A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：19

1

作者 张永宁 张舟 +4 位作者 诸明欣 梅琳 王彩霞 吴绍强 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期256-263,共8页

本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质... 本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。 展开更多

关键词 A型塞内卡病毒 衣壳蛋白 原核表达 多克隆抗体

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微量元素硒在动物生产中的影响 被引量：9

2

作者 张玲 陈张华 +1 位作者 诸明欣 杨薇 《畜禽业》 2022年第7期21-23,共3页

硒是动物机体不可缺少的微量矿物元素,能够抗氧化、提升免疫力、增强繁殖性能、改善肉品质等,对维持机体正常的生理机能、促进畜禽健康生长具有十分重要的作用。围绕硒在动物机体中的存在形式、吸收代谢、生理功能及在动物生产中的应用... 硒是动物机体不可缺少的微量矿物元素,能够抗氧化、提升免疫力、增强繁殖性能、改善肉品质等,对维持机体正常的生理机能、促进畜禽健康生长具有十分重要的作用。围绕硒在动物机体中的存在形式、吸收代谢、生理功能及在动物生产中的应用效果等进行阐述,为生产中合理地应用硒制剂提供参考。 展开更多

关键词 微量元素 硒 应用效果 动物生产

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四川阿坝州牦牛源溶血性大肠杆菌血清型鉴定及毒力相关基因检测 被引量：10

3

作者 诸明欣 张焕容 +1 位作者 汤承 李嘉英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期9-13,共5页

为了解牦牛源溶血性大肠杆菌血清型及毒力相关基因,本研究从四川阿坝州采集的牦牛鼻腔棉拭子中分离鉴定溶血性大肠杆菌,并通过玻板凝集结合试管凝集试验鉴定其血清型,采用PCR方法检测大肠杆菌的4个溶血素基因及其它7个毒力相关基因。结... 为了解牦牛源溶血性大肠杆菌血清型及毒力相关基因,本研究从四川阿坝州采集的牦牛鼻腔棉拭子中分离鉴定溶血性大肠杆菌,并通过玻板凝集结合试管凝集试验鉴定其血清型,采用PCR方法检测大肠杆菌的4个溶血素基因及其它7个毒力相关基因。结果显示,从临床健康的牦牛鼻腔中分离鉴定出74株溶血性大肠杆菌,分离率为19.2%(74/386)。O血清型鉴定结果显示,74株牦牛源溶血性大肠杆菌中已确定O血清型的菌株有60株,共24种O血清型,其余14株未能定型。PCR检测与溶血素相关的4个基因携带率分别为96.0%(hly A)、86.5%(hly E)、14.9%(ehly)和2.7%(ehx);有4种溶血素基因组合,分别为hly A^+(96.0%),hly E^+(86.5%),hly A/hly E双阳性(80.9%),ehx/hly E双阳性(2.7%);其它毒力相关基因的检出率分别为93.2%(irp2)、93.2%(fyu A)和2.7%(stx2);LT、STa、STb和K99基因未检出。研究结果表明,溶血性大肠杆菌存在于临床健康牦牛鼻腔内,血清型复杂且无优势血清型,大肠杆菌溶血素相关基因和高致病性毒力岛相关基因携带率高。本研究首次对四川阿坝州牦牛源溶血性大肠杆菌的血清型和毒力相关基因进行了研究,提示在牦牛中存在溶血性大肠杆菌的潜在威胁。 展开更多

关键词 牦牛 溶血性大肠杆菌 血清型 毒力相关基因

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非洲猪瘟疫情常态下做好猪场生物安全防控的措施 被引量：5

4

作者 陈张华 诸明欣 +1 位作者 段茜 杨薇 《湖北畜牧兽医》 2021年第8期27-28,共2页

自非洲猪瘟进入我国以来,对养猪业及人民的生产生活都造成了极为严重的影响,但实践证明,通过采用科学完善的生物安全防控措施能有效减少该病的发生。就非洲猪瘟的特点、猪场现状及生物安全防控措施等方面进行了介绍,供参考。

关键词 非洲猪瘟 猪场 生物安全防控 措施

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牦牛源肠球菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量：5

5

作者 徐凤 张焕容 +2 位作者 梁华 诸明欣 汤承 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期1203-1210,共8页

试验结合革兰氏染色及16S rRNA分子鉴定,对分离自红原县的17份牦牛粪便样中的肠球菌进行鉴定。结果显示,通过细菌分离纯化及PCR扩增,从牦牛粪便样品中分离出8株疑似肠球菌,分离菌的扩增产物经凝胶电泳后均产生1 500bp特异性条带。16SrRN... 试验结合革兰氏染色及16S rRNA分子鉴定,对分离自红原县的17份牦牛粪便样中的肠球菌进行鉴定。结果显示,通过细菌分离纯化及PCR扩增,从牦牛粪便样品中分离出8株疑似肠球菌,分离菌的扩增产物经凝胶电泳后均产生1 500bp特异性条带。16SrRNA测序结果显示,8株疑似肠球菌中,6株为粪肠球菌,2株为屎肠球菌。同源性比对分析显示,粪肠球菌与参考序列同源性为99.7%~100.0%,屎肠球菌与参考序列同源性为98.2%~99.2%,说明牦牛源肠球菌在遗传进化过程中高度保守。运用K-B纸片法进行药敏试验,结果显示,分离株对氨基糖苷类抗生素耐受性较高,2株屎肠球菌中,11-1-2菌株表现为5重耐药,且该菌株耐万古霉素,粪肠球菌主要表现为3重耐药,药敏结果提示牦牛源肠球菌耐药较严重,应引起高度重视。 展开更多

关键词 牦牛 肠球菌 分离鉴定 药敏试验

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猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及部分生物学特性的研究 被引量：4

6

作者 诸明欣 张焕容 +1 位作者 张斌 徐凤 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期341-345,共5页

为了解猪支气管败血波氏杆菌(Bb)在四川规模化猪场的感染情况,为猪支气管败血波氏杆菌的诊断及临床治疗提供参考,本研究从四川省5个猪场采取具有呼吸道症状的猪鼻腔棉拭子16份,采用改良Sm ith培养基分离该菌,通过对该菌的生长特性、菌... 为了解猪支气管败血波氏杆菌(Bb)在四川规模化猪场的感染情况,为猪支气管败血波氏杆菌的诊断及临床治疗提供参考,本研究从四川省5个猪场采取具有呼吸道症状的猪鼻腔棉拭子16份,采用改良Sm ith培养基分离该菌,通过对该菌的生长特性、菌落形态和革兰染色菌体形态和排列方式进行观察以及对特异性基因fla和D nt进行PCR检测,共分离鉴定出4株Bb,该菌从猪场中的分离率为80%(4/5),猪个体阳性率为25%(4/16)。小鼠皮肤坏死试验结果表明,小鼠颈部皮下注射分离菌粗提的Dnt毒素后,注射局部皮肤坏死,剖检见脾萎缩、肺充血和肝边缘坏死。药敏试验结果表明,分离菌株对头孢唑啉、四环素、环丙沙星等14种抗生素高度敏感,对氨苄西林、杆菌肽、复方新诺明等7种抗生素耐药率较高,试验结果说明,四川省猪群中存在致病性较强的猪支气管败血波氏杆菌,为选用敏感抗菌药物预防和治疗Bb病提供了依据。 展开更多

关键词 支气管败血波氏杆菌 分离 鉴定 PCR 皮肤坏死试验 药敏试验

原文传递

四川部分猪场猪3种呼吸道病原菌分离鉴定及敏感药物筛选 被引量：4

7

作者 孙正楠 诸明欣 张焕容 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期84-86,90,共4页

为了在对四川部分猪场3种呼吸道病原菌即支气管败血波氏杆菌(Brodetella bronchiseptica,B.bronchiseptica)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,H.parasuis)及胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,A.pleuropneumoniae)... 为了在对四川部分猪场3种呼吸道病原菌即支气管败血波氏杆菌(Brodetella bronchiseptica,B.bronchiseptica)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,H.parasuis)及胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,A.pleuropneumoniae)分离鉴定的基础上,分析这3种病原菌单一和混合感染的情况,并通过药敏试验筛选敏感药物,为临床药物治疗提供参考。从16头病死猪肺脏样品中分离鉴定出B.bronchieseptica、H.parasuis各6株,分离率为37.5%(6/16),A.Pleuropneumoniae 5株,分离率为31.25%(5/16);B.bronchiseptica与H.parasuis、B.bronchiseptica与A.pleuropneumoniae、H.parasuis与A.pleuropneumoniae二重感染率分别为6.25%(1/16),B.bronchieseptica、H.parasuis与A.pleuropneumoniae三重感染率为6.25%(1/16)。药敏试验结果显示,分离的3种菌共17株菌皆对头孢噻肟敏感;对阿莫西林、青霉素、红霉素、罗红霉素、环丙沙星、氟哌酸、头孢拉定、链霉素、卡那霉素、氟苯尼考、庆大霉素、氨苄西林、四环素等13种抗生素均存在一定的耐药性。本试验丰富了四川地区猪呼吸道多种病原菌感染的数据,并为部分猪场合理用药提供了依据。 展开更多

关键词 支气管败血波氏杆菌 副猪嗜血杆菌 胸膜肺炎放线杆菌 分离鉴定 感染 混合感染 药敏试验

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猪四种呼吸道病原菌四重PCR检测方法的建立与应用 被引量：4

8

作者 诸明欣 张焕容 杨晓农 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期288-294,共7页

为建立可同时快速检测猪支气管败血波氏杆菌（Bb）、副猪嗜血杆菌（Hps）、胸膜肺炎放线杆菌（App）和多杀性巴氏杆菌（Pm）的四重PCR方法,根据Bb的fla基因、Hps的16S rRNA基因、App的apxⅣ基因和Pm的特异性基因KMT1设计4对特异性引物,... 为建立可同时快速检测猪支气管败血波氏杆菌（Bb）、副猪嗜血杆菌（Hps）、胸膜肺炎放线杆菌（App）和多杀性巴氏杆菌（Pm）的四重PCR方法,根据Bb的fla基因、Hps的16S rRNA基因、App的apxⅣ基因和Pm的特异性基因KMT1设计4对特异性引物,基于TaKaRa公司的Premix Taq PCR预混酶,对四重PCR的引物浓度和退火温度进行优化,确定该四重PCR的反应体系和反应条件,通过对特异性及同一种病原菌不同血清型检测的通用性、敏感性和重复性评价,建立快速检测猪这4种呼吸道病原菌的四重PCR方法,同时应用该方法对81份临床样本进行检测,检测结果与这4种病原菌单项PCR检测以及4种病原菌的分离鉴定结果进行比较。结果表明,该方法能同时对这4种病原菌进行检测,特异性和通用性好、重复性好,对这4种病原菌DNA的最低检测质量浓度为20 pg/L,对这4种细菌的最低检出量分别为1×10^3CFU/mL的Pm,1×10^2CFU/mL的Hps、Bb和App,敏感性高。81份临床样本的四重PCR检测结果和单项PCR检测结果一致,PCR检出率明显高于细菌分离鉴定结果。本研究成功建立了可同时检出猪支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌的四重PCR方法,该方法可用于临床样本的快速检测以及这4种病原菌的鉴别检测。 展开更多

关键词 猪支气管败血波氏杆菌 副猪嗜血杆菌 胸膜肺炎放线杆菌 多杀性巴氏杆菌 四重PCR 特异性 敏感性 稳定性

原文传递

牦牛源牛链球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究 被引量：4

9

作者 张兴民 张焕容 +1 位作者 汤承 诸明欣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3314-3321,共8页

本研究旨在从腹泻牦牛粪便中分离鉴定牛链球菌,并分析其溶血性、对小鼠的致病性及对抗菌药物的敏感性。将川西北阿坝州45份腹泻牦牛粪便于血平板上划线,37℃、5%CO2培养24h分离细菌,经16SrRNA序列扩增测序和系统发育分析鉴定出14株牛链... 本研究旨在从腹泻牦牛粪便中分离鉴定牛链球菌,并分析其溶血性、对小鼠的致病性及对抗菌药物的敏感性。将川西北阿坝州45份腹泻牦牛粪便于血平板上划线,37℃、5%CO2培养24h分离细菌,经16SrRNA序列扩增测序和系统发育分析鉴定出14株牛链球菌,其中8株巴黎链球菌,6株解没食子酸链球菌巴氏亚种;9株呈α溶血,5株呈β溶血。分离鉴定的牦牛源巴黎链球菌和解没食子酸链球菌巴氏亚种能引起试验小鼠的轻度腹泻;药敏试验结果显示分离菌株对青霉素、头孢噻肟、万古霉素、乙酰螺旋霉素、环丙沙星、利福平、替考拉宁、氨苄西林和庆大霉素共9种抗生素高度敏感,对链霉素、卡那霉素、林可霉素、红霉素、四环素和克林霉素耐药率较高。本研究阐明了牦牛源链球菌的部分生物学特性,为该病的防控奠定了基础。 展开更多

关键词 牦牛 牛链球菌 分离鉴定 耐药性

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一株山羊源戊糖片球菌的益生作用研究 被引量：3

10

作者 徐凤 张焕容 +4 位作者 汤承 诸明欣 梁华 张兴民 毛从剑 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期586-591,共6页

为评价一株戊糖片球菌BL-1对小鼠生长性能及免疫功能的影响,本研究选用体质量20 g左右的断奶雌性昆明小鼠灌服戊糖片球菌BL-1菌液,通过测定实验小鼠日均增重、料重比、淋巴细胞转化、脾脏及胸腺指数、十二指肠及空肠形态发育、肠道内SI... 为评价一株戊糖片球菌BL-1对小鼠生长性能及免疫功能的影响,本研究选用体质量20 g左右的断奶雌性昆明小鼠灌服戊糖片球菌BL-1菌液,通过测定实验小鼠日均增重、料重比、淋巴细胞转化、脾脏及胸腺指数、十二指肠及空肠形态发育、肠道内SIg A和腹腔巨噬细胞吞噬功能等指标,评价该乳酸菌对小鼠生长性能及免疫功能的影响。结果显示:戊糖片球菌BL-1能显著提高小鼠的生长性能、脾脏指数及胸腺指数(p<0.05)、增强外周血T淋巴细胞的增殖反应、促进十二指肠形态发育和肠道内SIg A的分泌;对空肠形态发育和腹腔巨噬细胞吞噬无显著影响(p>0.05)。本研究结果表明山羊源戊糖片球菌BL-1能有效提高实验小鼠的生长性能和免疫功能,是一株优良的益生菌候选菌株。 展开更多

关键词 山羊 戊糖片球菌 生长性能 免疫功能

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日粮添加大米对断奶仔猪生长性能、组织器官发育及肠道酶活性的影响 被引量：1

11

作者 陈张华 段茜 +3 位作者 张玲 温倩 诸明欣 林建和 《中国饲料》 北大核心 2022年第8期117-120,共4页

文章旨在评估日粮用大米替代玉米对断奶仔猪生长性能、组织器官发育及肠道酶活性的影响。试验将21 d断奶平均体重一致的800头商品仔猪随机分为2组,每组8个重复,每个重复50头。在为期4 w的试验中,玉米组断奶仔猪饲喂玉米水平为32%的配合... 文章旨在评估日粮用大米替代玉米对断奶仔猪生长性能、组织器官发育及肠道酶活性的影响。试验将21 d断奶平均体重一致的800头商品仔猪随机分为2组,每组8个重复,每个重复50头。在为期4 w的试验中,玉米组断奶仔猪饲喂玉米水平为32%的配合饲料,大米组断奶仔猪饲喂大米水平为21%的配合饲料,两组饲料的营养水平维持一致。结果:与玉米组相比,大米组仔猪断奶后4 w的体重、3~4 w和0~4 w平均日增重分别显著提高4.73%、12.84%和8.71%(P<0.05),但3~4 w和0~4 w料重比分别显著降低10.72%和7.18%(P<0.05)。大米组仔猪断奶后4 w的粗蛋白质表观消化率较玉米组显著提高2.87%(P<0.05)。与玉米组相比,大米组断奶仔猪十二指肠氨肽酶活性、空肠麦芽糖酶、蔗糖酶和氨肽酶活性分别显著提高38.17%、34.92%、34.04%和64.93%(P<0.05)。结论:日粮用大米完全替代玉米可提高空肠酶活性,促进蛋白质消化率,进而改善仔猪断奶后前4 w的平均日增重和饲料效率。 展开更多

关键词 大米 断奶仔猪 生长性能 组织器官发育 酶活性

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