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热量限制通过AMPK-SIRT1-线粒体通路延缓小鼠骨骼肌衰老 被引量：8
1
作者 蒲荣喜 白川川 +3 位作者 解栋梁 吴韦铷 舒彬 杨忠 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期548-552,共5页
目的观察热量限制对老化进程中小鼠骨骼肌线粒体等生物学性状的影响,探讨热量限制生物效应的分子机制。方法 13月龄C57BL/6雄性小鼠30只,按照简单随机抽样法分为自由进食组和热量限制组,每周按照自由进食组前1周平均摄食量的60%饲养热... 目的观察热量限制对老化进程中小鼠骨骼肌线粒体等生物学性状的影响,探讨热量限制生物效应的分子机制。方法 13月龄C57BL/6雄性小鼠30只,按照简单随机抽样法分为自由进食组和热量限制组,每周按照自由进食组前1周平均摄食量的60%饲养热量限制小鼠。热量限制12周后,测量骨骼肌衰减指数、胫前肌等肌纤维密度及相对横截面积,透射电镜观察骨骼肌线粒体变化,Western blot检测PGC1α、AMPKα、p-AMPKα及SIRT1等的表达,并比较老年鼠与成年鼠的表达差异。结果 1与自由进食组比较,热量限制组骨骼肌衰减指数变化不明显,胫前肌等肌纤维密度显著升高(P<0.01),相对横截面积降低(P<0.01);2电镜观察显示:与自由进食组比较,热量限制组骨骼肌线粒体长度和宽度均增加(P<0.05,P<0.01),相对密度增加(P<0.01),PGC1α表达升高(P<0.05);3与自由进食组比较,热量限制组骨骼肌AMPK的磷酸化水平升高(P<0.01),同时SIRT1表达也升高(P<0.05);4与成年鼠比较,老年鼠骨骼肌AMPK磷酸化水平下降(P<0.05),SIRT1和PGC1α的表达也均下降(P<0.05)。结论热量限制能显著促进老化进程中骨骼肌线粒体的生成及活性,这一作用可能通过激活AMPK信号途径实现。 展开更多
关键词 热量限制 骨骼肌 线粒体 衰老
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应用多重荧光标记的流式细胞分选技术检测小鼠肌卫星细胞数量及其分化能力的增龄性变化 被引量：1
2
作者 卜凡 解栋梁 +1 位作者 舒彬 杨忠 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第18期1630-1635,共6页
目的应用流式细胞分选技术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分离检测不同鼠龄小鼠骨骼肌卫星细胞数量并观察其成肌分化能力。方法取雄性C57BL小鼠腓肠肌等组织,机械剪碎后胶原酶/分散酶联合消化,过滤离散细胞进行免疫标记染... 目的应用流式细胞分选技术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)分离检测不同鼠龄小鼠骨骼肌卫星细胞数量并观察其成肌分化能力。方法取雄性C57BL小鼠腓肠肌等组织,机械剪碎后胶原酶/分散酶联合消化,过滤离散细胞进行免疫标记染色,流式细胞仪分选CD45-/CD31-/Sca1-/ɑ7-integrin+细胞群体,培养分选细胞并进行Pax7和Desmin肌原性分子鉴定和分化诱导;观察比较青年、成年和老年小鼠骨骼肌组织中静止肌卫星细胞数量和成肌分化能力的变化。结果分选出的成年CD45-/CD31-/Sca1-/α7-integrin+细胞群体约占离散细胞总数的2%~3%,呈现Pax7、Desmin等染色阳性,经分化诱导能形成典型肌管并表达胚胎肌球蛋白重链(e MHC),青年组小鼠静止卫星细胞比例及每克肌肉内肌卫星细胞数量明显较高(P<0.05),老年组则明显下降(P<0.05),同时其肌管融合指数及大肌管比例明显减少(P<0.05)。结论基于多重免疫荧光标记的流式分选术能实现骨骼肌卫星细胞的快速高效分离,分选细胞可诱导形成肌管;老年骨骼肌组织肌卫星细胞数量与功能呈现显著下降。 展开更多
关键词 小鼠 肌卫星细胞 流式细胞分选技术 分化
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nptⅡ：：gfp在锦橙遗传转化中转化效率的研究 被引量：1
3
作者 何丹丹 邹修平 +4 位作者 解栋梁 彭爱红 许兰珍 何永睿 陈善春 《中国南方果树》 北大核心 2014年第6期1-4,23,共5页
绿色荧光蛋白基因(gfp)和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)被广泛应用于植物的遗传转化中。为了研究融合标记基因nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中的转化效率,经农杆菌介导法将CaMV35s组成型启动子驱动的nptⅡ::gfp融合标记基因表达载体pNGM和由C... 绿色荧光蛋白基因(gfp)和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)被广泛应用于植物的遗传转化中。为了研究融合标记基因nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中的转化效率,经农杆菌介导法将CaMV35s组成型启动子驱动的nptⅡ::gfp融合标记基因表达载体pNGM和由CaMV35s启动子分别驱动nptⅡ、gfp两个基因的表达载体pNPTⅡ-GF转化至锦橙上胚轴内。GFP绿色荧光检测结果显示,gfp在转nptⅡ::gfp融合基因植株中强烈表达,荧光强度与转非融合nptⅡ和gfp基因植株的表达水平相当。nptⅡ::gfp融合标记基因在锦橙上的转化效率为10.8%,与非融合nptⅡ和gfp基因的转化效率(11.0%)无明显差异。nptⅡ::gfp融合标记基因是一个有效的锦橙遗传转化筛选标记基因。 展开更多
关键词 nptⅡ::gfp融合标记基因 遗传转化 转化效率 锦橙
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抗菌肽-人溶菌酶融合基因的构建及转入锦橙后的表达分析
4
作者 解栋梁 邹修平 +4 位作者 许兰珍 何丹丹 彭爱红 何永睿 陈善春 《中国南方果树》 北大核心 2015年第2期1-4,共4页
为了研究抗菌肽和人溶菌酶对柑桔溃疡病和黄龙病等的协同抗性,利用连接多肽2A编码序列连接抗菌肽cecropin B(CB)和人溶菌酶human lysozyme(HLy)基因,构建了融合基因CB:HLy及其超量表达载体p35S::CB:HLy。利用农杆菌介导法,将该载体转化... 为了研究抗菌肽和人溶菌酶对柑桔溃疡病和黄龙病等的协同抗性,利用连接多肽2A编码序列连接抗菌肽cecropin B(CB)和人溶菌酶human lysozyme(HLy)基因,构建了融合基因CB:HLy及其超量表达载体p35S::CB:HLy。利用农杆菌介导法,将该载体转化至锦橙上胚轴。通过GUS化学染色及PCR鉴定,获得转基因植株32株。Real-time PCR证明了融合基因在转基因锦橙中得到了高效表达。本研究为柑桔溃疡病的抗性研究提供了材料。 展开更多
关键词 抗菌肽 人溶菌酶 融合基因 连接多肽2A 遗传转化
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