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钙调素对钙调素结合蛋白-10和玉米非特异性脂转移蛋白与脂质结合活性的影响 被引量:6
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作者 谢万钦 赵立青 +3 位作者 白文艳 李振鹏 赵玉龙 李翠凤 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期679-684,共6页
荧光标记的脂质结合实验表明,钙调素结合蛋白-10(CaMBP-10)具有典型的植物非特异性脂质转移蛋白与脂质结合的特性。进一步实验研究了钙调素(calmodulin,CaM)对CaMBP-10和玉米nsLTP与脂质结合的活性的影响,结果显示无论在有钙和无钙条件... 荧光标记的脂质结合实验表明,钙调素结合蛋白-10(CaMBP-10)具有典型的植物非特异性脂质转移蛋白与脂质结合的特性。进一步实验研究了钙调素(calmodulin,CaM)对CaMBP-10和玉米nsLTP与脂质结合的活性的影响,结果显示无论在有钙和无钙条件下,CaM对两者的影响均有不同之处,W-7和TFP能消除CaM的影响。提示CaM不仅与CaMBP-10和玉米nsLTP特异性相互作用,而且对2种脂转移蛋白可能具有不同的调节机制。 展开更多
关键词 钙调素 脂转移蛋白 钙调素结合蛋白-10 脂质结合活性
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外源茉莉酸和真菌激发子诱导白菜CaMBP10的表达 被引量:7
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作者 胡文全 谢万钦 +2 位作者 张蕊 张映熠 李翠凤 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期328-332,共5页
Recently,CaMBP10 was identified as a plant lipid transfer protein(LTP).In the study,four leaves old cabbages were treated with exogenous jasmonic acid(JA),JA plus LTP,fungal elicitor,200 mmol/L NaCl and 20% PEG respec... Recently,CaMBP10 was identified as a plant lipid transfer protein(LTP).In the study,four leaves old cabbages were treated with exogenous jasmonic acid(JA),JA plus LTP,fungal elicitor,200 mmol/L NaCl and 20% PEG respectively for understanding the functions of CaMBP10 in vivo.The expression of CaMBP10 was determined by using semi-quantitative RT-PCR.The results showed that the expressions of CaMBP10 were dramatically up-regulated in different levels under indicated conditions.It demonstrated that CaMBP10 was involved in biotic and abiotic stress response. 展开更多
关键词 真菌激发子 白菜 诱导 钙调素结合蛋白 茉莉酸 ATPASE活性 CDNA全长 植物生长素
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玉米非特异性脂转移蛋白的cDNA克隆和表达及表达产物的钙调素结合活性分析 被引量:6
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作者 白文艳 赵立青 +3 位作者 李振鹏 谢万钦 赵玉龙 李翠凤 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期570-576,共7页
用RT-PCR法克隆了成熟的玉米非特异性脂转移蛋白的cDNA,将它连接到表达质粒上并转化至大肠杆菌中表达。以钙调素凝胶覆盖法和钙调素亲和层析下拉实验对表达产物进行分析,证明它具有结合钙调素的活性,并且这种结合不依赖于Ca2+,与前期研... 用RT-PCR法克隆了成熟的玉米非特异性脂转移蛋白的cDNA,将它连接到表达质粒上并转化至大肠杆菌中表达。以钙调素凝胶覆盖法和钙调素亲和层析下拉实验对表达产物进行分析,证明它具有结合钙调素的活性,并且这种结合不依赖于Ca2+,与前期研究中钙调素结合蛋白-10和拟南芥非特异性脂转移蛋白1的结合特性相同。采用基因删除和缺失突变的方法研究玉米非特异性脂转移蛋白与钙调素结合的结构域,结果表明钙调素结合于47~60位氨基酸,预测的蛋白质二级结构为碱性双亲α-螺旋结构。 展开更多
关键词 非特异性脂转移蛋白 钙调素 钙调素结合蛋白-10 钙调素结合结构域
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植物转脂蛋白的抗病机制研究进展 被引量:4
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作者 谢万钦 王喆 李翠凤 《自然科学进展》 北大核心 2006年第8期928-932,共5页
植物受病原菌侵染后会诱导病程相关蛋白的表达,抑制病原菌的生长和蔓延,并产生系统性获得抗性.目前已确定的病程相关蛋白有14种,植物转脂蛋白被列入其中.关于转脂蛋白的作用尽管已争论多年,但其准确的生理功能及作用机制至今仍不十分... 植物受病原菌侵染后会诱导病程相关蛋白的表达,抑制病原菌的生长和蔓延,并产生系统性获得抗性.目前已确定的病程相关蛋白有14种,植物转脂蛋白被列入其中.关于转脂蛋白的作用尽管已争论多年,但其准确的生理功能及作用机制至今仍不十分明确.近年来人们将焦点集中在转脂蛋白抗性功能与机制的研究上.文中介绍了目前这一领域的研究进展,并根据该室的研究结果,提出钙调素可能参与植物转脂蛋白抗性功能的调节,为全面阐明转脂蛋白的抗病机制提供了新的研究线索. 展开更多
关键词 植物转脂蛋白 钙调素 抗菌肽 抗病机制 植物病程相关蛋白
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白菜转脂蛋白CaMBP10分子中钙调素结合结构域的鉴定 被引量:2
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作者 金犂天 胖铁良 +2 位作者 李振鹏 谢万钦 李翠凤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期942-949,共8页
植物转脂蛋白(LTPs)是多基因编码的蛋白家族,广泛分布于高等植物,其确切的生理功能至今仍不清楚.本室从白菜中分离的钙调素结合蛋白-10(CaMBP10)经序列分析被鉴定为植物转脂蛋白家族成员,体外实验证明钙调素(CaM)调节其脂质结合活性.为... 植物转脂蛋白(LTPs)是多基因编码的蛋白家族,广泛分布于高等植物,其确切的生理功能至今仍不清楚.本室从白菜中分离的钙调素结合蛋白-10(CaMBP10)经序列分析被鉴定为植物转脂蛋白家族成员,体外实验证明钙调素(CaM)调节其脂质结合活性.为了深入了解转脂蛋白与CaM的相互作用机制,本文通过删除、缺失和定点突变等分子生物学手段确定了白菜转脂蛋白CaMBP10分子中的钙调素结合结构域.该结构域位于分子C末端64~83位氨基酸残基之间,其中疏水氨基酸的分布具有1-5-8-10的CaM结合模序特征. 展开更多
关键词 植物转脂蛋白 钙调素结合蛋白 钙调素结合结构域 脂质结合活性
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豌豆质膜内源CDPK对植物转脂蛋白CaMBP-10的磷酸化及CaMBP-10对激酶自磷酸化的影响 被引量:2
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作者 赵玉龙 谢万钦 +3 位作者 胡文全 张映熠 张蕊 李翠凤 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2009年第9期862-872,共11页
植物转脂蛋白(LTPs)是多基因编码的蛋白家族,广泛分布于高等植物.虽然LTPs的确切功能至今仍不完全清楚,但它参与植物生物、非生物胁迫反应以及它的抗性功能已成为近年来的研究热点.关于LTPs功能的调节机制目前几乎一无所知.最近,从白菜... 植物转脂蛋白(LTPs)是多基因编码的蛋白家族,广泛分布于高等植物.虽然LTPs的确切功能至今仍不完全清楚,但它参与植物生物、非生物胁迫反应以及它的抗性功能已成为近年来的研究热点.关于LTPs功能的调节机制目前几乎一无所知.最近,从白菜中分离的钙调素结合蛋白-10(CaMBP-10)被鉴定为植物转脂蛋白家族成员,并且,体外实验证明钙调素(CaM)调节其脂质结合活性.为了深入了解转脂蛋白功能的调节机制,本文研究了CaMBP-10的磷酸化作用,发现CaMBP-10可被豌豆质膜内源性蛋白激酶磷酸化,钙离子(Ca2+)能刺激磷酸化,钙螯合剂EGTA以及CaM拮抗剂W-7和TFP均能显著抑制磷酸化.免疫印迹分析最终确定该激酶为CDPK家族成员.构建突变体进一步研究了CaMBP-10的磷酸化位点,发现其位于蛋白的C-末端区域,并与已确定的CaM结合位点重合.同时,分析结果表明CaM能抑制CaMBP-10的磷酸化.反之,CaMBP-10的磷酸化又能阻断其与CaM的结合,显示出两种调节方式相互竞争的特点.为深入研究磷酸化作用对CaMBP-10脂质结合活性的影响,构建突变体(Ser83Asp,Ser85Asp)以模拟磷酸化状态.实验结果显示,磷酸化作用能显著增强CaMBP-10的脂质结合活性,而且突变体的脂质结合活性不受CaM的影响.采用胶内磷酸化测定法(in-gelkinaseassay)研究了激酶的自磷酸化特点以及CaMBP-10对激酶自磷酸化的影响,发现CaMBP-10能激活激酶的自磷酸化,激酶的自磷酸化又能促进其对底物的磷酸化作用.这样,激酶的自磷酸化与底物的磷酸化形成一种"正反馈环"的调节模式.综合研究结果,本文首次证明了LTP受CaM结合和CDPK磷酸化的双重调节.而且,CaM结合位点与磷酸化位点的重合预示可能存在特殊的调节机制,以协同应答胞内的Ca2+信号. 展开更多
关键词 植物转脂蛋白(LTP) 钙调素(CaM) 钙调素结合蛋白-10 (CaMBP-10) 磷酸化 自磷酸化 钙依赖性蛋白激酶 (CDPK)
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白菜转脂蛋白基因CaMBP10的RNAi沉默体系的初步建立
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作者 张蕊 胡文全 +1 位作者 谢万钦 李翠凤 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第10期168-172,共5页
为研究白菜转脂蛋白——CaMBP10的体内功能,构建含有该基因片段的RNAi质粒,以农杆菌介导法对大白菜‘津育60’进行遗传转化,通过对转基因植物在生物与非生物胁迫中表型变化的研究,确定其体内功能。文章报告RNAi质粒的构建、鉴定及其转... 为研究白菜转脂蛋白——CaMBP10的体内功能,构建含有该基因片段的RNAi质粒,以农杆菌介导法对大白菜‘津育60’进行遗传转化,通过对转基因植物在生物与非生物胁迫中表型变化的研究,确定其体内功能。文章报告RNAi质粒的构建、鉴定及其转化植株基因组DNA中外源片段的鉴定。DNA分析结果显示,外源基因已成功插入了白菜基因组,RT-PCR检测结果显示转化植株内源CaMBP10基因的表达明显降低,为后续的转脂蛋白体内功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 转脂蛋白 CaMBP10 RNA干扰 遗传转化
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