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白细胞介素2受体α亚基参与Jurkat细胞凋亡的调节 被引量：3
1
作者 胡晶晶 李宏帆 +3 位作者 程小款 衡凤燕 吴宁华 沈珝琲 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2001年第4期333-335,共3页
T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ... T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ECL分析发现 ,细胞内出现了细胞凋亡早期特异的多聚二磷酸腺核糖聚合酶 [Poly(ADP ribose)polymerase ,PARP]的 89kD断裂片段 ,此结果提示 ,IL 展开更多
关键词 白细胞介素2受体α亚基 多聚二磷酸腺核糖聚合酶 细胞凋亡 T淋巴细胞
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人分泌型白细胞介素2受体α链基因的克隆及其在真核细胞中的表达 被引量：3
2
作者 程小款 杜恺 +2 位作者 衡凤燕 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 1995年第5期326-332,共7页
删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打... 删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打孔及磷酸钙法将此质粒转染ＣＨＯ细胞，经Ｇ４１８筛出表达Ｎｅｏ基因的克隆２０株，通过ｍＲＮＡ狭缝杂交及ＥＬＩＳＡ检测，有５株能稳定表达分泌型α链ｍＲＮＡ及蛋白，其中４株细胞培养上清中的ＩＬ２Ｒα链的含量达１４００Ｕ／ｍｌ以上。 展开更多
关键词 白细胞介素2 受体 重组克隆 真核基因表达
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检测4种热休克基因表达水平的RT-PCR体系的建立及其应用
3
作者 李宏帆 刘兴荣 +2 位作者 衡凤燕 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期321-324,共4页
目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果... 目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果构建了用于4种热休克基因mRNA检测的内参照质粒,并经体外转录成内参照RNA(i-RNA);用于SW13细胞中结果显示:hsp70、hsp90α呈典型的热诱导表达,hsp60和hsp90β具有较高水平的组成性表达,并且呈不同程度的热诱导表达。结论新构建的RT-PCR体系可以用于检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA的表达水平。 展开更多
关键词 基因表达 热休克基因 内参照RNA 逆转录一聚合酶链反应 JURKAT细胞
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人IL-2Rα链基因负调控元件结合蛋白的分离纯化
4
作者 张玉健 邢光新 +4 位作者 莽锐 程小款 衡凤燕 吴宁华 沈 琲 《基础医学与临床》 CSCD 1999年第6期80-85,共6页
淋巴细胞表面高亲和力IL-2R的出现受IL－2Ra基因的诱导表达控制，而IL－2Ra链基因的表达受到严格的时空的调控。在IL-2Ra基因上游除存在正调控元件外还存在负调控元件（-391TCATCCCAGG-381，NRE）及其下游不完全反转重复序列（-153CCTGG... 淋巴细胞表面高亲和力IL-2R的出现受IL－2Ra基因的诱导表达控制，而IL－2Ra链基因的表达受到严格的时空的调控。在IL-2Ra基因上游除存在正调控元件外还存在负调控元件（-391TCATCCCAGG-381，NRE）及其下游不完全反转重复序列（-153CCTGGTTTGA-143NIRS）。本组曾通过紫外交联实验发现Jurkat细胞有一种蛋白质与NIRS和NRE特异结合。本文利用肝素-亲和柱层析及序列特异DNA亲和层析认1010Jurkat细胞中获得了分子量约为75kD的NRE特异结合蛋白。EMSA实验表明，纯化后的蛋白与NRE所形成的结合物能被NIRS及HIVLTR的负调控元件所竞争，提示该NRE结合蛋白不仅可能参与IL-2Ra基因的转录调控，而且可能在HIV基因表达过程中起某种作用。 展开更多
关键词 IL-2Rα链 负调控元件 结合蛋白 DNA 亲和层析
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人IL-2Rα基因在CHO细胞中的稳定整合和表达及其应用
5
作者 程小款 杜洪震 +4 位作者 张玉建 高军萍 衡凤燕 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期130-133,共4页
目的　应用本组制备的白细胞介素 2受体 (IL- 2 R) ,建立一种既安全又简便 ,并能定量检测白细胞介素2 (IL- 2 )生物活性的方法。方法　采用 Southern印迹杂交方法 ,检测重组分泌型 IL- 2 Rα亚基 (rs IL- 2 Rα)基因在高效表达的转染细... 目的　应用本组制备的白细胞介素 2受体 (IL- 2 R) ,建立一种既安全又简便 ,并能定量检测白细胞介素2 (IL- 2 )生物活性的方法。方法　采用 Southern印迹杂交方法 ,检测重组分泌型 IL- 2 Rα亚基 (rs IL- 2 Rα)基因在高效表达的转染细胞基因组中的稳定整合 ;以 Western免疫印迹法测定 rs IL- 2 Rα的相对分子质量 ,建立定量检测人 IL- 2生物活性的受体与抗体夹心酶联免疫吸附测定 (r EL ISA)方法。结果　 (1) Southern印迹分析表明 ,rs IL- 2 Rα基因已稳定整合到高表达的转染 CHO细胞基因组中 ;(2 ) rs IL- 2 Rα的相对分子质量为 40 0 0 0左右 ;(3)应用建立的r EL ISA方法测定人 IL- 2标准溶液结果表明 ,IL- 2的标准曲线范围为 31.2 5～ 5 0 0 .0 0 U (r=0 .9995 ) ;预先将山羊抗人 IL- 2 Ig G与 IL- 2保温后 ,所得标准曲线的斜率明显降低 (P<0 .0 5 )。结论　与传统测定 IL- 2的方法相比 ,用rs IL- 2 Rα建立的受体 -抗体夹心 r EL ISA方法不仅具有准确、特异性强及操作简便的特点 ,而且 ,所得结果直接反映了被测样品中具有结合 IL- 2 R活性的 IL- 展开更多
关键词 白细胞介素-2 IL-2RΑ CHO细胞 稳定整合
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白细胞介素2受体α基因表达中两组近端启动子活性的研究
6
作者 程小款 衡凤燕 +2 位作者 刘觉辉 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期40-40,共1页
关键词 启动子 转录调控 白细胞介素2受体α基因 基因表达
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