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1株产甘露聚糖酶嗜热真菌的鉴定、酶学性质表征及转录组学分析 被引量：4
1
作者 谈苏慧 卢海强 +3 位作者 陈伟 张莉娟 田洪涛 谷新晰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第18期65-72,共8页
从大曲中筛选出一株产嗜热甘露聚糖酶的嗜热真菌GZFH7,经鉴定该菌为微小根毛霉(Rhizomucor pusillus),接菌至魔芋发酵培养基诱导产生的甘露聚糖酶的最适反应温度为70℃。在50~80℃范围内可保留50%以上的酶活力。在最适反应温度处理1 h,... 从大曲中筛选出一株产嗜热甘露聚糖酶的嗜热真菌GZFH7,经鉴定该菌为微小根毛霉(Rhizomucor pusillus),接菌至魔芋发酵培养基诱导产生的甘露聚糖酶的最适反应温度为70℃。在50~80℃范围内可保留50%以上的酶活力。在最适反应温度处理1 h,酶活力基本保持不变。该酶pH 2.0~12.0范围内均具有一定耐受性,其最适反应pH值为5.0。经转录组学测定分析,共有几丁质酶、半乳糖苷酶、甘露糖基转移酶等253个碳水化合物活性酶基因表达,其中糖基转移酶表达最为丰富,约占41.1%;其次为糖苷水解酶,约占37.5%。微小根毛霉R.pusillus GZFH7是嗜热真菌,其诱导的嗜热甘露聚糖酶热稳定性良好。同菌株GZFH7高效的产碳水化合物活性酶能力使其在酶制剂的开发与应用方面有较大的研究价值。 展开更多
关键词 Β-甘露聚糖酶 嗜热酶 转录组 碳水化合物活性酶 微小根毛霉
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嗜热甘露聚糖酶manBK基因密码子优化表达及在魔芋聚糖降解中的应用 被引量：3
2
作者 卢海强 谷新晰 +2 位作者 袁巧敏 谈苏慧 田洪涛 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第18期113-119,共7页
依据密码子偏好性原则,对嗜热甘露聚糖酶manBK基因密码子进行优化,以提高嗜热甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达量;并通过对该酶酶学性质的探究,探讨金属离子对酶稳定性影响及其在酶解魔芋甘露聚糖中的应用潜力。结果表明:嗜热甘露聚糖酶manB... 依据密码子偏好性原则,对嗜热甘露聚糖酶manBK基因密码子进行优化,以提高嗜热甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达量;并通过对该酶酶学性质的探究,探讨金属离子对酶稳定性影响及其在酶解魔芋甘露聚糖中的应用潜力。结果表明:嗜热甘露聚糖酶manBK基因优化后GC含量为40%~53%,平均值为47%,密码子适应指数(codon adaptationindex,CAI)为0.87,共有242个碱基进行优化,优化前后基因序列的一致性为76%。重组菌株在25℃条件下,诱导72 h发酵液中酶活力可达22 U/mL。甘露聚糖酶ManBK的最适反应温度为80℃,最适pH值为5.0,表观分子质量为45 kDa,动力学参数Km值为1.40 mg/mL,V(max)值为149.25μmol/(min·mg)。金属离子Fe^3+、Ca^2+、Mg^2+和Zn^2+对该酶活性有促进作用,分别使酶活力提高了32%、52%、23%和459%,而金属离子K^+、Li^+、Mn^2+和Cu^2+对ManBK酶有不同程度的抑制作用。进一步分析发现,Zn^2+能提高该酶的热稳定性,使70℃条件下的半衰期延长了116 min。当酶底比为1∶1时,反应温度70℃,pH 5.0反应进行1.5 h,魔芋聚糖即可达到较合适的酶解,魔芋聚糖降解物的抗氧化性能增强了5.6倍左右,ManBK酶在魔芋聚糖降解中具有极强的应用潜力。本研究为ManBK酶的制备及在魔芋深加工行业中的应用提供了一定的理论支撑。 展开更多
关键词 甘露聚糖酶 魔芋聚糖降解物 密码子优化 热稳定性 抗氧化性
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腌制臭鸡蛋中微生物多样性分析及关键物质含量测定 被引量：2
3
作者 陈伟 李杨 +2 位作者 谷新晰 谈苏慧 卢海强 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第22期158-165,共8页
采用高通量测序技术对臭鸡蛋卤汁中的细菌16S rDNA V3-V4区和真菌ITS1区域进行测序,探究腌制臭鸡蛋卤汁中微生物群落组成和多样性;测定臭鸡蛋样品中的关键物质含量(游离氨基酸、水解氨基酸、生物胺和胆固醇)。结果表明,臭鸡蛋卤汁中共鉴... 采用高通量测序技术对臭鸡蛋卤汁中的细菌16S rDNA V3-V4区和真菌ITS1区域进行测序,探究腌制臭鸡蛋卤汁中微生物群落组成和多样性;测定臭鸡蛋样品中的关键物质含量(游离氨基酸、水解氨基酸、生物胺和胆固醇)。结果表明,臭鸡蛋卤汁中共鉴定3460个可操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU),真菌和细菌分别有712个和2748个OTU,其中7个细菌门和6个真菌门,68个细菌属和41个真菌属。细菌的优势菌门为盐厌氧菌门(Halanaerobiaeota,53.96%),优势菌属为盐厌氧菌属(Halanaerobium,53.89%);真菌的优势菌门为子囊菌门(Ascomycota,35.04%),优势菌属为蜡蚧菌属(Lecanicillium,11.64%)。经测定,臭鸡蛋中含有6种常见生物胺中的3种,分别是色胺((69.02±0.74)mg/kg)、组胺((8.33±0.53)mg/kg)和酪胺((129.45±1.12)mg/kg);臭鸡蛋样品中游离氨基酸和水解氨基酸质量分数为(3.42±0.111)%和(6.89±0.440)%,其中游离氨基酸含量为鲜鸡蛋的11.4倍,臭鸡蛋样品中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇含量相比于鲜鸡蛋分别减少44%、47%和30%,高密度脂蛋白胆固醇含量相比于鲜鸡蛋增加了59%。本研究明确了臭鸡蛋中的菌群结构和优势菌属,为探究臭鸡蛋发酵机制,规范其生产和质量安全提供了理论依据。 展开更多
关键词 臭鸡蛋 微生物菌群 生物胺 食品安全 发酵食品
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茶树单宁酶的原核表达及酶学性质表征 被引量：1
4
作者 陈伟 谷新晰 +3 位作者 张莉娟 谈苏慧 田洪涛 卢海强 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第8期74-80,共7页
基于大肠杆菌的密码子偏好性,对茶树单宁酶基因CsTanA碱基进行优化,基因优化后GC含量为51.9%,密码子适应指数为0.8,优化前后基因序列的一致性为77.8%,以pET-30a为表达载体对优化基因进行重组表达及酶学性质分析。A_(600nm)约0.6的重组... 基于大肠杆菌的密码子偏好性,对茶树单宁酶基因CsTanA碱基进行优化,基因优化后GC含量为51.9%,密码子适应指数为0.8,优化前后基因序列的一致性为77.8%,以pET-30a为表达载体对优化基因进行重组表达及酶学性质分析。A_(600nm)约0.6的重组菌株以1 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷在30℃诱导12 h,破碎上清液重组单宁酶rCsTanA比活力为0.35 U/mg,镍柱纯化后的rCsTanA比活力为1.53 U/mg,纯化倍数约为4.4。纯化重组单宁酶rCsTanA分子质量为39 kDa,其最适温度和最适pH值分别为40℃和7.0。不同金属离子浓度对酶活力的影响存在差异,在低浓度(1 mmol/L)条件下,K^(+)增强了rCsTanA 37.28%的酶活力,而Ag^(+)、Cu^(2+)和Fe^(3+)使该酶活力均丧失80%以上;而在高浓度(5 mmol/L)条件下,Cu^(2+)表现出完全抑制rCsTanA活性的特性。表面活性剂(十二烷基硫酸钠、吐温80和十六烷基三甲基溴化铵)和极性溶剂(甲醇、乙醇、丙三醇、异丙醇及丙酮)对rCsTanA活性具有较强抑制作用。本研究不仅实现了茶树单宁酶的表达和酶学性表征,同时也丰富了单宁酶资源,为植物单宁酶的进一步应用研究提供了必要的理论支撑。 展开更多
关键词 茶树 单宁酶 异源表达 密码子优化 酶学性质
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