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猫疱疹病毒ERA-LFD检测技术的建立与应用 被引量：6
1
作者 刘迪 许鑫燕 +6 位作者 郑亚婷 杨育鹏 康洪涛 姜骞 杨鸣发 刘家森 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期11-18,共8页
为建立一种快速检测猫疱疹病毒(FHV)的酶促恒温扩增-横向流动试纸条(ERA-LFD)方法,根据GenBank上FHV TK基因保守区域序列,设计多对ERA特异性引物用于筛选最佳引物对及探针,以现场快速检测FHV。灵敏性试验表明,该方法的检测限为7.86×... 为建立一种快速检测猫疱疹病毒(FHV)的酶促恒温扩增-横向流动试纸条(ERA-LFD)方法,根据GenBank上FHV TK基因保守区域序列,设计多对ERA特异性引物用于筛选最佳引物对及探针,以现场快速检测FHV。灵敏性试验表明,该方法的检测限为7.86×10^(1)copies/μL,比普通PCR的检测下限高10倍,与实时荧光定量PCR方法的检测限相当。特异性试验表明,该检测方法与猫细小病毒、猫杯状病毒、猫传染性腹膜炎病毒等无交叉反应。重复性试验表明,组内的变异系数在1.15%~4.76%之间,组间变异系数在2.09%~2.66%之间,均小于5%。对30份临床样品进行检测,该方法的阳性检出数为6,包含用普通PCR方法的检出的5份阳性病料。对临床检测为阳性的ERA扩增产物进行测序,BLAST对比结果证实为FHV毒株。综上所述,建立的ERA-LFD方法可用于猫疱疹病毒的快速检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒 ERA-LFD 快速检测
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杯状病毒疫苗免疫猫中杯状病毒分离株的遗传变异分析 被引量：5
2
作者 郑亚婷 刘迪 +6 位作者 许鑫燕 杨育鹏 康洪涛 姜骞 杨鸣发 刘家森 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期555-559,571,共6页
为了解猫杯状病毒(FCV)疫苗免疫猫中FCV的感染情况及分子特征,本研究随机采集哈尔滨和大连经灭活疫苗免疫的猫口腔拭子样品29份,从中分离鉴定获得8株FCV,对分离到的病毒进行全基因组测序及同源性与遗传进化分析。全基因组序列同源性分... 为了解猫杯状病毒(FCV)疫苗免疫猫中FCV的感染情况及分子特征,本研究随机采集哈尔滨和大连经灭活疫苗免疫的猫口腔拭子样品29份,从中分离鉴定获得8株FCV,对分离到的病毒进行全基因组测序及同源性与遗传进化分析。全基因组序列同源性分析结果显示:8株分离病毒与国内FCV参考株的核苷酸同源性为76.1%~89.3%,与国外FCV参考株的同源性为77.1%~83.5%;8株FCV间的同源性为76.9%~97.9%,DL31株与DL37株的同源性高达97.9%;与疫苗株F4、F9、F65、255相比,8株分离病毒与其同源性在76.2%~79.8%。VP1和全基因组序列遗传进化分析显示:34株FCV可以分为2个大分支,即基因群Ⅰ和Ⅱ,8株分离病毒在两个基因群均有分布,其中分离株HRB46与韩国株12Q087-1处于同一分支,但8株FCV与疫苗株F4、F9、F65、255等均不在一个分支。将分离病毒VP1重要氨基酸位点与传统疫苗株F9比较分析,结果显示:其D区和conE区的氨基酸相对保守,但其5’高变区(5’HVR)与3’HVR的变异较大,而已有研究发现疫苗株F9在E区5’HVR的Asn-GlyThr序列(aa439~aa441)具有较强的免疫原性,8株分离株在该位点发生了1aa~3aa变异;部分B细胞抗原表位中的氨基酸也发生了突变,8株FCV在aa448~aa450这3个位点发生了连续性变异。以上结果表明FCV具有高度的遗传变异性,由此可能造成FCV疫苗免疫失败。本研究首次对FCV疫苗免疫猫开展FCV的分离鉴定,并分析了分离株与疫苗株的差异,为FCV感染的防控和疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 疫苗 全基因组 遗传进化
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一株猫疱疹病毒Ⅰ型的分离与鉴定 被引量：4
3
作者 许鑫燕 郑亚婷 +3 位作者 刘迪 马波 刘家森 曲连东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1713-1720,共8页
采集哈尔滨某猫舍中表现为上呼吸道感染的患病猫眼、鼻拭子,PCR初步确诊为猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒(FHV-1)混合感染。利用猫肾细胞(CRFK)对样本进行病毒分离,前两代细胞培养物的核酸检测结果为FHV-1和FCV阳性,第三代开始只有FCV阳性... 采集哈尔滨某猫舍中表现为上呼吸道感染的患病猫眼、鼻拭子,PCR初步确诊为猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒(FHV-1)混合感染。利用猫肾细胞(CRFK)对样本进行病毒分离,前两代细胞培养物的核酸检测结果为FHV-1和FCV阳性,第三代开始只有FCV阳性,由此分离出FCV。制备此株FCV的鼠源多克隆抗体,并中和混合培养物中的FCV,从而分离出FHV-1,命名为HRB2019株。通过病毒粒子形态观察、间接免疫荧光试验(IFA)和基因序列分析等方法鉴定HRB2019株,并研究其体外生长动力学。结果显示,HRB2019株可在CRFK细胞上产生典型病变,测得其第四代病毒滴度为1×10^(8.43) TCID 50·mL^(-1);电镜下可观察到球形、有囊膜、直径约为200 nm的病毒粒子;IFA结果显示,分离株可与FHV-1阳性血清结合,出现特异性荧光;扩增分离株的gD基因,其与国内外流行株高度同源。病毒一步生长曲线表明,HRB2019株感染细胞12 h后开始复制增殖,12~36 h为快速增殖期,48~72 h进入增殖平台期且滴度达到高峰,84 h病毒滴度开始下降。本研究首次从FCV与FHV-1混合感染的病料中成功分离出FHV-1,为FHV-1的流行病学调查和病原学研究提供了重要数据,为混合感染中生长弱势毒株的分离提供了方法学依据。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒 猫杯状病毒 分离 鉴定
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基因工程表达鸡IFN-λ抗Ⅰ群禽腺病毒感染 被引量：4
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作者 许鑫燕 王延龙 +2 位作者 杨倩 吴艳涛 张小荣 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1302-1305,共4页
Ⅲ型干扰素(IFN)又被称为IFN-λ,具有与Ⅰ,Ⅱ型IFN类似的抗病毒特性,但利用不同的配体-受体系统,主要在一些上皮细胞及免疫细胞上发挥作用。本研究评价了用昆虫杆状病毒表达系统制备的重组鸡IFN-λ(chIFN-λ)在体内、外对禽Ⅰ群腺病毒4... Ⅲ型干扰素(IFN)又被称为IFN-λ,具有与Ⅰ,Ⅱ型IFN类似的抗病毒特性,但利用不同的配体-受体系统,主要在一些上皮细胞及免疫细胞上发挥作用。本研究评价了用昆虫杆状病毒表达系统制备的重组鸡IFN-λ(chIFN-λ)在体内、外对禽Ⅰ群腺病毒4型(FAdV-4)GX2013株和8b型(FAdV-8b)QD2016株感染的抗病毒效果。在体外抗病毒试验中,重组chIFN-λ在LMH细胞上对GX2013株和QD2016株的抗病毒效价分别达到1.33×10^6,1.78×10^6 U/mL。在体内抗FAdV-4感染试验中,重组chIFN-λ治疗组在攻毒5 d后试验鸡存活率达60%,而未进行治疗的对照组3 d内死亡率为100%。在体内抗FAdV-8b感染试验中,重组chIFN-λ治疗组和非治疗组试验鸡均无明显临床症状,但治疗组在攻毒5 d后呼吸道和消化道排毒水平均低于未治疗组,且差异极显著(P<0.01)。上述结果表明重组chIFN-λ作为一种新型的生物制剂,有望在禽腺病毒感染防控中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 chIFN-λ 杆状病毒表达系统 Ⅰ群禽腺病毒 抗病毒试验
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猫细小病毒适配体的筛选与鉴定 被引量：3
5
作者 董丽丽 许鑫燕 +6 位作者 刘迪 郑亚婷 康洪涛 姜骞 杨鸣发 刘家森 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期826-831,共6页
为筛选猫细小病毒(FPV)特异性核酸适配体,本研究利用体外指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从80 nt的单链DNA随机文库中筛选出与FPV高亲和力、高特异性结合的核酸适配体。对FPV适配体共进行14轮筛选,采用dot blot鉴定,确定其中的Apt27... 为筛选猫细小病毒(FPV)特异性核酸适配体,本研究利用体外指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从80 nt的单链DNA随机文库中筛选出与FPV高亲和力、高特异性结合的核酸适配体。对FPV适配体共进行14轮筛选,采用dot blot鉴定,确定其中的Apt27和Apt52为候选适配体。MTT试验表明,Apt27和Apt52对CRFK细胞(猫肾细胞)无毒性作用。利用酶联寡核苷酸法(ELONA)测定Apt27和Apt52的解离常数,结果显示分别为18.3249±7.1723 nmol/L和24.7882±10.0067 nmol/L。同时采用dot blot、间接免疫荧光试验(IFA)方法检测Apt27和Apt52对不同病毒的结合情况,结果显示其对猫杯状病毒、猫疱疹病毒的结合力弱,而对FPV的结合能力较强。预测二者二级结构可见,Apt27和Apt52均具有环状、发卡状结构,其中茎环结构可能为适配体特异性识别FPV的基本结构。本研究首次筛选到特异性识别FPV的适配体序列,为FPV的检测与治疗制剂的开发提供了新思路。 展开更多
关键词 猫细小病毒 适配体 SELEX技术
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检测猫杯状病毒RT-qPCR方法的优化与应用 被引量：2
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作者 刘迪 郑亚婷 +6 位作者 许鑫燕 董丽丽 康洪涛 姜骞 杨鸣发 刘家森 曲连东 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期53-60,共8页
为建立一种通用性良好的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank上猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)ORF1保守区域序列,设计合成1对特异性引物,用于FCV的快速检测。灵敏性试验结果显示,该方法的检测下限为4.93×10;拷贝/μL... 为建立一种通用性良好的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank上猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)ORF1保守区域序列,设计合成1对特异性引物,用于FCV的快速检测。灵敏性试验结果显示,该方法的检测下限为4.93×10;拷贝/μL,比普通RT-PCR检测下限高100倍;特异性试验结果显示,该检测方法与猫疱疹病毒、猫细小病毒、猫传染性腹膜炎病毒等无交叉反应;通用性试验结果显示,针对引物靶位点区间,该方法对所有已知变异位点的人工合成质粒和本实验室保存的不同变异位点的FCV毒株,均能够良好检出;重复性试验结果显示,组内的变异系数为0.09%~0.71%,组间变异系数为0.05%~0.82%,均小于1%。对23份临床样品进行检测,该方法的阳性检出率为60.9%,检出的14份阳性病料分别接种到CRFK细胞中,对细胞病变产物进行扩增并测序,BLAST对比后结果证实为FCV毒株。结果表明,本试验建立的荧光定量RT-PCR检测方法可用于FCV的快速诊断及流行病学的调查。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 实时荧光定量RT-PCR SYBR GreenⅠ ORF1
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