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甲型H1N1流感病毒HA基因RT-LAMP检测方法的建立与初步应用 被引量：9
1
作者 王翔 张骞 +6 位作者 张钫 袁武梅 麻粉莲 薛鹏浩 赵智慧 郑文芝 郑丽舒 《生物技术通讯》 CAS 2011年第5期696-699,708,共5页
目的:建立反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)检测甲型H1N1流感病毒HA基因的方法,并用于检测临床样本。方法:通过在线软件Primer Explorer V4设计H1N1 HA基因的RT-LAMP引物,建立RT-LAMP检测方法,并评价其灵敏度和特异度。结果:与传统RT-... 目的:建立反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)检测甲型H1N1流感病毒HA基因的方法,并用于检测临床样本。方法:通过在线软件Primer Explorer V4设计H1N1 HA基因的RT-LAMP引物,建立RT-LAMP检测方法,并评价其灵敏度和特异度。结果:与传统RT-PCR方法相比,RT-LAMP检测方法具备更高的灵敏度,达到10个拷贝,并且具有良好的特异性;在76份呼吸道感染儿童的咽拭子标本中检测到2份阳性,与RT-PCR方法检测结果相同。结论:建立的H1N1 RT-LAMP检测方法灵敏特异,简单快速,具备H1N1现场检测应用前景。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 RT-PCR RT-LAMP
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人博卡病毒LAMP检测方法的建立及初步应用 被引量：4
2
作者 王翔 许信刚 +5 位作者 张骞 张钫 袁武梅 麻粉莲 薛鹏浩 郑丽舒 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期308-310,共3页
目的 建立环介导等温扩增技术（LAMP）检测人博卡病毒（Human bocavirus,HBoV）基因的方法,并用于检测临床样本.方法 通过在线软件设计工具Ptimer Explorer V4设计HBoV NP-1基因的LAMP引物,建立LAMP检测方法,并评价其灵敏度和特异度.结... 目的 建立环介导等温扩增技术（LAMP）检测人博卡病毒（Human bocavirus,HBoV）基因的方法,并用于检测临床样本.方法 通过在线软件设计工具Ptimer Explorer V4设计HBoV NP-1基因的LAMP引物,建立LAMP检测方法,并评价其灵敏度和特异度.结果 与传统PCR方法相比,LAMP法检测灵敏度更高,可达到10拷贝,特异性较强;在76份呼吸道感染儿童的咽拭子标本中检测到5份阳性.结论 建立HBoV LAMP检测方法灵敏特异,简单快速,有望进行临床检测HBoV. 展开更多
关键词 细小病毒科 基因 核酸扩增技术
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氟苯尼考微囊在猪体内的药物动力学研究 被引量：3
3
作者 胡亚南 李引乾 +5 位作者 张凤凤 薛鹏浩 赵建乐 孔蓓 卢怡竹 赵瑞娇 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期24-29,共6页
为了给兽医临床合理用药提供依据,分析氟苯尼考微囊(Florfenicol Microcapsules,FM)和氟苯尼考原粉(Florfenicol,FF)在猪体内的药物代谢动力学过程。猪单剂量分别灌服FF和FM 30 mg.kg-1,36 h不同时间16次前腔静脉采血,高效液相色谱法测... 为了给兽医临床合理用药提供依据,分析氟苯尼考微囊(Florfenicol Microcapsules,FM)和氟苯尼考原粉(Florfenicol,FF)在猪体内的药物代谢动力学过程。猪单剂量分别灌服FF和FM 30 mg.kg-1,36 h不同时间16次前腔静脉采血,高效液相色谱法测定血药质量浓度。结果表明,FM和FF在猪体内的药物动力学配置均符合有吸收因素一室开放模型,其药-时曲线最佳方程分别为ρFM=3.772 7(e-0.047t-e-0.847 7t)和ρFF=0.375 9(e-0.258 1t-e-4.670 9t)。吸收半衰期(t1/2Ka)分别为(0.944 6±0.507 5)h,(0.155 0±0.030 1)h;消除半衰期(t1/2Ke)分别为(15.214 0±3.024 9)h,(2.694 5±0.169 5)h;药-时曲线下面积(AUC)为(77.3111±13.312 7)mg.L-1.h,(1.374 7±0.606 0)mg.L-1.h;峰质量浓度(ρmax)为(2.937 1±0.232 2)mg.L-1,(0.298 3±0.023 9)mg.L-1;达峰时间(tmax)为(3.951 0±1.533 9)h,(0.675 3±0.104 6)h。结果表明,氟苯尼考微囊口服给药吸收较慢但完全,达峰时间较长,消除缓慢,能够发挥长效作用。 展开更多
关键词 氟苯尼考微囊 猪 药物动力学
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恩诺沙星微囊在猪体内的药物动力学 被引量：2
4
作者 赵瑞娇 胡亚南 +6 位作者 张凤凤 严元宠 赵建乐 薛鹏浩 孔蓓 卢怡竹 李引乾 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期11-15,共5页
为了给兽医临床合理用药提供依据,分析恩诺沙星微囊(Enrofloxacin Microcapsules,EM)和恩诺沙星原粉(Enrofloxacin,ENR)在猪体内的药物代谢动力学过程。猪单剂量分别灌服EM和ENR30mg.kg-1,72h内16次前腔静脉采血,高效液相色谱法(HPLC)... 为了给兽医临床合理用药提供依据,分析恩诺沙星微囊(Enrofloxacin Microcapsules,EM)和恩诺沙星原粉(Enrofloxacin,ENR)在猪体内的药物代谢动力学过程。猪单剂量分别灌服EM和ENR30mg.kg-1,72h内16次前腔静脉采血,高效液相色谱法(HPLC)测定猪血浆中ENR的质量浓度。结果表明,6头猪灌服EM和ENR后,其药动学配置均符合有吸收因素二室药代动力学模型。最佳药时曲线方程为ρ(EM)=11.326 3e-0.353 8t+5.420 6e-0.066 1t-16.746 9e-0.979 8t和ρ(ENR)=11.251 1e-0.934 7t+5.330 1e-0.079 9t-16.581 2e-2.965 7t。恩诺沙星微囊在猪体内的吸收相半衰期(t1/2ka)为(0.769 5±0.250 9)h,分布相半衰期(t1/2a)为(2.160 3±0.704 1)h,消除相半衰期(t1/2β)为(10.522 4±0.719 5)h,药时曲线下面积(AUC)为(92.924 3±5.308 4)mg.L-1.h。说明恩诺沙星微囊在猪体内吸收迅速,消除相对较慢。 展开更多
关键词 恩诺沙星微囊 猪 药动学 高效液相色谱法
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人博卡病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备 被引量：2
5
作者 赵智慧 薛鹏浩 +5 位作者 魏建民 张骞 郑文芝 麻粉莲 袁武梅 郑丽舒 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期63-65,共3页
目的表达纯化人博卡病毒（human Bocavirus，HBoV）VP2蛋白，采用杂交瘤方法制备抗HBoVVP2蛋白的单克隆抗体。方法应用原核表达载体pET-30a和大肠埃希菌表达VP2蛋白，并用固定化金属亲和层析，纯化后的蛋白作为抗原免疫BALB／c小鼠，利... 目的表达纯化人博卡病毒（human Bocavirus，HBoV）VP2蛋白，采用杂交瘤方法制备抗HBoVVP2蛋白的单克隆抗体。方法应用原核表达载体pET-30a和大肠埃希菌表达VP2蛋白，并用固定化金属亲和层析，纯化后的蛋白作为抗原免疫BALB／c小鼠，利用杂交瘤技术和间接ELASA方法筛选阳性的杂交瘤细胞，并对单克隆抗体进行分型检测和滴度测定。结果表达并纯化获得了重组HBoVVP2蛋白，利用杂交瘤技术得到单克隆IgG抗体，抗体效价达到1：4×10^5。结论利用HBoVVP2蛋白免疫制备了单克隆抗体，并具有较高的效价。本研究为快速诊断和研究HBoV打下基础。 展开更多
关键词 人博卡病毒 蛋白质VP2 抗体 单克隆
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重组人干扰素λ1的表达、纯化及生物活性研究 被引量：1
6
作者 张钫 郑丽舒 +4 位作者 袁武梅 王翔 薛鹏浩 麻粉莲 张骞 《生物技术通讯》 CAS 2010年第3期310-314,共5页
目的:利用大肠杆菌系统表达重组人Ⅲ型干扰素λ1(rhIFN-λ1),并进行纯化,以比较其与重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)生物学活性的差异。方法:密码子优化的rhIFN-λ1基因与pET-44a载体连接构建原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表... 目的:利用大肠杆菌系统表达重组人Ⅲ型干扰素λ1(rhIFN-λ1),并进行纯化,以比较其与重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)生物学活性的差异。方法:密码子优化的rhIFN-λ1基因与pET-44a载体连接构建原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物经系列层析纯化;采用细胞病变抑制法比较纯化的rhIFN-λ1与rhIFN-α2b、市售rhIFN-λ1的抗病毒活性;采用MTS法比较这些干扰素的抗肿瘤细胞增殖活性。结果:基因优化后的rhIFN-λ1在大肠杆菌中得以高效表达,用所建立的纯化工艺可制备得到纯度达95.7%的rhIFN-λ1;rhIFN-λ1的抗病毒比活性为3.2×105 U/mg,比市售rhIFN-λ1的比活性(1.1×105 U/mg)略高,抗肿瘤细胞增殖活性为rhIFN-α2b的1.7倍。结论:获得的rhIFN-λ1具有剂量依赖的抗病毒活性和抗增殖活性,其抗病毒活性比市售rhIFN-λ1略高,抗细胞增殖活性高于rhIFN-α2b,提示rhIFN-λ1有较大的应用前景。 展开更多
关键词 重组人干扰素λ1 表达 纯化 抗病毒活性 抗增殖活性
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人博卡病毒TaqMan探针实时定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：1
7
作者 薛鹏浩 张淼涛 +5 位作者 张骞 张钫 袁武梅 麻粉莲 王翔 郑丽舒 《生物技术通讯》 CAS 2010年第6期818-822,共5页
目的:建立人博卡病毒(HBoV)核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时定量PCR检测方法,并对临床样本进行检测。方法:比对编码HBoV非结构蛋白NP-1的基因序列,选取其保守片段设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并与传统PCR方法进... 目的:建立人博卡病毒(HBoV)核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时定量PCR检测方法,并对临床样本进行检测。方法:比对编码HBoV非结构蛋白NP-1的基因序列,选取其保守片段设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并与传统PCR方法进行比较,然后分别对两者的灵敏性、特异性、稳定性及临床样本检验的适用性等进行评价。结果:所建立的实时定量PCR检测方法可用于HBoV的特异性检测;相对于传统PCR所达到的250拷贝/反应的检测灵敏度,实时定量PCR的检测灵敏度可高达10拷贝/反应,检测范围为109～101拷贝/反应,且具有良好的特异性和重复性;初步用于76份临床呼吸道标本检测,检出阳性5例,高于普通PCR方法(3/76)。结论:建立了HBoV TaqMan探针实时定量PCR检测方法,并可用于临床鼻咽拭子样本的检测,为开展HBoV流行病学监测及早期临床诊断提供了技术手段。 展开更多
关键词 人博卡病毒 TAQMAN探针 实时定量PCR
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呼吸道合胞病毒TaqMan探针实时定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：1
8
作者 郑文芝 张骞 +4 位作者 魏建民 薛鹏浩 王翔 赵智慧 郑丽舒 《生物技术通讯》 CAS 2012年第2期211-214,共4页
目的：建立呼吸道合胞病毒（RSV）核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法，并对临床样本进行检测。方法：比对编码RSV非编码蛋白的基因序列，选取其保守片段设计引物和探针，建立实时荧光定量RT-PCR检测方法，并与传... 目的：建立呼吸道合胞病毒（RSV）核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法，并对临床样本进行检测。方法：比对编码RSV非编码蛋白的基因序列，选取其保守片段设计引物和探针，建立实时荧光定量RT-PCR检测方法，并与传统RT-PCR方法进行比较，分别对两者的灵敏性、特异性、重复性及临床样本检验的适用性进行评价。结果：所建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法可用于RSV的特异性检测。相对于传统RT-PCR方法100拷贝，反应的检测灵敏度，实时荧光定量RT-PCR的检测灵敏度达到10拷贝／反应，检测范围为1010-101拷贝／反应，且具有良好的特异性和重复性。从169份临床呼吸道标本中检出RSV阳性40例，高于普通PCR方法（31／169）。结论：建立了RSV的TaqMan探针实时定量PCR检测方法，并可用于临床鼻咽拭子样本的检测，在临床上具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 TAQMAN探针 实时定量RT-PCR
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