡胚化疫苗毒的电镜观察李成,谷守林,姜绍德,郝桂玉,张坦,蔡虹,黄金华(中国农科院哈尔滨兽医研究所)鸭瘟(Duckplaque)是鸭、鹅及天鹅的一‘种急性、接触性、败血性传染病。临诊特征是软弱、腹泻、流泪,两脚麻... 鸭瘟鸡胚化疫苗毒的电镜观察李成,谷守林,姜绍德,郝桂玉,张坦,蔡虹,黄金华(中国农科院哈尔滨兽医研究所)鸭瘟(Duckplaque)是鸭、鹅及天鹅的一‘种急性、接触性、败血性传染病。临诊特征是软弱、腹泻、流泪,两脚麻痹和部分病鸭头颈部发生肿大。肝脏有... 展开更多
关键词 鸭病 鸭瘟 鸡胚化疫苗 病毒 电镜
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