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CD46 RNAi对CD59介导的T细胞信号转导的作用研究 被引量：8
1
作者 高美华 王美娟 +2 位作者 张蓓 解西河 王冰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期576-579,共4页
目的构建携带针对CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白CD59与CD46在介导T细胞信号转导中的相关性。方法将能转录产生靶向CD46小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro... 目的构建携带针对CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白CD59与CD46在介导T细胞信号转导中的相关性。方法将能转录产生靶向CD46小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,转化大肠杆菌JM109并转染Jurkat细胞。将Jurkat细胞分为未转染的Jurkat细胞组(Ⅰ组)、转染空质粒的Jurkat细胞组(Ⅱ组)、转染CD59干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅲ组)及转染CD46干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅳ组)。用RT-PCR、Western blot技术检测各组细胞中的CD59、CD46基因的表达水平。用噻唑蓝(MTT)比色法检测CD46与CD59联合作用对4组Jurkat细胞的增殖效应。结果重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确,构建成功,稳定转染后,Ⅳ组细胞CD46分子的表达被成功抑制,Ⅲ组细胞CD59分子的表达被抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD46与CD59单抗联合作用后,增殖能力明显高于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.05);但Ⅰ组和Ⅱ组,Ⅲ组和Ⅳ组之间无差异。结论 CD59可增强CD46对T细胞信号转导的效应。 展开更多
关键词 CD59 CD46 逆转录病毒载体Jurkat细胞 信号转导
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抗原致敏树突细胞增强细胞因子诱导杀伤细胞抗胃癌的效应 被引量：5
2
作者 安岗 毛伟征 +4 位作者 代震波 牛兆建 刘希春 解西河 赵宝成 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期422-424,共3页
目的观察抗原致敏树突细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养体内外抗胃癌（SGC-7901）的效应。方法取健康供者外周血体外诱导培养DC和CIK，应用噻唑蓝（MTT）法测定比较（每组n=3）单纯CIK（CIK组）、DC诱导CIK（DC—CIK组... 目的观察抗原致敏树突细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养体内外抗胃癌（SGC-7901）的效应。方法取健康供者外周血体外诱导培养DC和CIK，应用噻唑蓝（MTT）法测定比较（每组n=3）单纯CIK（CIK组）、DC诱导CIK（DC—CIK组）和经胃癌抗原致敏的DC诱导CIK（抗原-DC-CIK组）体外对SGC-7901的杀伤活性，并利用SGC-7901建立胃癌裸鼠模型，设立PBS对照组，比较各组（每组n=5）瘤体体积、抑瘤率和肿瘤坏死面积评分。结果成熟DC与CIK共培养第7天时，DC—CIK扩增倍数为17．8±2．0，约为单纯CIK扩增倍数（10．9±1．8）的1．63倍（P〈0．05）；抗原-DC-CIK组、DC—CIK组、CIK组，体外实验中效靶比为20：1时对SGC-7901的杀伤活性分别为：（72．3±0．5）％、（53．9±0．7）％、（46．4±0．4）％（P均〈0．01）；体内动物实验中抑瘤率分别为30．02％、18．11％、15．94％（P均〈0．01）。结论SGC-7901抗原致敏DC能增加CIK的扩增数量，增强CIK对SGC-7901的杀伤作用。 展开更多
关键词 胃肿瘤 树突细胞 抗原 治疗
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CD59配体肽基因对卵巢癌细胞CD59表达的影响 被引量：1
3
作者 李伟伟 高美华 +1 位作者 张蓓 解西河 《青岛大学医学院学报》 CAS 2010年第4期301-303,306,共4页
目的研究CD59配体肽基因对卵巢癌细胞CD59表达的影响。方法构建CD59配体肽基因的真核表达重组体(CD59配体-pIRES),转染人卵巢癌细胞A2780,G418筛选稳定表达细胞克隆;RT-PCR及Westernblot方法检测细胞表面CD59 mRNA及蛋白的表达;MTT法测... 目的研究CD59配体肽基因对卵巢癌细胞CD59表达的影响。方法构建CD59配体肽基因的真核表达重组体(CD59配体-pIRES),转染人卵巢癌细胞A2780,G418筛选稳定表达细胞克隆;RT-PCR及Westernblot方法检测细胞表面CD59 mRNA及蛋白的表达;MTT法测定细胞增殖抑制率。结果成功构建了CD59配体肽基因真核表达重组体,转染后的A2780 CD59 mRNA及蛋白的表达水平与WT-A2780比较均明显下降(t=9.217、.20,P<0.05);细胞增殖抑制率明显增高(F=5.417,q=3.93,P<0.05)。结论CD59配体肽基因可影响人卵巢癌细胞A2780表面CD59的表达,有望用于肿瘤治疗。 展开更多
关键词 抗原 CD59 A2780细胞 重组融合蛋白质类
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CD59配体肽真核表达系统的构建及对PC-3细胞活性的作用研究 被引量：1
4
作者 李伟伟 高美华 +1 位作者 张蓓 解西河 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期80-83,共4页
目的:构建CD59分子配体肽sp22基因重组真核表达系统,探讨sp22基因对CD59分子的影响。方法:构建含特异性sp22基因的真核重组表达载体sp-pIRES,脂质体法转染人前列腺癌PC-3细胞,G418筛选建立稳定转染细胞系,RT-PCR检测转染细胞中sp22基因m... 目的:构建CD59分子配体肽sp22基因重组真核表达系统,探讨sp22基因对CD59分子的影响。方法:构建含特异性sp22基因的真核重组表达载体sp-pIRES,脂质体法转染人前列腺癌PC-3细胞,G418筛选建立稳定转染细胞系,RT-PCR检测转染细胞中sp22基因mRNA的表达筛选阳性细胞克隆,Western blot、ELISA竞争抑制试验检测转染细胞CD59蛋白的表达;台盼蓝染色实验和LDH实验测sp22基因对CD59分子功能的影响。结果:PCR、酶切及DNA测序鉴定表明成功构建了sp-PIRES重组表达载体;RT-PCR试验证实sp22在spPC-3细胞中成功表达;Westernblot、ELESA竞争抑制试验表明:spPC-3细胞比正常PC-3细胞CD59蛋白表达减少(P<0.05);与正常PC-3细胞相比,补体对spPC-3细胞的溶解杀伤明显增强(P<0.05)。结论:sp22基因可在mR-NA及蛋白水平影响人前列腺癌PC-3细胞表面CD59抗原的表达及功能,降低CD59分子抗补体活性,有望用于肿瘤治疗。 展开更多
关键词 CD59 配体肽 RT-PCR PC-3细胞 补体
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前列腺细胞高表达的CD59分子活性位点的封闭研究 被引量：1
5
作者 解西河 高美华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期68-70,74,共4页
目的观察噬菌体肽库筛选的短肽(SP22)对前列腺癌细胞高表达的正常或突变CD59分子活性位点的封闭效果。方法将正常和突变CD59基因、pIRES空质粒分别转染PC-3细胞;流式细胞术检测细胞表面CD59分子的表达;RT-PCR检测CD59基因的mRNA表达;补... 目的观察噬菌体肽库筛选的短肽(SP22)对前列腺癌细胞高表达的正常或突变CD59分子活性位点的封闭效果。方法将正常和突变CD59基因、pIRES空质粒分别转染PC-3细胞;流式细胞术检测细胞表面CD59分子的表达;RT-PCR检测CD59基因的mRNA表达;补体溶解试验观察SP22对补体介导的PC-3细胞溶解的影响。结果CD59基因成功转染并表达;wPC-3细胞(转染正常CD59基因)和mPC-3细胞(转染突变CD59基因)内CD59 mRNA表达水平显著高于pPC-3细胞(转染空质粒)(P<0.01);SP22使3种细胞的溶解率明显提高(P<0.01),但升高的模式和幅度显著不同。结论SP22不能封闭突变CD59分子的补体结合位点,但可与PC-3细胞表面的正常CD59分子高效结合并中和其补体抑制活性,进而显著增强补体对PC-3细胞的溶解。 展开更多
关键词 补体 CD59 短肽 前列腺癌 RT-PCR
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CD59与CD55锚固蛋白对T细胞活化信号转导的作用 被引量：1
6
作者 聊菲 高美华 +1 位作者 张蓓 解西河 《青岛大学医学院学报》 CAS 2011年第2期98-101,共4页
目的研究糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚固蛋白CD59、CD55在脂筏介导T细胞信号转导通路中的作用。方法应用siRNA技术,构建针对CD55与CD59基因的重组载体pSUPER-siCD55、pSUPER-siCD59。实验分为未转染的Jurkat细胞组（Ⅰ组）、转染pSUPER-siC... 目的研究糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚固蛋白CD59、CD55在脂筏介导T细胞信号转导通路中的作用。方法应用siRNA技术,构建针对CD55与CD59基因的重组载体pSUPER-siCD55、pSUPER-siCD59。实验分为未转染的Jurkat细胞组（Ⅰ组）、转染pSUPER-siCD59重组质粒的Jurkat细胞组（Ⅱ组）及转染pSUPER-siCD55重组质粒的Jurkat细胞组（Ⅲ组）。RT-PCR方法检测转染细胞中CD55和CD59基因mRNA的表达。噻唑蓝（MTT）比色法和激光共聚焦扫描显微镜分别检测CD55与CD59联合作用对3组Jurkat细胞的增殖效应以及细胞内钙离子的变化。结果与Ⅰ组比较,Ⅱ组细胞CD59和Ⅲ组细胞CD55 mRNA的表达均明显减少（F=595.14、699.06,q=45.70~47.25,P〈0.05）。Ⅰ组细胞CD55与CD59联合作用后增殖能力和钙离子浓度均明显高于Ⅱ组、Ⅲ组（F=97.02、189.47,q=13.69~26.39,P〈0.01）,Ⅱ组低于Ⅲ组（q=5.43、6.42,P〈0.05）。结论 CD59和CD55在T细胞活化信号转导通路中存在协同效应,其中CD59起到重要作用。 展开更多
关键词 抗原 CD59 抗原 CD55 JURKAT细胞 信号传导 协同作用
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CD59结合短肽对补体介导的前列腺癌细胞溶解影响
7
作者 解西河 高美华 张蓓 《青岛大学医学院学报》 CAS 2009年第5期410-412,共3页
目的观察CD59结合短肽（sp22）对补体介导高表达人CD59分子的PC-3细胞溶解的影响。方法利用脂质体法将携带人野生型CD59基因的pIRES质粒（wCD59-pIRES）转染PC-3细胞,G418筛选稳定转染的细胞株,荧光免疫组化技术检测细胞表面CD59分子的... 目的观察CD59结合短肽（sp22）对补体介导高表达人CD59分子的PC-3细胞溶解的影响。方法利用脂质体法将携带人野生型CD59基因的pIRES质粒（wCD59-pIRES）转染PC-3细胞,G418筛选稳定转染的细胞株,荧光免疫组化技术检测细胞表面CD59分子的表达,补体溶解试验观察sp22和抗CD59单克隆抗体对补体介导的高表达CD59分子的PC-3细胞溶解的影响。结果高表达CD59分子的PC-3细胞株构建成功;与对照组比较,sp22组转染细胞的溶解率显著升高（F=719.552,q=12.181-79.942,P〈0.05）;相同浓度条件下,sp22组转染细胞的溶解率明显高于抗CD59单克隆抗体组（q=7.805-12.280,P〈0.05）。结论sp22可封闭PC-3细胞表面高表达CD59分子的补体结合位点,显著增强抗PC-3细胞抗体所诱发的补体介导的抗瘤作用。 展开更多
关键词 抗原 CD59 短肽 前列腺肿瘤 补体溶解试验
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人CD3ζRNAi逆转录病毒载体的构建及鉴定 被引量：1
8
作者 高美华 王娟 +2 位作者 张蓓 王冰 解西河 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期40-42,45,共4页
目的:利用RNAi表达载体法构建并筛选携带针对CD3ζ基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞克隆。方法:利用DNA重组技术,设计3条60 bp能转录产生靶向CD3ζ小发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,以pSUPER.retro.neo+gfp质粒作... 目的:利用RNAi表达载体法构建并筛选携带针对CD3ζ基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞克隆。方法:利用DNA重组技术,设计3条60 bp能转录产生靶向CD3ζ小发卡RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,以pSUPER.retro.neo+gfp质粒作为空载体经限制性核酸内切酶酶切后与RNAi序列进行重组,构建CD3ζ-pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体,脂质体法转染包装细胞系PA317,建立产生逆转录病毒的细胞克隆。结果:重组载体经限制性核酸内切酶酶切、PCR和测序鉴定表明CD3ζ-pSUPER retroRNAi重组质粒构建成功;脂质体法将重组载体转染包装细胞系PA317,表达绿色荧光蛋白,表明包装成功。结论:成功地构建了特异性沉默CD3ζ基因的pSUPER retroRNAi逆转录病毒载体及稳定产毒的细胞系,为后续研究CD59与CD3ζ在T细胞内信号转导的相互作用提供理论和实验依据。 展开更多
关键词 SHRNA CD3ζ CD59 PA317 逆转录病毒载体
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