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3种新型冠状病毒株灭活疫苗间S蛋白检测结果干扰情况分析 被引量：2
1
作者 董圆 赵玉秀 +3 位作者 诸葛祥林 杨兆娜 李洁 李爱灵 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第21期2136-2143,共8页
目的:考察建立的HB02株、Delta株和Omicron株新型冠状病毒(以下简称新冠)S蛋白多克隆酶联免疫检测方法(ELISA法)检测3种毒株疫苗间的交叉干扰情况。方法:将新冠HB02株、Delta株、Omicron株单价疫苗配制成不同配比和不同组合的样品,分别... 目的:考察建立的HB02株、Delta株和Omicron株新型冠状病毒(以下简称新冠)S蛋白多克隆酶联免疫检测方法(ELISA法)检测3种毒株疫苗间的交叉干扰情况。方法:将新冠HB02株、Delta株、Omicron株单价疫苗配制成不同配比和不同组合的样品,分别采用HB02株、Delta株和Omicon株新冠灭活疫苗(Vero细胞)S蛋白抗原ELISA法进行检测,比较检测结果并计算干扰率,同时分析了不同毒株抗原检测试剂盒分别检测3种新冠毒株单价抗原检测结果间的干扰率。结果:由2种毒株组分按不同剂量配比的检测结果显示,当在HB02株中加入由低到高剂量比例的Delta株时,干扰率范围为4.21%~29.53%;当在HB02株中加入由低到高剂量比例的Omicron株时,干扰率范围为4.40%~12.75%;当在Delta株中加入由低到高剂量比例的HB02株时,干扰率范围为56.17%~464.21%;当在Delta株中加入由低到高剂量比例的Omicron株时,干扰率范围为6.29%~25.91%;当在Omicron株中加入由低到高剂量比例的HB02株时,干扰率范围为32.05%~337.22%;而当在Omicron株中加入由低到高剂量比例的Delta株时,干扰率范围为44.91%~252.14%。由3种毒株组分按不同剂量配比的检测结果显示,当在HB02株中加入不同剂量比例的Delta株+Omicron株时,干扰率范围为2.79%~22.86%;当在Delta株中加入不同剂量比例的HB02株+Omicron株时,干扰率范围为67.16%~267.95%;当在Omicron株中加入不同剂量比例的HB02株+Delta株时,干扰率范围为100.66%~412.54%。此外,采用HB02株抗原检测试剂盒检测单价Delta株与单价Omicron株新冠抗原的干扰率分别为70%和90%;Delta株抗原检测试剂盒检测单价HB02株与单价Omicron株新冠抗原的干扰率分别为30%和35%;Omicron株抗原检测试剂盒检测单价HB02株与Delta株新冠抗原的干扰率分别为5%和10%。结论:由于HB02株、Delta株和Omicron株新冠疫苗中的S蛋白存在很高的相似性,因此,不同毒株按不同配比混合后,使用多克� 展开更多
关键词 新型冠状病毒 S蛋白 多抗酶联免疫法 交叉干扰
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‘741杨’D2类细胞周期蛋白基因的克隆及功能鉴定 被引量：1
2
作者 刘孝晨 关超男 +2 位作者 许楠 诸葛祥林 杨海灵 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期547-556,共10页
D类细胞周期蛋白(D-type cyclin,CYCD)调控细胞周期G1/S期转变。CYCD与细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)结合形成CYCD/CDK复合物,被激活的CYCD/CDK复合物通过磷酸化下游细胞周期响应因子调控细胞周期有序进行,进而... D类细胞周期蛋白(D-type cyclin,CYCD)调控细胞周期G1/S期转变。CYCD与细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)结合形成CYCD/CDK复合物,被激活的CYCD/CDK复合物通过磷酸化下游细胞周期响应因子调控细胞周期有序进行,进而影响植物的生长发育。该研究以‘741杨’为实验材料,成功鉴定得到1个D2类细胞周期蛋白基因(PtoCYCD2;1)。研究表明:(1)实时定量PCR(qRT-PCR)显示,PtoCYCD2;1基因在根、茎、叶、叶柄、树皮和木质部中均有表达,在叶中的相对表达水平最高。(2)亚细胞定位表明PtoCYCD2;1蛋白定位于细胞核。(3)与野生型(Wild-Type poplar,WT)相比,过表达PtoCYCD2;1基因的‘741杨’出现株高降低,茎直径减小,叶片明显下卷的表型。(4)扫描电镜分析(SEM)显示,转基因杨树叶片的上表皮细胞平均面积变小,细胞数量增多;树脂切片结果显示与WT相比,转基因杨树叶片的栅栏组织和海绵组织的细胞间隙疏松。(5)qRT-PCR结果显示,转基因杨树中细胞周期调控基因CDKA;1、CDKB1;1和CDKB2;1的表达水平显著上调,植物成视网膜细胞瘤相关蛋白1(retinoblastoma-related protein1,RBR1)基因、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(kip-related protein,KRP)基因的表达水平显著下调。该研究结果为进一步研究木本植物CYCD2基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 ‘741杨’ 细胞周期蛋白 PtoCYCD2 1基因 基因表达 亚细胞定位 功能分析
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毛果杨赤霉素氧化酶基因家族鉴定与功能分析
3
作者 修志静 管非凡 +2 位作者 诸葛祥林 王一鸣 杨海灵 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期137-146,172,共11页
【目的】赤霉素氧化酶(GAox)是不同赤霉素之间相互转化的关键酶,属于2-酮戊二酸依赖性双加氧酶基因家族(2ODD),选择毛果杨GAox基因家族为研究对象,探究木本植物GAox基因家族成员的进化关系和功能分化机制。【方法】在Phytozome和PLAZA... 【目的】赤霉素氧化酶(GAox)是不同赤霉素之间相互转化的关键酶,属于2-酮戊二酸依赖性双加氧酶基因家族(2ODD),选择毛果杨GAox基因家族为研究对象,探究木本植物GAox基因家族成员的进化关系和功能分化机制。【方法】在Phytozome和PLAZA数据库中搜索到水稻、拟南芥和毛果杨2ODD基因,通过系统进化分析确认毛果杨2ODD基因中参与赤霉素代谢的GAox基因,然后整合基因组定位、基因结构、基因表达模式和酶生化活性等数据对GAox基因家族进行研究。【结果】从毛果杨基因组中鉴定得到124个2ODD成员,通过系统进化分析确认其中包含27个GAox基因,它们可能参与到赤霉素合成。毛果杨27个GAox基因分成4个亚家族,分别是C20-GA2ox、GA20ox、C19-GA2ox和GA3ox。基因组定位的结果发现27个毛果杨GAox基因分散定位在19条染色体中的14条染色体上,其中有11对GAoxs基因是由基因组的大片段重复产生的。酶学活性测定的结果表明,PtGA2ox3和PtGA2ox5催化GA1生成GA8,GA9生成GA51,而PtGA20ox6、PtGA20ox7和PtGA20ox8催化GA15生成GA24,GA24生成GA9,GA53生成GA20,显示该基因家族成员在底物特异性方面发生了变化。其中PtGA2ox3对GA9的活性是PtGA2ox5的104倍,但是PtGA2ox3和PtGA2ox5具有相似的三维结构。通过活性中心的序列比对发现,PtGA2ox3存在多个非极性氨基酸,PtGA2ox5存在多个带羟基的氨基酸,推测PtGA2ox3活性中心位置附近的非极性基团是引起其催化活性高的原因。【结论】毛果杨GAox基因家族的基本特征、进化关系和部分基因的功能得到了初步解析,为加深对毛果杨赤霉素代谢途径的了解提供新的视角。 展开更多
关键词 毛果杨 赤霉素 基因家族 2ODD GA氧化酶 生化活性
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小麦PAL蛋白的提取、纯化及活性测定
4
作者 管非凡 刘孝晨 +2 位作者 修志静 诸葛祥林 杨海灵 《农业科学》 2018年第3期156-163,共8页
在本研究中,我们构建了PAL基因家族在9种陆地植物中的系统发育树,发现小麦PAL基因家族发生了明显的基因扩张:在这9种陆地植物中,小麦PAL基因家族成员数量最多,达到26个。基因表达模式热图显示,相对于成熟组织,小麦PAL基因在幼嫩组织中... 在本研究中,我们构建了PAL基因家族在9种陆地植物中的系统发育树,发现小麦PAL基因家族发生了明显的基因扩张:在这9种陆地植物中,小麦PAL基因家族成员数量最多,达到26个。基因表达模式热图显示,相对于成熟组织,小麦PAL基因在幼嫩组织中的表达量较高。高纯度的小麦PAL蛋白从小麦嫩叶中提取和纯化,并对其进行了活性测定。本研究为小麦PAL基因家族的进一步研究提供了技术支持。 展开更多
关键词 苯丙氨酸解氨酶 系统进化树 表达模式 蛋白提取 SDS-PAGE电泳 活性测定
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