T-bet、GATA3及相关因子的表达与胃癌及转移的相关性研究 被引量：11

1

作者 邱谷风 王锁英 +10 位作者 王胜军 马洁 毛朝明 朱蓓 杨敏 许小朋 陈建国 胡正军 邵启祥 黄新祥 许化溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期798-802,共5页

目的:分析胃癌患者Th1和Th2两类细胞因子的基因表达与转录因子T-bet和GATA3表达的相关性,从细胞因子与转录因子角度考证胃癌患者Th1/Th2细胞分化趋势,探讨p53与T-bet的相关性,了解T-bet与肿瘤转移之间的关系。方法:利用荧光定量PCR技术... 目的:分析胃癌患者Th1和Th2两类细胞因子的基因表达与转录因子T-bet和GATA3表达的相关性,从细胞因子与转录因子角度考证胃癌患者Th1/Th2细胞分化趋势,探讨p53与T-bet的相关性,了解T-bet与肿瘤转移之间的关系。方法:利用荧光定量PCR技术检测55例胃癌患者及45例正常人外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA3转录因子和IFN-γ、IL-4等细胞因子的水平,应用免疫组化法检测胃癌组织中p53的表达状况。结果:55例胃癌患者T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4的表达率依次为51%(28/55)、78%(43/55)、27%(15/55)、69%(38/55)。定量PCR结果显示,病人组的T-bet和IFN-γ明显低于正常对照组(P<0.01),而GATA3和IL-4则明显高于正常对照组(P<0.01)。T-bet与IFN-γ在病人体内的mRNA表达存在正相关性(P<0.01),正常人则没有。GATA3与IL-4的表达在两组中均呈明显正相关(P<0.01和P<0.05),且在p53阳性的患者中,T-bet的表达率较低,而GATA3的表达率较高。结论:胃癌患者有明显Th2漂移现象,且p53的表达与T-bet的表达呈负相关。 展开更多

关键词 胃癌 TH1/TH2 细胞因子 转录因子 基因表达

下载PDF 职称材料

常州地区1172例变应性鼻炎患者变应原谱分析 被引量：7

2

作者 史梅 姚丽娜 +4 位作者 杨小骏 陈建 张丽荣 孙靖 许小朋 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期54-57,共4页

目的:分析收集的常州地区2008-2015年的变应性鼻炎(AR)患者的变应原谱分布情况。方法:已诊断为AR的1 172例患者用德国敏筛变应原检测系统检测血清中变应原特异性IgE抗体(sIgE),分析各种变应原的阳性率,以及在患者年龄、性别、季节等方... 目的:分析收集的常州地区2008-2015年的变应性鼻炎(AR)患者的变应原谱分布情况。方法:已诊断为AR的1 172例患者用德国敏筛变应原检测系统检测血清中变应原特异性IgE抗体(sIgE),分析各种变应原的阳性率,以及在患者年龄、性别、季节等方面的差异。结果:常州地区变应原阳性率最高的前几位变应原是户尘螨、混合真菌、屋尘、牛奶、狗毛皮屑、矮豚草、栎榆梧桐等混合花粉、猫毛皮屑。变应原在不同年龄AR患者中的分布差异有统计学意义(P<0.05),尘螨、真菌、屋尘、牛奶、狗毛皮屑、猫毛皮屑、鸡蛋白在未成年组中的阳性率高于成年组(P<0.05);矮豚草、栎榆梧桐等混合花粉、腰果、蟑螂、蟹则在成年组中的阳性率高于未成年组(P<0.05)。变应原在同年龄段内男女性之间的分布差异无统计学意义(P>0.05)。不同季节变应原阳性率之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:常州地区AR患者最常见的变应原是户尘螨、真菌和屋尘,不同年龄和季节的变应原分布有变化,可为临床诊断提供参考。 展开更多

关键词 鼻炎 变应性 特异性IGE

原文传递

常州地区过敏性鼻炎儿童吸入性过敏原分析 被引量：7

3

作者 许小朋 史梅 史伟峰 《国际检验医学杂志》 CAS 2014年第23期3217-3219,共3页

目的：分析常州地区过敏性鼻炎患儿吸入性过敏原检测结果及不同年龄组过敏原分布情况。方法采用德国敏筛过敏原检侧系统（Allergy Screen）测定473例0～12岁过敏性鼻炎患儿血清中过敏原特异性 IgE 抗体水平。根据年龄分为婴幼儿组（0～... 目的：分析常州地区过敏性鼻炎患儿吸入性过敏原检测结果及不同年龄组过敏原分布情况。方法采用德国敏筛过敏原检侧系统（Allergy Screen）测定473例0～12岁过敏性鼻炎患儿血清中过敏原特异性 IgE 抗体水平。根据年龄分为婴幼儿组（0～3岁）、学龄前儿童（4～6岁）和学龄儿童（7～12岁），并比较不同年龄组过敏原阳性率及变化趋势。结果473例患儿过敏原阳性340例（71.9％），前三位过敏原分别是户尘螨（55.6％）、混合真菌（25.8％）和屋尘（18.8％），随年龄增长阳性率均呈升高趋势。其中户尘螨（χ2＝21.061，P ＝0.000）、屋尘（χ2＝15.111，P ＝0.000）和猫狗毛皮屑（χ2＝7.597，P ＝0.022）组间分布比较差异有统计学意义。单一过敏原阳性率最高（38.5％），第二位为双重过敏原阳性（23.7％）。单一过敏原阳性前三位与各类过敏原总体阳性排序相同。最常见双重过敏原是户尘螨＋屋尘组合，多重过敏原阳性率组间分布差异有统计学意义（χ2＝13.399，P ＝0.001）。结论常州地区过敏性鼻炎患儿吸入性过敏原以户尘螨、混合真菌和屋尘为主，阳性率随年龄增长呈上升趋势，不同年龄组过敏原构成有差异，单一过敏原阳性最常见，其次为双重过敏原阳性。 展开更多

关键词 变应性鼻炎 过敏原 儿童

下载PDF 职称材料

Irisin与急性冠脉综合征的相关性研究 被引量：7

4

作者 许小朋 赵逸凡 +2 位作者 周顺萍 彭文辉 徐亚伟 《同济大学学报（医学版）》 CAS 2017年第2期51-55,共5页

目的探究血清鸢尾素(Irisin)与急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)的相关性。方法选取2013年9月至2014年3月于同济大学附属第十人民医院心脏中心住院患者182例,其中男性108例,女性74例;根据入院检测心肌肌钙蛋白T(cTNT)的水平... 目的探究血清鸢尾素(Irisin)与急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)的相关性。方法选取2013年9月至2014年3月于同济大学附属第十人民医院心脏中心住院患者182例,其中男性108例,女性74例;根据入院检测心肌肌钙蛋白T(cTNT)的水平,分为正常对照组(cTNT 0~0.014 ng/ml)、心肌损伤组(cTNT0.015~0.05 ng/ml)、急性冠脉综合征组(cTNT>0.051 ng/ml)。ACS组根据责任血管分为左前降支(left anterior descending branch,LAD)病变组及非左前降支病变组。所有的受试者均进行病史采集、体格检查、血生化指标及血清Irisin水平测定。结果采用单因素方差分析、t检验和Person相关分析进行统计学分析。结果 ACS组的血清Irisin水平较对照明显升高[(145.35±10.11)ng/ml vs(102.68±5.60)ng/ml,P<0.01],左前降支病变组(LAD病变)较非左前降支病变组(非LAD病变)Irisin水平升高[(123.86±8.05)ng/ml vs(108.27±5.72)ng/ml,P<0.05]。Irisin与N-端脑钠肽前体(NT-proBNP)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、空腹血糖(FBG)呈正相关(分别r=0.259,P<0.01;r=0.445,P<0.01;r=0.179,P<0.05)。结论 Irisin在ACS时明显升高,对ACS有预测和诊断意义,有望成为ACS治疗的新型分子靶点。 展开更多

关键词 鸢尾素 急性冠脉综合征 左前降支

下载PDF 职称材料

人T-bet基因的克隆及序列分析 被引量：5

5

作者 杨敏 王锁英 +6 位作者 王胜军 马洁 毛朝明 邱谷风 许小朋 邵启祥 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2006年第2期109-111,119,共4页

目的:克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA,并进行鉴定和测序分析,为从转录水平研究Th1/Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用RT-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA;连接至pGEM-Teasy载体,导入大肠... 目的:克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA,并进行鉴定和测序分析,为从转录水平研究Th1/Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用RT-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA;连接至pGEM-Teasy载体,导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆;应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。结果:扩增得到的T-bet基因cDNA全长1 670 bp,包括编码区1 607 bp,编码530个氨基酸残基,与Gen-bank中发表的序列完全一致。结论:获得了人T-bet基因的克隆,为进一步研究其生物学功能构建了基础平台,为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。 展开更多

关键词 T-BET基因 CDNA克隆 RT-PCR

下载PDF 职称材料

心房颤动患者血清vaspin与心房纤维化血清生化标志物的相关性研究

6

作者 闫美玉 于姝姝 +4 位作者 刘慧竹 唐可 许小朋 许宜冠 谢贇 《中国现代医生》 2024年第9期37-40,共4页

目的探讨心房颤动(atrial fibrillation,AF)患者血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceraladiposetissue-derived serineproteinase inhibitor,vaspin)与心房纤维化血清生化标志物的相关性。方法选取2021年1月至2022年10月在上海市普... 目的探讨心房颤动(atrial fibrillation,AF)患者血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(visceraladiposetissue-derived serineproteinase inhibitor,vaspin)与心房纤维化血清生化标志物的相关性。方法选取2021年1月至2022年10月在上海市普陀区人民医院心血管内科就诊且被诊断为AF的住院患者,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定阵发性房颤(paroxysmal atrial fibrillation,PAF)组、持续性房颤(persistent atrial fibrillation,PeAF)组及健康对照组患者的血清vaspin、Ⅰ型胶原羧基端前肽(C-terminal propeptide of prollagen typeⅠ,PⅠCP)、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、Ⅲ型前胶原N端肽(N-terminal typeⅢcollagen peptide,PⅢNP)、组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue matrix metalloproteinase inhibitory factor-1,TIMP-1)。分析患者的血清vaspin与上述血清生化标志物的相关性。结果①PeAF组患者的血清vaspin(9.51±1.47)ng/ml、PⅠCP(704.83±120.45)ng/ml、MMP-1(5.92±0.73)ng/ml、PⅢNP(63.34±12.24)ng/ml、TIMP-1(7.56±0.90)ng/ml的水平均显著高于PAF组及对照组(P<0.05);②vaspin与PⅠCP、MMP-1、PⅢNP、TIMP-1在PAF组、PeAF组中均呈显著正相关。结论AF患者血清vaspin水平显著升高,且与心房纤维化血清生化标志物呈正相关,提示vaspin与AF患者心房纤维化密切相关,可作为判别AF纤维化程度的潜在标志物。 展开更多

关键词 心房颤动 脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂 心房纤维化 血清生化标志物 相关性

下载PDF 职称材料

经食管心脏电生理检查与体表心电图检查快速心律失常的检出率分析

7

作者 许小朋 赵佳敏 +1 位作者 许群锋 谢贇 《贵州医药》 CAS 2024年第3期457-459,共3页

目的探究经食管心脏电生理检查与体表心电图检查在快速心律失常中的诊断价值。方法选取疑似快速心律失常患者65例,分别开展经食管心脏电生理检查、体表心电图检查,将心内电生理检查作为金标准,观察不同检查方式的检查结果,并对比经食管... 目的探究经食管心脏电生理检查与体表心电图检查在快速心律失常中的诊断价值。方法选取疑似快速心律失常患者65例,分别开展经食管心脏电生理检查、体表心电图检查,将心内电生理检查作为金标准,观察不同检查方式的检查结果,并对比经食管心脏电生理检查、体表心电图检查快速心律失常的检出率、准确度、灵敏度及特异度。结果金标准、经食管心脏电生理检查的检出率均较体表心电图检查更高,差异均有统计学意义(P<0.05),但金标准和经食管心脏电生理检查的检出率差异无统计学意义(P>0.05);经食管心脏电生理检查的特异度稍高于体表心电图检查,但差异无统计学意义(P>0.05),准确度及灵敏度均较体表心电图检查高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论相比于体表心电图检查,经食管心脏电生理检查的诊断价值更高,可提升快速心律失常的检出率,且准确度及灵敏度较高,值得推广。 展开更多

关键词 快速心律失常 经食管心脏电生理检查 体表心电图检查 心内电生理检查

下载PDF 职称材料

转录因子T-bet和GATA-3对婴幼儿喘息性支气管炎的免疫调控作用 被引量：2

8

作者 王锁英 许化溪 +6 位作者 许小朋 杨敏 张赟健 忻悦 邱谷风 马洁 眭建 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第21期1449-1451,共3页

目的探讨转录因子T-bet和GATA-3对小儿喘息性支气管炎的免疫调控作用。方法对32例喘息性支气管炎(喘支组)和30例正常儿童(对照组)抽取抗凝静脉血5 mL,Ficoll分离外周血淋巴细胞,以终质量浓度为100 mg/L的植物血凝素(PHA)刺激48 h,采用... 目的探讨转录因子T-bet和GATA-3对小儿喘息性支气管炎的免疫调控作用。方法对32例喘息性支气管炎(喘支组)和30例正常儿童(对照组)抽取抗凝静脉血5 mL,Ficoll分离外周血淋巴细胞,以终质量浓度为100 mg/L的植物血凝素(PHA)刺激48 h,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测淋巴细胞T-bet、GATA-3的mRNA表达水平。结果喘支组淋巴细胞培养上清液IFN-γ水平[(528±164)ng/L]低于对照组[(870±203)ng/L](P<0.05),而IL-4水平[(106±29)ng/L]明显高于对照组[(47±15)ng/L](P<0.01);喘支组和对照组淋巴细胞T-bet mRNA水平分别为(0.11±0.03)(、0.17±0.03),GATA-3 mRNA分别为(0.54±0.09)、(0.41±0.07),提示喘支组T-bet mRNA表达较对照组减少(P<0.05),而GATA-3 mRNA明显高于对照组(P<0.01);喘支组IFN-γ水平与T-bet mRNA表达I、L-4与GATA-3 mRNA表达均呈正相关(r=0.57,0.60 P均<0.01);IFN-γ与IL-4水平、T-bet mRNA与GATA-3 mRNA表达均呈负相关(r=-0.38,-0.46 P均<0.05)。结论1.喘支组患儿淋巴细胞合成IL-4水平增高,IFN-γ减少,存在以Th2细胞过度分化为特征的T辅助细胞分化失衡。2.喘支组患儿T细胞分化失衡受到核转录因子T-bet和GATA-3的调控,T-bet表达减少可能是一重要因素。 展开更多

关键词 转录因子 支气管炎 喘息性 免疫调节

下载PDF 职称材料

心房颤动、冠状动脉栓塞致急性心肌梗死一例 被引量：3

9

作者 许小朋 季舒亚 +2 位作者 车文良 徐亚伟 彭文辉 《上海医学》 CAS 北大核心 2018年第6期370-371,共2页

1 临床资料 患者男．58岁，因“胸痛4h”入院．入院前2d因父亲去世一直未休息。4h前患者出现胸痛且持续未缓解，既往无高血压、糖尿病和心房颤动病史，有吸烟史。入院体格检查：血压120／70mmHg（1mmHg=0．133kPa）；双肺呼吸音粗，未... 1 临床资料 患者男．58岁，因“胸痛4h”入院．入院前2d因父亲去世一直未休息。4h前患者出现胸痛且持续未缓解，既往无高血压、糖尿病和心房颤动病史，有吸烟史。入院体格检查：血压120／70mmHg（1mmHg=0．133kPa）；双肺呼吸音粗，未闻及干、湿啰音；颈静脉无怒张；心界无增大，心率86次／min．心律绝对不齐. 展开更多

关键词 心房颤动 急性心肌梗死 冠状动脉栓塞 临床资料 体格检查 肺呼吸音 高血压 糖尿病

下载PDF 职称材料

1817例女性人乳头瘤病毒感染现状分析 被引量：3

10

作者 史梅 张丽蓉 +4 位作者 许小朋 孙靖 张晓磊 柳楠楠 史伟峰 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第20期2862-2863,2866,共3页

目的探讨常州地区女性人乳头瘤病毒（HPV）的感染类型、主要亚型及年龄分布等情况。方法采集2015年10月至2016年7月1 718例该院门诊妇科患者宫颈上皮细胞标本,采用PCR-反向点杂交法对其进行28种基因分型的检测。结果 （1）1 718例女性患... 目的探讨常州地区女性人乳头瘤病毒（HPV）的感染类型、主要亚型及年龄分布等情况。方法采集2015年10月至2016年7月1 718例该院门诊妇科患者宫颈上皮细胞标本,采用PCR-反向点杂交法对其进行28种基因分型的检测。结果 （1）1 718例女性患者,HPV阳性检出率为34.23%。（2）单一型感染率为23.57%（405/1 718）,包括高危型HPV感染率为17.17%（295/1 718）,低危型HPV感染率为5.18%（89/1 718）,疑似高危型HPV感染为1.22%（21/1 718）;多重感染为10.94%（188/1 718）。（3）最常见高危型为HPV52型,阳性率为16.16%（95/588）;低危型感染以HPV61型为主,阳性率为4.08%（24/588）;各年龄组之间HPV阳性率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。61-70岁年龄组的多重感染率与其他年龄组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论常州地区女性HPV阳性检出率较高,以单一型感染和高危型感染为主,最常见的高危型为HPV52型,其次为16、58型。不同年龄组HPV感染类型略有差异。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 宫颈癌 基因型 PCR-反向点杂交

下载PDF 职称材料

1例胰岛素自身免疫综合征检测结果异常的原因分析

11

作者 金明 李雪 +5 位作者 许小朋 何彩珍 刘息平 项守奎 王龙 史梅 《临床检验杂志》 2023年第11期876-877,880,共3页

随着免疫学技术的发展,一些过去常被报道的干扰物质如溶血、黄疸和脂血对检测结果的影响逐渐减少。但是在某些情况下,免疫检测干扰仍然无法避免,特别是异嗜性抗体、自身抗体等内源性抗体等干扰因素给免疫检验带来的影响更加令人关注。

关键词 胰岛素免疫综合征 免疫检测 检测干扰

下载PDF 职称材料

转染T-bet基因的人胃癌SGC-7901细胞分泌IFN-γ的作用 被引量：2

12

作者 邱谷风 王锁英 +8 位作者 王胜军 邵启祥 马洁 杨敏 许小朋 毛朝明 苏兆亮 黄新祥 许化溪 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第3期606-609,619,共5页

采用基因克隆与腺相关病毒包装技术，构建人Thl细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体，并转染入胃癌细胞系SGC-790I细胞。检测转染细胞IFN-γ的分泌功能及其对SGC-7901细胞生物学作用的影响。结果：（1）获得含有T-bet基因的重... 采用基因克隆与腺相关病毒包装技术，构建人Thl细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体，并转染入胃癌细胞系SGC-790I细胞。检测转染细胞IFN-γ的分泌功能及其对SGC-7901细胞生物学作用的影响。结果：（1）获得含有T-bet基因的重组腺相关病毒（rAAV—eGFP-T—bet）；（2）用rAAV-eGFP—T-bet感染SGC-7901细胞后，约30％～40％的细胞出现绿色荧光。对被感染细胞进行RT—PCR，扩增出1670bp的T-bet，并经Westernblot证实；（3）转染后的细胞测得388bp的IFN-γ目的条带和IFN-γ蛋白的表达。由此表明，人T-bet基因的腺相关病毒载体rAAV—eGFP—T-bet，可成功转染SGC-7901，并致使转染细胞分泌IFN-γ。为进一步开展T-bet基因干预治疗肿瘤的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 T-BET基因 基因克隆 重组质粒 腺相关病毒载体 IFN-Γ

原文传递

CpG-ODN对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞T-bet表达的影响 被引量：2

13

作者 王锁英 许化溪 +8 位作者 杨敏 许小朋 邱谷风 李国民 张贇健 马洁 眭建 姜旭淦 胡嘉波 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1035-1039,共5页

目的:探讨CpG-ODN干预对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞(PBMC)T-bet表达和IFN-γ分泌的影响。方法:对28例喘息性支气管炎(喘支组)患儿于急性期和恢复期分别抽取抗凝静脉血并分离PBMC,以终浓度为10μg/ml的B型CpG-ODN刺激48小时,... 目的:探讨CpG-ODN干预对婴幼儿喘息性支气管炎外周血单个核细胞(PBMC)T-bet表达和IFN-γ分泌的影响。方法:对28例喘息性支气管炎(喘支组)患儿于急性期和恢复期分别抽取抗凝静脉血并分离PBMC,以终浓度为10μg/ml的B型CpG-ODN刺激48小时,分别应用RT-PCR和Western blot检测CpG-ODN刺激前后患儿PBMC的T-bet mRNA和蛋白表达情况,以ELISA检测PBMC培养上清IFN-γ的变化,同时设立26例健康婴儿对照组。结果:与正常对照组比较,喘支患儿PBMC表达T-bet mRNA及蛋白明显减少(P<0.05),应用CpG-ODN刺激后,两组小儿PBMC表达T-bet均显著上调,但产生IFN-γ无明显增多,对照序列ODN对T-bet表达及IFN-γ的分泌无明显影响。相关分析表明,喘支患儿T-bet mRNA与IFN-γ分泌呈正相关(r=0.57,P<0.01),CpG-ODN刺激后,二者相关性明显下降(r=0.19,P>0.05)。结论:T-bet在喘支患儿PB-MC中表达减少,提示T-bet表达缺陷参与了喘支的免疫病理,B型CpG-ODN作为一种免疫调节剂,可有效上调T-bet的表达,但不能诱导IFN-γ的产生。 展开更多

关键词 CPG-ODN 喘息 支气管炎 T-BET

下载PDF 职称材料

小鼠GITRL融合蛋白的表达、纯化及免疫原性的研究 被引量：2

14

作者 马洁 王胜军 +9 位作者 毛朝明 杨敏 王锁英 许小朋 邱谷风 胡正军 姜旭淦 邵启祥 丁庆 许化溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期675-677,683,共4页

目的:构建含小鼠GITRL基因原核表达载体,经转化E.coli以表达GITRL融合蛋白,纯化蛋白并制备相应的抗血清。方法:将GITRL-pMD18-T重组质粒经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收目的基因,与原核表达载体PET32a连接,应用电转法转化BL21(DE3)菌。阳性... 目的:构建含小鼠GITRL基因原核表达载体,经转化E.coli以表达GITRL融合蛋白,纯化蛋白并制备相应的抗血清。方法:将GITRL-pMD18-T重组质粒经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收目的基因,与原核表达载体PET32a连接,应用电转法转化BL21(DE3)菌。阳性克隆经鉴定后用IPTG诱导GITRL蛋白表达,经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE、West-ernblot进行特异性鉴定,CD4+CD25+T细胞免疫抑制试验验证其生物学功能。采用弗氏完全佐剂常规免疫方案,制备抗GITRL抗血清,抗血清的效价和特异性测定采用双向琼脂免疫扩散法。结果:经酶切鉴定和测序分析证实原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Westernblot结果显示,在40kD处呈现单一蛋白条带,该蛋白具有阻断CD4+CD25+T细胞免疫抑制功能的作用,双向免疫扩散结果显示兔抗小鼠GITRL抗血清效价为1∶16。结论:成功构建GITRL原核表达质粒,制备和纯化的GITRL融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能,制备并获得特异性抗血清,可用于GITRL融合蛋白生物学活性的进一步研究。 展开更多

关键词 GITRL 蛋白表达 融合蛋白 小鼠

下载PDF 职称材料

宫颈癌患者血清Th17细胞和妇女HPV感染的关系 被引量：2

15

作者 郭琪琼 史伟峰 许小朋 《中国临床研究》 CAS 2017年第12期1685-1687,共3页

目的探讨宫颈癌患者血清Th17细胞与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法选取2015年6月至2017年5月收治的181例宫颈癌患者为观察组,选取181名女性健康体检者为对照组。HPV检测采用HPV核酸扩增分型检测试剂盒,Th17细胞水平检测采用流式细... 目的探讨宫颈癌患者血清Th17细胞与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法选取2015年6月至2017年5月收治的181例宫颈癌患者为观察组,选取181名女性健康体检者为对照组。HPV检测采用HPV核酸扩增分型检测试剂盒,Th17细胞水平检测采用流式细胞术。分别检测两组HPV感染率,Th17细胞水平以及HPV病毒载量,分析Th17细胞水平与患者临床特征的关系。结果对照组HPV阳性检出率为4.42%,观察组HPV阳性检出率为96.69%,两组HPV检出率比较差异有统计学意义(P<0.01);观察组Th17水平高于对照组,差异有统计学意义[(2.07±0.50)%vs(0.91±0.27)%,P<0.01);宫颈癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期在中高度病毒载量患者所占百分比分别为35.7%、53.0%、70.7%以及76.7%,差异有统计学意义(P<0.01);FIGO分期越高、HPV病毒载量越高、分化程度越低、有淋巴结转移、有脉管浸润患者Th17细胞水平越高(P<0.05,P<0.01)。结论 Th17细胞可能与HPV感染导致的宫颈癌有密切关系。 展开更多

关键词 TH17细胞 流式细胞术 宫颈癌 人乳头瘤病毒

原文传递

血清外泌体对高糖作用后HUVECs细胞增殖、迁移及管腔形成能力的影响 被引量：3

16

作者 刘慧竹 黄群 +5 位作者 闫美玉 吉懿 许小朋 刘奇良 王明亮 谢赟 《山东医药》 CAS 2020年第11期25-28,共4页

目的观察正常大鼠血清外泌体对高糖作用后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移及管腔形成能力的影响。方法从正常SD大鼠血清中提取外泌体,并经电子显微镜及Western blotting法证实。将HUVECs分为外泌体组、高糖组和对照组,外泌体组、高... 目的观察正常大鼠血清外泌体对高糖作用后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移及管腔形成能力的影响。方法从正常SD大鼠血清中提取外泌体,并经电子显微镜及Western blotting法证实。将HUVECs分为外泌体组、高糖组和对照组,外泌体组、高糖组加入40 mmol/L葡萄糖,对照组加入7 mmol/L葡萄糖;同时外泌体组分别加入10、40、160μg/mL大鼠血清外泌体,高糖组和对照组不加入外泌体。各组分别于培养0、12、24、36 h,采用CCK-8法检测细胞增殖的光密度(OD)值;培养24 h,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率;培养8 h,采用管腔形成实验测量成管长度和成管分支点数。结果与对照组比较,高糖组作用12、24、36 h的OD值及细胞迁移率、成管长度、成管分支点数均降低(P均<0.05)。与高糖组比较,加入10μg/mL外泌体的外泌体组作用12、24、36 h的OD值及细胞迁移率、成管长度、成管分支点数均无明显变化(P均>0.05),加入40、160μg/mL外泌体的外泌体组上述指标均升高,且加入160μg/mL外泌体的外泌体组升高更明显(P均<0.05)。结论高糖会引起HUVECs细胞增殖、迁移及管腔形成能力下降,高浓度的正常大鼠血清外泌体可逆转上述变化,对HUVECs具有保护作用。 展开更多

关键词 血清外泌体 人脐静脉内皮细胞 高糖 细胞增殖 管腔形成

下载PDF 职称材料

人AITRL基因克隆和序列分析 被引量：1

17

作者 毛朝明 王胜军 +8 位作者 蒋茜 马洁 杨敏 仝佳 许小朋 邱谷风 唐莉 邵启祥 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2006年第3期189-192,共4页

目的:克隆人AITRL基因cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从人脐静脉内皮细胞株中获得AITRL基因的cDNA,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和序列测定。结果:扩增得到的AITRL基因cDNA为534 bp,编码177个氨基酸残... 目的:克隆人AITRL基因cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从人脐静脉内皮细胞株中获得AITRL基因的cDNA,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和序列测定。结果:扩增得到的AITRL基因cDNA为534 bp,编码177个氨基酸残基,与GenBank中公布的序列完全一致。结论:获得人AITRL基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了良好基础。 展开更多

关键词 活化可诱导的肿瘤坏死因子受体配体 CDNA克隆 RT-PCR 人脐静脉内皮细胞

下载PDF 职称材料

人T-bet基因转染U937探讨T-bet对白血病细胞的影响 被引量：1

18

作者 许小朋 王锁英 +4 位作者 杨敏 邱谷风 王胜军 邵启祥 许化溪 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期619-621,626,共4页

目的探讨人T-bet基因在白血病细胞株U937中的表达及其对IFN-γ分泌的影响,寻求通过免疫调节改善白血病患者机体免疫状态的可能性。方法采用电穿孔技术将重组人pIRES-eGFP-Tbet(pIRES-eGFP-hTbet)质粒转染U937细胞,RT-PCR检测转染前后U93... 目的探讨人T-bet基因在白血病细胞株U937中的表达及其对IFN-γ分泌的影响,寻求通过免疫调节改善白血病患者机体免疫状态的可能性。方法采用电穿孔技术将重组人pIRES-eGFP-Tbet(pIRES-eGFP-hTbet)质粒转染U937细胞,RT-PCR检测转染前后U937细胞T-bet的mRNA水平;westen-blot检测表达的T-bet蛋白;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平。试验中同时设立pIRES-eGFP质粒为对照。结果电穿孔转染U937细胞后,在荧光显微镜下观察到带荧光的细胞(转染细胞),其荧光细胞阳性率80%左右,提示转染成功;转染T-bet的U937细胞,分别经RT-PCR及westen-blot检测到T-bet的mRNA和表达的蛋白,而未经转染或转染对照质粒pIRES-eGFP的细胞,均未见目的基因的转录和蛋白表达;T-bet转染细胞的培养上清中含有较高水平的IFN-γ,而转染前及对照质粒转染的细胞IFN-γ的分泌水平极低。结论通过电穿孔方法成功将人T-bet基因转染到白血病细胞株U937中,并检测到大量IFN-γ的产生。T-bet是免疫应答调节的重要转录因子,对其研究将有助于进一步探讨T-bet基因或其表达产物作为Th1应答的调节剂用于临床血液病治疗的可能性。 展开更多

关键词 基因转染 T-BET 干扰素Γ U937

下载PDF 职称材料

人AITRL胞外区基因克隆表达及重组蛋白生物活性分析 被引量：1

19

作者 毛朝明 王胜军 +8 位作者 仝佳 马洁 杨敏 许小朋 邱谷风 唐莉 邵启祥 李龙 许化溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1059-1063,共5页

目的:获得重组人活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体胞外区蛋白(sAITRL),分析AITRL蛋白的生物学功能。方法:从全长质粒AITRL-pMD18-T中扩增sAITRL cDNA,亚克隆至表达载体pQE30;将重组质粒转化至E.coliM15,IPTG诱导蛋白表达;表达蛋白用Ni2... 目的:获得重组人活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体胞外区蛋白(sAITRL),分析AITRL蛋白的生物学功能。方法:从全长质粒AITRL-pMD18-T中扩增sAITRL cDNA,亚克隆至表达载体pQE30;将重组质粒转化至E.coliM15,IPTG诱导蛋白表达;表达蛋白用Ni2+-IMAC柱纯化、复性并Western blot鉴定,流式细胞仪检测sAITRL重组蛋白的结合活性,增殖试验分析sAITRL的生物学活性。结果:成功构建了sAITRL-pQE30原核表达载体;表达相对分子质量约15kD的重组蛋白;sAITRL能与活化淋巴细胞上的天然受体AITR结合,低浓度的sAITRL能促进淋巴细胞的增殖,而在高浓度下则抑制了淋巴细胞的增殖。结论:成功表达了具有生物学活性的sAITRL重组蛋白,AITR-AITRL相互作用在调节淋巴细胞增殖过程中起重要作用。 展开更多

关键词 活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体 基因克隆 原核表达 重组蛋白

下载PDF 职称材料

检测不同分期慢性肾脏病患者骨代谢标志物水平的临床意义 被引量：1

20

作者 张丽荣 陈维 +1 位作者 王云清 许小朋 《常州实用医学》 2015年第5期315-317,共3页

目的分析检测不同分期慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）患者骨代谢标志物水平的临床意义。方法选择CKIM期患者40例、CKD5期患者84例（透析患者35例，非透析患者49例），分别检测4种血清骨标准物（血清骨钙素、I型胶原羧基端肽... 目的分析检测不同分期慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）患者骨代谢标志物水平的临床意义。方法选择CKIM期患者40例、CKD5期患者84例（透析患者35例，非透析患者49例），分别检测4种血清骨标准物（血清骨钙素、I型胶原羧基端肽8特殊序列、甲状旁腺素、总I型前胶原氨基端延长肽）水平。结果随着慢性肾脏病病情进展，4种骨代谢标志物水平逐渐升高，CKD4期患者均低于CKD5患者，差异有统计学意义（P〈0．01）；4种血清骨代谢标志物水平CKD5期透析与非透析患者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论检测骨代谢标志物水平能早期、敏感反映肾性骨病的发展及变化，为后续诊断及治疗提供依据。 展开更多

关键词 慢性肾脏疾病 肾性骨病 骨代谢标志物

下载PDF 职称材料