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我国分子诊断的现状及问题 被引量:12
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作者 沈立松 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期473-476,共4页
分子诊断近年来发展迅速,应用于遗传性疾病的诊断、感染性病原体检测、肿瘤易感基因检测与分子分型、伴随诊断和预后评估等领域,在疾病的诊断和治疗中发挥越来越重要的作用。我国从20世纪80年代起开展分子检测,目前应用于临床的分子... 分子诊断近年来发展迅速,应用于遗传性疾病的诊断、感染性病原体检测、肿瘤易感基因检测与分子分型、伴随诊断和预后评估等领域,在疾病的诊断和治疗中发挥越来越重要的作用。我国从20世纪80年代起开展分子检测,目前应用于临床的分子诊断技术主要有流式细胞术、荧光原位杂交、定量 PCR、微阵列芯片和 DNA 测序等。分子诊断技术弥补了常规检验的不足,将现代检验医学推向了新的高度。随着转化医学的不断发展,未来将有更多的分子诊断技术走向临床。但我国目前分子诊断存在地区发展不平衡、相关政策不配套、实验室建设不规范、质量监督不完善等问题,需要政府、医院、专业协会和实验室共同努力,促进其健康规范发展。 展开更多
关键词 分子诊断技术 临床实验室技术 医学检验科学
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人卵巢癌相关抗原OVA66的B细胞表位预测 被引量:6
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作者 刘争春 王颖 +5 位作者 王树军 张惠珍 荣婷婷 王庆飞 葛海良 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第4期513-516,共4页
目的:预测人卵巢癌相关抗原OVA66的B细胞表位。方法:B细胞表位预测,以单参数(亲水性、可及性、柔韧性、极性)预测为基础,结合ABCpred预测结果,并经二级结构预测筛选等综合分析。结果:OVA66的B细胞表位可能位于209-216,266-275,294-301,3... 目的:预测人卵巢癌相关抗原OVA66的B细胞表位。方法:B细胞表位预测,以单参数(亲水性、可及性、柔韧性、极性)预测为基础,结合ABCpred预测结果,并经二级结构预测筛选等综合分析。结果:OVA66的B细胞表位可能位于209-216,266-275,294-301,362-368和391-396氨基酸残基的区域内或附近。结论:该结果对应用合成肽抗原进行肿瘤患者的早期诊断研究具有重要指导意义。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 T淋巴细胞 细胞毒性 表位 B淋巴细胞 抗原 肿瘤相关 碳水化合物
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编码鸡CD8α链无信号肽基因片段的克隆与表达 被引量:3
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作者 鲍鸣 +2 位作者 仲大莲 余为一 李槿年 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期56-60,共5页
应用RT-PCR技术,通过自行设计的1对引物以ConA诱导的鸡胸腺淋巴细胞RNA为模板,扩增出编码鸡CD8α链的无信号肽基因片段,大小为651 bp。该片段经酶切初步鉴定后,被插入pMD18-T载体进行测序,发现与已发表的鸡CD8α链基因序列的同源性达98... 应用RT-PCR技术,通过自行设计的1对引物以ConA诱导的鸡胸腺淋巴细胞RNA为模板,扩增出编码鸡CD8α链的无信号肽基因片段,大小为651 bp。该片段经酶切初步鉴定后,被插入pMD18-T载体进行测序,发现与已发表的鸡CD8α链基因序列的同源性达98%。进一步将该片段插入原核表达质粒,构建pGEX-4T-1-CD8α,并转化大肠杆菌BL21。经IPTG诱导培养并提取表达蛋白质。在SDS-PAGE电泳图谱中可见大小约为50 000的蛋白带,表明所克隆的编码鸡CD8α链无信号肽基因片段在原核细胞中得到表达。 展开更多
关键词 CD8Α 免隆 原核表达
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胃癌微环境Treg发挥免疫抑制作用机制的初步研究 被引量:3
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作者 张通通 袁向亮 +4 位作者 李美星 马妍慧 赵燕 沈立松 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期403-407,共5页
初步探讨胃癌中异常增高的调节性T细胞(Treg)发挥免疫抑制的作用机制。利用多参数流式细胞术检测胃癌肿瘤局部CD4+CD25+Foxp3+Treg的Foxp3和环氧合酶2(COX-2)表达强度。CFSE增殖实验检测不同Foxp3表达强度的Treg对效应性T细胞的增殖抑... 初步探讨胃癌中异常增高的调节性T细胞(Treg)发挥免疫抑制的作用机制。利用多参数流式细胞术检测胃癌肿瘤局部CD4+CD25+Foxp3+Treg的Foxp3和环氧合酶2(COX-2)表达强度。CFSE增殖实验检测不同Foxp3表达强度的Treg对效应性T细胞的增殖抑制作用。在Treg与效应性T细胞共培养体系中加入COX-2抑制剂和前列腺素E2(PGE2)拮抗剂,观察PGE2的分泌水平以及Treg其对效应性T细胞的增殖抑制。结果发现,癌旁淋巴结和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中Treg的Foxp3表达强度显著高于外周血(P<0.05);高表达Foxp3的Treg具有更强的抑制活性(P<0.05)。胃癌微环境中TregCOX-2表达强度与Foxp3表达强度显著相关(r=0.675,P<0.05)。应用COX抑制剂处理发现能阻断Treg分泌PGE2,COX抑制剂和PGE2拮抗剂均能降低Treg对效应T细胞增殖的抑制作用(P<0.05)。这表明胃癌局部高表达Foxp3的Treg具有较强的免疫抑制活性,COX-2-PGE2-EP2/EP4通路可能为胃癌微环境中Treg抑制效应T细胞增殖的机制之一。 展开更多
关键词 TREG 胃癌 FOXP3 免疫抑制
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下一代测序技术临床应用现状和发展趋势 被引量:3
5
作者 沈立松 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期483-485,共3页
高通量测序技术逐步发展成熟,临床应用越来越广泛,特别是在无创产前检测、罕见遗传病和肿瘤预防诊断等领域,成为精准医疗不可或缺的技术手段.随着技术进步,长读长单分子测序开始崭露头角,下一代测序朝向单细胞、长读长、低成本和转录组... 高通量测序技术逐步发展成熟,临床应用越来越广泛,特别是在无创产前检测、罕见遗传病和肿瘤预防诊断等领域,成为精准医疗不可或缺的技术手段.随着技术进步,长读长单分子测序开始崭露头角,下一代测序朝向单细胞、长读长、低成本和转录组方向发展.由于临床检测特殊性,当前国内高通量临床应用体系包括遗传咨询、检测标准、质控、监管、数据库建设等还不健全,还需要在实际应用中不断总结完善. 展开更多
关键词 高通量核苷酸序列分析 遗传咨询 数据库 事实型
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焦磷酸测序法检测结直肠癌患者K—ras基因外显子2第12和13密码子点突变 被引量:2
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作者 姚晓虹 +1 位作者 吴萍 沈立松 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期585-592,共8页
目的探讨焦磷酸测序法检测结直肠癌患者肿瘤组织K.ras基因外显子2第12和13密码子点突变方法的临床应用价值。方法以已知K—ras基因突变的结直肠癌细胞株SW480、DLD-1和野生型细胞株HT.29DNA作为测序模板检验焦磷酸测序法的准确性。对... 目的探讨焦磷酸测序法检测结直肠癌患者肿瘤组织K.ras基因外显子2第12和13密码子点突变方法的临床应用价值。方法以已知K—ras基因突变的结直肠癌细胞株SW480、DLD-1和野生型细胞株HT.29DNA作为测序模板检验焦磷酸测序法的准确性。对含不同比例(2%、3%、5%、10%、20%、30%和50%)结直肠癌细胞株K.ras基因的DNA混合样本采用焦磷酸测序法进行基因突变率检测,并与Sanger测序结果平行进行Fisher精确检验比较,评价其灵敏度。同时用焦磷酸测序法检测分析30份临床结直肠癌患者石蜡包埋组织中K—ras基因第12和13密码子突变。结果当混合已知突变类型的结直肠癌细胞株K—ras基因的DNA样本突变DNA比例在5%和10%浓度时,Sanger测序法检出K—ras基因突变率分别为33.3%(4/12)和58.3%(7/12),焦磷酸测序法分别为91.7%(11/12)和100%(12/12),且2种方法检出K—ras基因突变率的差异有统计学意义(P〈0.05)。此外,用焦磷酸测序法从30例结直肠癌患者石蜡包埋组织标本中检出K—ra$基因外显子2第12和13密码子突变10例,均为杂合型突变,突变率为33.3%(10/30)。最常见的突变类型为G〉A转换[50%(5/10)]和G〉T颠换[(30%(3/10)]。结论焦磷酸测序法检测结直肠癌K—ras基因外显子2第12和13密码子突变具有敏感、准确的优点,可用于临床个体化治疗中肿瘤基因突变检测。(中华检验医学杂志.2012,35:585-592、 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 基因 ras 外显子 突变 序列分析 DNA
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Urovysion FISH检测尿液泌尿道肿瘤相关基因的异常及在老年科体检中的应用 被引量:1
7
作者 李莉 徐苓 +2 位作者 王根发 张良 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第11期1470-1471,共2页
目的了解基于Urovysion荧光原位杂交技术(FISH)检测尿液脱落细胞中泌尿系统恶性肿瘤相关性染色体异常在老年科体检中的应用价值。方法收集1 350例老年科患者的晨尿,采用Urovysion FISH检测尿液细胞中第3、7、17号染色体的非整数倍,以及... 目的了解基于Urovysion荧光原位杂交技术(FISH)检测尿液脱落细胞中泌尿系统恶性肿瘤相关性染色体异常在老年科体检中的应用价值。方法收集1 350例老年科患者的晨尿,采用Urovysion FISH检测尿液细胞中第3、7、17号染色体的非整数倍,以及第9号染色体长臂21区域的缺失。结果 1 350例患者中共检测出3号染色体异常55例(4.07%),7号染色体异常68例(5.04%),17号染色体异常41例(3.04%),9号染色体异常36例(2.67%)。经病理证实为膀胱癌22例(1.63%),其他泌尿系统恶性肿瘤16例(1.19%)。结论 Urovysion FISH对于泌尿系统恶性肿瘤的早期诊断有较高的应用价值,可以作为老年科泌尿系肿瘤筛查的一线方法。 展开更多
关键词 泌尿系肿瘤 荧光原位杂交 尿液细胞学
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叉头蛋白3在不同分期胃癌组织中的表达
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作者 赵燕 马妍慧 +3 位作者 袁向亮 李美星 沈立松 《内科理论与实践》 2011年第3期221-224,共4页
目的:探讨叉头蛋白3(FoxP3)在胃癌患者病理组织切片中的表达模式。方法:用免疫组化方法对56例不同TNM分期的胃癌患者病理组织进行染色,同时取其中30例患者的正常胃组织作阴性对照,观察FoxP3在胃癌组织中的表达情况,并探讨其表达与患者... 目的:探讨叉头蛋白3(FoxP3)在胃癌患者病理组织切片中的表达模式。方法:用免疫组化方法对56例不同TNM分期的胃癌患者病理组织进行染色,同时取其中30例患者的正常胃组织作阴性对照,观察FoxP3在胃癌组织中的表达情况,并探讨其表达与患者的性别、年龄、肿瘤TNM分期和转移的关系。结果:胃癌细胞表达FoxP3蛋白,并且主要分布于胃癌细胞的细胞核,少数分布于胞浆区;FoxP3蛋白在胃癌患者中的阳性表达率为68%(38/56),明显高于正常胃组织的23%(7/30),差异具有统计学意义(P<0.05);在有淋巴结转移和无淋巴结转移患者的阳性表达率分别是90%(28/31)和40%(10/25),两者的差异具有统计学意义(P<0.05);FoxP3蛋白表达的阳性率与年龄、性别无关,差异无统计学意义(P>0.05);Ⅲ期、Ⅳ期患者FoxP3表达阳性率明显高于Ⅰ期、Ⅱ期,同时表达量随着TNM分期增高表达逐渐增多,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:高表达的FoxP3可能导致胃癌细胞免疫逃逸参与胃癌的发生、发展过程。 展开更多
关键词 叉头蛋白3 调节性T细胞 免疫逃逸 胃癌
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肿瘤相关线粒体蛋白12对肝癌细胞凋亡的抑制作用
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作者 金姝 王俐 +7 位作者 王颖 陈惠娟 王树军 张惠珍 张勇 葛瑜 葛海良 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期220-225,共6页
目的:探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对肿瘤细胞凋亡的抑制作用。方法:(1)构建重组逆转录病毒表达载体并转染包装细胞PA317,将获得的病毒颗粒感染TAMP12低表达的肝癌细胞株HepG2。应用RT-PCR检测TAMP12 mRNA表达变化;激光扫描共聚焦... 目的:探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对肿瘤细胞凋亡的抑制作用。方法:(1)构建重组逆转录病毒表达载体并转染包装细胞PA317,将获得的病毒颗粒感染TAMP12低表达的肝癌细胞株HepG2。应用RT-PCR检测TAMP12 mRNA表达变化;激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察双色荧光标记蛋白的亚细胞定位和定量表达。(2)应用Hoechst 33258染色和FACS检测5-氟尿嘧啶(5-FU)处理后对诱导HepG2细胞凋亡的影响。结果:(1)CLSM检测显示TAMP12主要表达于HepG2细胞线粒体中。转染细胞中TAMP12基因和蛋白呈稳定高表达。(2)5-FU诱导细胞发生凋亡后,转染细胞的核形态较为完整,但对照细胞的染色质发生凝聚、边缘化、核固缩;且FACS检测显示转染细胞的凋亡率显著低于对照细胞(P<0.05或P<0.01)。结论:TAMP12具有抑制肝癌细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 肿瘤相关线粒体蛋白12 线粒体 逆转录病毒载体 HEPG2细胞 氟尿嘧啶 细胞凋亡
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肿瘤相关线粒体蛋白12对移植瘤细胞增殖的影响
10
作者 陈惠娟 金姝 +5 位作者 王颖 王树军 张惠珍 钱呈睿 葛海良 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期263-269,共7页
目的探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对小鼠移植瘤细胞增殖的影响。方法采用脂质体法将TAMP12基因及空载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选获得稳定高表达TAMP12细胞株(SMMC-7721-TAMP12)及对照细胞(SMMC-7721-pcDNA3.1),实时定量... 目的探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对小鼠移植瘤细胞增殖的影响。方法采用脂质体法将TAMP12基因及空载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选获得稳定高表达TAMP12细胞株(SMMC-7721-TAMP12)及对照细胞(SMMC-7721-pcDNA3.1),实时定量PCR和蛋白印迹检测TAMP12在这两组细胞中的表达。将SMMC-7721-TAMP12和对照SMMC-7721、SMMC-7721-pcDNA3.1三组细胞分别接种于BALB/cnu/nu小鼠的前肢腋下,连续观察荷瘤小鼠中肿瘤的生长状况。接种4周后处死小鼠,取瘤块分别测量瘤体质量和体积,应用实时定量PCR和免疫组化方法检测三组移植瘤中TAMP12的表达;透射电镜观察移植瘤细胞中亚细胞器形态;并应用基因芯片技术检测三组移植瘤肿瘤细胞中的基因差异表达。结果将经实时定量PCR和蛋白印迹检测显示高表达TAMP12的SMMC-7721和对照细胞分别接种裸鼠后,三组荷瘤小鼠中肿瘤的生长曲线呈现明显差异,转染TAMP12的荷瘤小鼠中肿瘤生长速度明显快于对照组荷瘤小鼠。肉眼观察可见实验组肿瘤组织中血管较对照组丰富;电镜观察发现实验组的细胞分裂增殖明显。基因芯片显示,该基因的高表达可促进多个与细胞增殖相关的基因表达上调。结论TAMP12基因具有促进细胞增殖的作用,其机制可能与调节细胞增殖的胰岛素样受体介导的信号转导通路有关。 展开更多
关键词 肿瘤相关线粒体蛋白12 肿瘤相关抗原 细胞增殖 基因芯片
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肿瘤相关线粒体蛋白12对移植瘤细胞增殖的影响
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作者 陈惠娟 金姝 +5 位作者 王颖 王树军 张惠珍 钱呈睿 葛海良 《世界肿瘤杂志》 2008年第2期138-138,共1页
目的探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对小鼠移植瘤细胞增殖的影响。方法采用脂质体法将TAMP12基因及空载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选获得稳定高表达TAMP12细胞株(SMMC-7721-TAMP12)及对照细胞(SMMC-7721-pcDNA3.1)... 目的探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对小鼠移植瘤细胞增殖的影响。方法采用脂质体法将TAMP12基因及空载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选获得稳定高表达TAMP12细胞株(SMMC-7721-TAMP12)及对照细胞(SMMC-7721-pcDNA3.1),实时定量PCR和蛋白印迹检测TAMP12在这两组细胞中的表达。将SMMC-7721-TAMP12和对照SMMC-7721、SMMC-7721-pcDNA3.1三组细胞分别接种于BALB/C^nu/nu小鼠的前肢腋下,连续观察荷瘤小鼠中肿瘤的生长状况。接种4周后处死小鼠,取瘤块分别测量瘤体质量和体积,应用实时定量PCR和免疫组化方法检测三组移植瘤中TAMP12的表达:透射电镜观察移植瘤细胞中亚细胞器形态;并应用基因芯片技术检测三组移植瘤肿瘤细胞中的基因差异表达。结果将经实时定量PCR和蛋白印迹检测显示高表达TAMP12的SMMC-7721和对照细胞分别接种裸鼠后,三组荷瘤小鼠中肿瘤的生长曲线呈现明显差异,转染TAMP12的荷瘤小鼠中肿瘤生长速度明显快于对照组荷瘤小鼠。肉眼以察可见实验组肿瘤组织中血管较对照组丰富;电镜观察发现实验组的细胞分裂增殖明显。基因芯片显示,该基因的高表达可促进多个与细胞增殖相关的基因表达上调。结论TAMP12基因具有促进细胞增殖的作用,其机制可能与调节细胞增殖的胰岛素样受体介导的信号转导通路有关。 展开更多
关键词 小鼠移植瘤 细胞增殖 肿瘤相关 线粒体蛋白 SMMC-7721 实时定量PCR 基因差异表达 PCDNA3.1
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