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一株猪源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及耐药性、耐药基因的检测 被引量：10
1
作者 谭耀荣 李迪 +4 位作者 郑瑶瑶 陈雨琪 苏江南 燕晓玲 马静云 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第6期57-62,共6页
为了确定发病母猪组织是否感染病原菌及调查病原菌耐药情况,试验对发病母猪组织进行细菌分离培养,经过培养观察、生化试验、16S rRNA测序确定分离菌株,对分离菌株进行药敏试验、小鼠致病性试验、耐药基因检测、常见血清型分型及毒力基... 为了确定发病母猪组织是否感染病原菌及调查病原菌耐药情况,试验对发病母猪组织进行细菌分离培养,经过培养观察、生化试验、16S rRNA测序确定分离菌株,对分离菌株进行药敏试验、小鼠致病性试验、耐药基因检测、常见血清型分型及毒力基因检测。结果表明:分离得到一株肺炎克雷伯氏菌。分离菌株的16S rRNA测序结果与NCBI上18株肺炎克雷伯氏菌参考菌株序列同源性均在99%以上。分离菌株接种在血琼脂培养基上会发生α溶血现象,且具有多重耐药性,携带四环素类tet耐药基因,氨基糖苷类aph(3′)-Ia、strA、strB耐药基因,磺胺类sul 1、sul 2耐药基因及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)耐药基因blaSHV,与耐药表型结果一致。分离菌株血清型分型为K20型,含有ureA、wabG、uge毒力基因。在小鼠致病性试验中,以浓度为6.15×10^8cfu/mL的菌液进行攻毒,能够使小鼠在22 h内死亡,表明分离菌株对小鼠具有致病性。说明本试验所分离得到的猪源肺炎克雷伯氏菌具有严重的耐药性和强致病性。 展开更多
关键词 猪 肺炎克雷伯氏菌 分离鉴定 致病性 耐药基因 血清型
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猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：8
2
作者 周芝海 谭耀荣 +3 位作者 郑瑶瑶 曾繁文 麦凯杰 马静云 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1179-1186,共8页
为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)核衣壳(N)蛋白多克隆抗体,采用PCR方法扩增SADS-CoV/CN/GDGL/2017毒株N基因片段,并对N基因的序列以及N蛋白氨基酸突变位点进行分析。随后,将N基因片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)构建重组... 为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)核衣壳(N)蛋白多克隆抗体,采用PCR方法扩增SADS-CoV/CN/GDGL/2017毒株N基因片段,并对N基因的序列以及N蛋白氨基酸突变位点进行分析。随后,将N基因片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化N蛋白,通过免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体。结果表明,扩增的N基因片段和所构建的重组质粒正确无误,成功诱导表达出可溶性重组蛋白SADS-CoV-N,分子质量约为67 ku,最佳诱导时间为6 h。Western-blot以及间接免疫荧光试验结果表明,该多克隆抗体能特异性检测SADS-CoV,证明重组蛋白有良好的免疫原性。本研究为后续建立SADS-CoV快速诊断方法及该病毒致病机制的深入研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体
原文传递
芦荟大黄素对高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与转移的影响 被引量：8
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作者 何振辉 黄越群 +4 位作者 翁闪凡 谭耀荣 何太平 覃燕梅 梁念慈 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1481-1485,共5页
目的:研究芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与转移的影响。方法:MTT法检测AE对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;细胞-基质粘附试验检测AE对MDA-MB-231细胞粘附纤连蛋白(FN)、层连蛋白(LN)能力的影响;Transwe... 目的:研究芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭与转移的影响。方法:MTT法检测AE对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;细胞-基质粘附试验检测AE对MDA-MB-231细胞粘附纤连蛋白(FN)、层连蛋白(LN)能力的影响;Transwell chamber法检测AE对MDA-MB-231细胞侵袭重组基底膜能力的影响;伤口愈合试验检测AE对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响。裸小鼠模型观察AE对MDA-MB-231细胞实验性转移的影响。结果:80μmol/L AE能显著抑制MDA-MB-231细胞体外侵袭重组基底膜能力,显著抑制MDA-MB-231细胞粘附FN、LN的能力,其抑制率分别为(52.98±5.46)%,(34.99±2.63)%,(28.73±7.00)%。作用于MDA-MB-231细胞24 h后,AE能显著抑制MDA-MB-231细胞的迁移,80μmol/L AE处理的MDA-MB-231细胞在裸小鼠中形成肺转移结节的数量、体积明显减少。结论:AE抑制MDA-MB-231细胞的转移,其作用机制与抑制MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力有关。 展开更多
关键词 芦荟大黄素 粘附 侵袭 转移 乳腺癌
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