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EGF/EGFR/ErbB2调控成釉细胞MMP-20基因表达的研究 被引量：3
1
作者 曲政 王玉敏 +3 位作者 李博涵 许针针 袁杰 高玉光 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2013年第7期417-423,共7页
目的:研究EGF/EGFR/ErbB2信号通路对小鼠成釉细胞中基质金属蛋白酶-20(matrixmetalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用。方法:用定时定量RT-PCR、双荧光素酶报告基因检测系统分析EGF/EGFR/ErbB2调控MMP-20基因的表达、EGF调控MM... 目的:研究EGF/EGFR/ErbB2信号通路对小鼠成釉细胞中基质金属蛋白酶-20(matrixmetalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用。方法:用定时定量RT-PCR、双荧光素酶报告基因检测系统分析EGF/EGFR/ErbB2调控MMP-20基因的表达、EGF调控MMP-20启动子的主要区域、MAPK信号通路阻断剂对EGF调控MMP-20转录活性的影响、转录因子Jun家族介导EGF/ErbB2对MMP-20转录活性的调控;用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统分析EGF/ErbB2、C-Jun对MMP-20基因启动子转录活性的影响。结果:成釉细胞经20 ng/mL EGF刺激后,MMP-20的基因表达上调(P<0.05),MMP-20启动子在(-157～+23)之前的区域转录活性增强(P<0.05);EGFR、ErbB2、ERK阻断剂均能抑制EGF对MMP-20基因表达的调控(P<0.05);转录因子C-Jun介导EGFR/ErbB2上调MMP-20基因的表达(P<0.05);突变MMP-20启动子的AP1结合位点后,MMP-20基因表达的水平下降(P<0.05),同时EGF/ErbB2也失去上调MMP-20基因表达水平的作用。结论:在成釉细胞中EGF通过EGFR/ErbB2～ERK～C-Jun信号通路对MMP-20基因的表达起到调控作用。 展开更多
关键词 EGF EGFR ERBB2 基质金属蛋白酶-20 双荧光素酶基因检测 RT-PCR
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Smad3调控成釉细胞Amelotin启动子转录活性的研究 被引量：1
2
作者 许针针 张莉 +3 位作者 王玉敏 李东亮 高艳 高玉光 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2015年第6期329-334,共6页
目的:研究Smad3对Amelotin启动子转录活性的影响。方法:用基因克隆技术获得含有不同长度Amelotin启动子片段的荧光素酶报告基因载体,然后将其与Smad3瞬时转染小鼠成釉细胞,并用双荧光素酶报告基因检测其活性;生物学信息软件对人和小鼠的... 目的:研究Smad3对Amelotin启动子转录活性的影响。方法:用基因克隆技术获得含有不同长度Amelotin启动子片段的荧光素酶报告基因载体,然后将其与Smad3瞬时转染小鼠成釉细胞,并用双荧光素酶报告基因检测其活性;生物学信息软件对人和小鼠的Amelotin基因启动子序列的同源性进行BLAST分析;凝胶迁移实验(EMSA)观察Smad3和Amelotin启动子特异性结合位点之间的相互作用;基因定点突变构建Smad3结合位点突变型Amelotin启动子,并用双荧光素酶报告基因检测系统分析Smad3对野生型和突变型Amelotin启动子转录活性的影响。结果:Smad3转染后,Amelotin启动子(-160^+196)转录活性明显增强(P<0.05);将人与小鼠的Amelotin启动子序列(-160^+196)进行Blast序列比对,发现两序列在(-160^-1)具有很大的同源性;EMSA结果显示,Smad3与Amelotin启动子(-160^+196)的GTCTG有相互作用;将Amelotin启动子上Smad3结合位点特征性序列"GTCTG"突变为"CCCTG"后,Smad3对突变型Amelotin基因启动子的转录活性无显著影响(P>0.05)。结论:转录因子Smad3可通过与Amelotin启动子特定序列结合而调控Amelotin的基因表达,从而在釉质发育过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 SMAD3 Amelotin EMSA 双荧光素酶报告基因检测
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