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一种快速高效制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法 被引量：13
1
作者 蔡顺风 何欣怡 +4 位作者 何祥康 邱海洪 李光才 何永强 鲁兴萌 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1019-1024,共6页
家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性... 家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性和所得总蛋白的差异性,并对提取蛋白进行双向电泳试验。结果表明:使用玻璃珠破碎法对微孢子虫孢子壁的破碎率可达到90%以上,基因组DNA得率约为7.65 fg/粒,总蛋白得率约为788.3 fg/粒,均显著高于常用的发芽法和液氮冻融研磨法的得率。双向电泳结果显示玻璃珠破碎法能有效提取家蚕微孢子虫总蛋白,经考马斯亮蓝染色可检测到约350个蛋白点,蛋白信息丰富,可进一步用于质谱分析。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 核酸 蛋白 提取方法 珠磨式研磨器 双向电泳
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基于养蚕环境样本检测的流行病学调查方法 被引量：6
2
作者 鲁兴萌 孟祥坤 +8 位作者 沈柏民 朱丽君 蔡顺风 诸葛翀 彭建学 马焕艳 李明乾 何欣怡 赵新华 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期913-920,共8页
家蚕病害流行规律是蚕病防控的技术基础和依据。根据家蚕病原微生物为归因危险度极高流行因子的特点,设计了分层抽样法和光学显微镜检测方案,对12 059个养蚕环境样本进行病原微生物检测和流行病学的过程性分析。结果表明:病原微生物的... 家蚕病害流行规律是蚕病防控的技术基础和依据。根据家蚕病原微生物为归因危险度极高流行因子的特点,设计了分层抽样法和光学显微镜检测方案,对12 059个养蚕环境样本进行病原微生物检测和流行病学的过程性分析。结果表明:病原微生物的检出率在不同蚕区和不同蚕室环境样本间存在较大差异,不同养蚕技术水平农户部分蚕室环境样本间的差异显著(P<0.05);在养蚕前的清洁消毒方面,养蚕技术水平较高的农户与养蚕技术水平较低的农户间并不存在明显差异;在家蚕饲养过程及上蔟后的病源物扩散管理方面,养蚕技术水平较高的农户比养蚕技术水平较低的农户具有更高的管理水准。由此认为:病源物扩散控制是目前家蚕病害防治中需要得到进一步重视的工作,重视家蚕饲养过程中的病害防控技术实施可以减少病害流行。桑树害虫、蚕沙坑、蚕室内地面和蚕室前地面是病源物扩散控制及清洁消毒技术实施的重要靶标或范围。 展开更多
关键词 家蚕流行病 环境样本 分层抽样 归因危险度
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蚕病检测中免疫学技术的研究与应用 被引量：5
3
作者 鲁兴萌 蔡顺风 +2 位作者 邱海洪 孙文静 何永强 《蚕桑通报》 2011年第3期1-4,共4页
本文介绍了有关应用免疫学技术蚕病进行检测的研究。根据已有研究和养蚕业的特点,认为家蚕微粒子病的检测是一项非常值得研究的技术。家蚕微粒子病检测的技术根本是解决基于实际应用条件下的灵敏度和特异性问题。
关键词 蚕病 检测 免疫学技术 灵敏度 特异性
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家蚕胚胎期感染微粒子病的个体对健康群体的影响 被引量：3
4
作者 鲁兴萌 呼思瑞 +12 位作者 邵勇奇 林秀秀 蔡顺风 傅张梧可 李明乾 何欣怡 邱海洪 马焕艳 陆颖 刘涵 何祥康 李光才 陈勃生 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期68-76,共9页
胚胎期感染家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)的家蚕个体,其携带Nb在健康家蚕群体中的传播扩散规律是流行病学需要解决的问题,也是家蚕微粒子病检验技术的科学基础。采用流行病学的方法,通过混育和个体育试验,研究胚胎期感染Nb的家蚕个... 胚胎期感染家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)的家蚕个体,其携带Nb在健康家蚕群体中的传播扩散规律是流行病学需要解决的问题,也是家蚕微粒子病检验技术的科学基础。采用流行病学的方法,通过混育和个体育试验,研究胚胎期感染Nb的家蚕个体对健康群体的影响。研究结果表明:胚胎期感染Nb的家蚕中,存在可以完成1个世代(即可以发育到化蛾产卵)的个体;胚胎期被感染的家蚕个体在健康家蚕群体中的感染扩散规律为"连续感染传播扩散"模式;病害在家蚕健康群体的传播扩散与胚胎期感染个体数量和感染程度有关,在幼虫期低剂量感染情况下,感病个体混入率≥5%对群体的化蛾率有明显影响,感病个体混入率≤2%对群体的化蛾率未见明显影响。上述结果可供感染Nb的家蚕子代对健康群体影响的风险阈值确定,以及家蚕微粒子病检验判别标准的评价和检验技术研究参考。 展开更多
关键词 家蚕 家蚕微孢子虫 胚胎感染 幼虫饲养 感染扩散 化蛾率
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破碎法提取家蚕微孢子虫孢子核酸的PCR检测灵敏度试验 被引量：3
5
作者 李光才 蔡顺风 +6 位作者 何祥康 何欣怡 马焕艳 孟祥坤 邱海洪 何永强 鲁兴萌 《蚕桑通报》 2011年第4期8-11,共4页
蚕微粒子病检测技术是该病防治中的一项重要技术,本文在通过破碎法提高模板核酸获取量的基础上,对纯化家蚕微粒子虫孢子的PCR检测灵敏度进行了测试。提取核酸-模板稀释测试12对引物的灵敏度中有4对引物达到0.05粒(102粒/mL)、4对引物5粒... 蚕微粒子病检测技术是该病防治中的一项重要技术,本文在通过破碎法提高模板核酸获取量的基础上,对纯化家蚕微粒子虫孢子的PCR检测灵敏度进行了测试。提取核酸-模板稀释测试12对引物的灵敏度中有4对引物达到0.05粒(102粒/mL)、4对引物5粒(104粒/mL)、1对引物50粒(105粒/mL)、2对引物500粒(106粒/mL)和1对引物5000粒(107粒/mL)。两对灵敏度较高的引物(NbZS004F/NbZS004R和NbZS007F/NbZS007R)灵敏度临界值(0.05粒和0.005粒)的PCR重复检测率均为90%。纯化家蚕微粒子虫孢子稀释后提取核酸再进行PCR检测试验中,NbZS004F/NbZS004R和NbZS007F/NbZS007R的灵敏度分别为:5粒(104粒/mL)和0.5粒(103粒/mL)。 展开更多
关键词 家蚕微粒子病 孢子 聚合酶链式反应 检测 灵敏度
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粉纹夜蛾培养细胞对家蚕微孢子虫的吞噬及与孢壁蛋白的关系 被引量：2
6
作者 吴晓霞 冯真珍 +3 位作者 邱海洪 蔡顺风 李明乾 鲁兴萌 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期447-451,共5页
解明家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)入侵宿主细胞的相关因素,有助于深入研究Nb对家蚕的侵染机制。利用激光共聚焦显微镜观察Nb孢子接种粉纹夜蛾(Trichoplusiani,Tn)培养细胞48h后孢子的分布状态和培养细胞的生长情况,并对接种Nb孢子... 解明家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)入侵宿主细胞的相关因素,有助于深入研究Nb对家蚕的侵染机制。利用激光共聚焦显微镜观察Nb孢子接种粉纹夜蛾(Trichoplusiani,Tn)培养细胞48h后孢子的分布状态和培养细胞的生长情况,并对接种Nb孢子后的Tn培养细胞培养物总蛋白进行SDS-PAGE分析,证实经0.2mol/LKOH预处理的Nb孢子可以被Tn培养细胞所吞噬。对Nb孢子孢壁蛋白的SDS-PAGE分析显示,Nb孢子经KOH预处理后,大小为80kD和12kD的孢壁蛋白带缺失或明显减弱,30kD的孢壁蛋白带丰度降低。推测KOH预处理使Nb孢子部分孢壁蛋白被分解(部分或完全)或使蛋白结构发生变化,由此影响了Nb孢子与Tn培养细胞的相互作用关系,有利于Tn培养细胞对Nb孢子的吞噬。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 粉纹夜蛾细胞系 吞噬 孢壁蛋白 激光共聚焦显微镜观察 SDS—PAGE电泳
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家蚕传染性软化病病毒(桐乡株)5′端非编码区基因的克隆及序列分析 被引量：1
7
作者 李明乾 苘娜娜 +3 位作者 蔡顺风 陈孝学 金伟 鲁兴萌 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期84-89,共6页
为了探讨家蚕传染性软化病病毒的复制与翻译机制,利用cDNA 5′末端快速扩增(5′-RACE)技术获得了家蚕传染性软化病病毒桐乡分离株(Bombyxmoriinfectious flacherie virus,BmIFV-2)的5′端非编码区(non-coding region,NCR)。序列比较分... 为了探讨家蚕传染性软化病病毒的复制与翻译机制,利用cDNA 5′末端快速扩增(5′-RACE)技术获得了家蚕传染性软化病病毒桐乡分离株(Bombyxmoriinfectious flacherie virus,BmIFV-2)的5′端非编码区(non-coding region,NCR)。序列比较分析发现:BmIFV-2的5′-NCR由155个核苷酸组成,A+U含量达60.64%,其中包含1个起始密码子AUG;与坂城分离株(BmIFV-1)的5′-NCR相比,BmIFV-2的5′-NCR在5′末端缺少1个核苷酸,但核苷酸识别率为100%(即单核苷酸变异率为0),而且这个缺少的核苷酸并不影响其5′-NCR的二级结构。与已经证实具有内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)活性的Iflavirus属的2种病毒EoPV(Ectropis obliquapicor-na-like virus)和VDV-1(Varroa destructorvirus 1)的5′-NCR相比,BmIFV的5′-NCR可能也具有IRES活性。 展开更多
关键词 家蚕 传软性软化病毒 5′端非编码区 序列分析
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一种基于蛋白质组的方法鉴定家蚕微孢子虫中宿主——寄生虫相关的一些主要结构蛋白
8
作者 Wang JY 蔡顺风（译） 《蚕桑通报》 2008年第3期37-37,共1页
家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）引起的家蚕微粒子病给全世界养蚕业带来巨大的经济损失。这种与真菌相关的属于微孢子门的寄生物以孢子形式专性寄生在细胞内，目前在分子水平上对宿主与寄生物间相互关系还知之甚少。已有研究表明，微... 家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）引起的家蚕微粒子病给全世界养蚕业带来巨大的经济损失。这种与真菌相关的属于微孢子门的寄生物以孢子形式专性寄生在细胞内，目前在分子水平上对宿主与寄生物间相互关系还知之甚少。已有研究表明，微孢子虫的大多数孢子壁蛋白和极管蛋白与侵染宿主有关。本研究应用基于蛋白质组学的方法，鉴定一些家蚕微孢子虫的细胞结构蛋白。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 蛋白质组学 结构蛋白 寄生虫 宿主 鉴定 家蚕微粒子病 经济损失
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